一種鼠尾藻多糖的提取方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及海藻類多糖的提取技術領域，尤其涉及一種鼠尾藻多糖的提取方法。
【背景技術】
[0002]鼠尾藻隸屬圓子綱、墨角藻目、馬尾藻科、馬尾藻屬，生長在中潮帶巖石上或石沼中，廣泛分布于我國沿海地區，并可進行大面積養殖，原料豐富，被收載于《中國海洋藥物辭典》。因其具有軟堅散結、利尿消腫、清熱化痰之功效；同時具有較全面的營養價值，已被應用于醫藥、保健、水產養殖及化學工業等行業中，有許多可開發的潛力。
[0003]鼠尾藻富含鼠尾藻多糖，鼠尾藻多糖能促進人粒細胞超氧陰離子自由基的釋放，提高超氧化物歧化酶活性。目前關于鼠尾藻多糖提取方法的研究不多，主要采用的是熱水浸提法，該方法存在耗時、耗能、得率低等缺點。
【發明內容】
[0004]因此，針對以上內容，本發明提供一種鼠尾藻多糖的提取方法，解決現有技術中的提取方法耗時、耗能、得率低的問題。
[0005]為達到上述目的，本發明是通過以下技術方案實現的:一種鼠尾藻多糖的提取方法，包括以下處理步驟，
a、恒溫水浴處理:將鼠尾藻和稀酸溶液以重量比為1:120，在恒溫水浴鍋97°C水浴200?220min，去除固體雜質，得到提取液，提取液用4mol/L的NaOH中和至pH=7.0;
b、提取液預處理:將提取液進行濃縮、冷卻至室溫，加4倍體積無水乙醇醇沉，置4°C冰箱過夜，離心棄上清，加蒸餾水溶解沉淀，對得到的溶液反復凍融，離心除雜，冷凍條件為-20°C，溶解條件為50°C，重復7次，然后采用冷凍干燥機干燥，得到粗品1;
c、粗品1脫蛋白:粗品1按重量比1:25溶于蒸餾水，得到糖液，然后加入糖液總體積1/4體積的sevage試劑，充分震蕩3h，離心取上層糖液，重復12次;對糖液凍融，離心除去雜質，冷凍條件為_20°C，溶解條件為50°C，重復5次，然后采用冷凍干燥機干燥，得到粗品2;
d、對得到的粗品2進行分離純化。
[0006]進一步的，步驟a的稀酸溶液為鹽酸。
[0007]進一步的，步驟b總采用旋轉蒸發儀進行濃縮，所述旋轉蒸發儀的溫度控制在70?75。。。
[0008]進一步的，步驟c所述的sevage試劑為氯仿與正丁醇按重量比4:1混合而成。
[0009]進一步的，步驟d的分離純化方法具體為:(1)凝膠的預處理:將凝膠置于真空干燥器中，連接循環水式真空栗，進行間歇抽真空，抽氣30?35分鐘，休息5-10分鐘，并用玻璃棒攪拌，使其松散，使凝膠里的氣體可以全部抽出；(2)裝柱與平衡:將層析柱夾持在鐵架臺上，保持垂直，從柱頂端倒入平衡緩沖液，待氣泡排除后，使蒸餾水在柱內保持3?5cm高度，關閉柱出口，用玻璃棒輕輕攪勻凝膠懸浮液，待凝膠沉淀，打開恒流栗，調節流速在60?65mL/h，用2000?2100 mL的蒸餾水平衡，使之緊密結實；(3)上樣檢測與收集:取500mg粗品2溶于lOmL蒸餾水，將柱上層緩沖液吸出與凝膠表層持平后，吸取樣品溶液沿層析柱內壁同一方向旋轉緩慢加入，使樣品在膠柱表面分布均勻;加完后，打開恒流栗，使樣液進入柱體，待柱體上表面剩余1?2mm樣液時，沿層析柱內壁同一方向，旋轉緩慢加入蒸餾水，將壁上的粘著液洗下，然后繼續按此方法加入蒸餾水至距膠柱上表面約8 