鹿茸蛋白提取物及其藥學用圖
【專利說明】
[0001] 本申請要求相同申請人于2015年7月13日提交的中國發明專利申請號為 201510408556. 9，題為"鹿茸提取物的制備方法及其相關產品"的發明專利申請的優先權。
技術領域
[0002] 本申請涉及一種中藥材提取物及其藥學方面用途，具體為一種鹿茸蛋白提取物及 其制藥用途。
【背景技術】
[0003] 鹿茸為脊索動物門哺乳綱鹿科的動物梅花鹿或馬鹿的雄鹿未骨化密生茸毛的幼 角。鹿茸始載于《神農本草經》，列為中品，是我國的傳統名貴中藥之一。性溫，味甘、咸入 肝、腎經。功能主治壯元陽，補氣血，益精髓，強筋骨。
[0004] 鹿茸是哺乳動物中唯一具有完全再生能力的附屬器官，在其生長期間以每天2cm 的速度生長，而不會形成腫瘤。因此我們推測鹿茸中含有促進組織再生的物質。現代藥理 研究證實，鹿茸中蛋白類成分高達55. 26%，但由于檢測方法的限制對鹿茸蛋白口服后的藥 理作用的研究有限。
[0005] 心肌梗死是導致突然死亡的主要原因之一。其治療原則包括保護和維持心臟功 能，挽救瀕死心肌，防止梗死區擴大，縮小心肌缺血范圍，處理并發癥。數年來，中藥治療心 血管疾病的開發及應用對心血管疾病的防治顯示出良好的前景。鹿茸秉承純陽之實質，富 含生發之氣，生精補髓，益氣強智，養血壯陽，強筋健骨，治一切虛損，可用來治療神經衰弱、 貧血癥、心功能減退、心臟功能減弱等疾病。已有研究證明，鹿茸提取物可提高缺血心肌組 織S0D活性、降低MDA含量。鹿茸醇提物有較好的抗心率失常作用，改善左室的收縮和舒張 功能。然而鹿茸蛋白混合物的心肌損傷保護作用目前研究較少。本實驗從減小心梗面積， 挽救瀕死心肌的角度出發，對鹿茸蛋白混合物治療小鼠心肌缺血的作用進行了研究。
【發明內容】
[0006] 本發明一方面提供了一種鹿茸蛋白提取物。本發明所述的鹿茸蛋白提取物通過 下述步驟獲得：1)將鹿茸進行粉碎，得到鹿茸粉碎物；用水浸提所述鹿茸粉碎物，收集水 溶性物質得到鹿茸水溶性提取物；2)對所述鹿茸水溶性提取物用水進行透析至pH值為 6. 5-8. 5 (如7. 0)，結束透析，得到所述鹿茸蛋白提取物。
[0007] 本發明所述的鹿茸蛋白提取物包含至少157種蛋白，通過對蛋白的功能和作用分 析研究，可以把這157種蛋白分為如下幾類：鈣結合蛋白4個，細胞粘附分子3個，細胞連 接蛋白2個，分子伴侶3個，細胞骨架蛋白9個，防御/免疫蛋白6個，酶調節劑14個，細胞 外基質蛋白7個，水解酶15個，激酶6個，連接酶3個，裂解酶7個，膜轉運蛋