cm高度;封蓋柱體，調節流速60?65 ml/h，先后分別用蒸饋水洗脫、lmol/L NaCl線性梯度洗脫；設定12 min收集一管，每管12 ml，自動部分收集器收集100管；用苯酚-硫酸法測定糖含量分布情況，用紫外分光光度法測定蛋白質含量分布情況，記錄數據并制作洗脫分布圖，根據波峰范圍部分收集洗脫液；用截留分子量3500的透析袋對收集液自來水流水透析24h，然后蒸餾水透析24h，透析完成后進行旋轉蒸發濃縮，冷凍干燥機凍干，即得到鼠尾藻多糖。
[0010]通過采用前述技術方案，本發明的有益效果是:本發明的鼠尾藻多糖的提取方法，包括將鼠尾藻與稀酸混溶恒溫水浴，得到提取液，對提取液進行預處理得到粗品1，再對粗品1進行脫蛋白得到粗品2，然后分離純化，上述方法提取鼠尾藻多糖不耗時，節能，且多糖的得率高，提取的多糖具有較強的抗氧化活性和癌細胞生長抑制作用。
【具體實施方式】
[0011]以下將結合具體實施例來詳細說明本發明的實施方式，借此對本發明如何應用技術手段來解決技術問題，并達成技術效果的實現過程能充分理解并據以實施。
[0012]若未特別指明，實施例中所采用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段，所采用的試劑和產品也均為可商業獲得的。所用試劑的來源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現時標明。
[0013]本發明的實施例為:
一種鼠尾藻多糖的提取方法，包括以下處理步驟:
a、恒溫水浴處理:鼠尾藻和稀酸溶液(用鹽酸溶液調節pH=2)以料液比為1:120，在恒溫水浴鍋97°C水浴210min，除去雜質，得到提取液，提取液用4mol/L的NaOH中和至pH為7.0;
b、提取液預處理:提取液通過旋轉蒸發儀70°C濃縮，待濃縮液冷卻至室溫，加4倍體積無水乙醇醇沉，置4°C冰箱過夜，離心棄上清，加蒸餾水溶解沉淀，對得到的溶液反復凍融，離心除去雜質(3500轉，lOmin)，冷凍條件為-20°C，溶解條件為50°C，重復7次，然后采用冷凍干燥機干燥，得到粗品1;
c、粗品1脫蛋白:粗多糖按照1:25溶于蒸餾水，得到糖液，然后加入糖液總體積1/4體積的sevage試劑(氯仿:正丁醇=4:1)，充分震蕩3h,離心(4000轉，5min)取上層糖液，重復12次;對糖液凍融，離心除去雜質(3500轉，lOmin)，冷凍條件為_20°C，溶解條件為50°C，重復5次，然后采用冷凍干燥機干燥，得到粗品2;
d、柱層析分離純化粗品2:
(1)DEAE-SepharoseCL-6B凝膠的預處理:將凝膠置于真空干燥器中，連接循環水式真空栗，進行間歇抽真空，抽氣30分鐘，休息5鐘，并用玻璃棒攪拌，使其松散，使凝膠里的氣體可以全部抽出；如果凝膠中藏有氣體，會影響多糖樣品分離純化的效果；
(2)裝柱與平衡:將層析柱夾持在鐵架臺上，保持垂直:從柱頂端倒入平衡緩沖液(蒸餾水)，以去除死角及出口管內的空氣，待氣泡排除后，使蒸餾水在柱內保持3cm高度，關閉柱出口 ；用玻璃棒輕輕攪勻凝膠懸浮液，通過玻璃棒將凝膠懸浮液引流入柱，從柱入口沿柱內壁加入凝膠懸浮液，避免產生氣泡;裝柱直徑:4.6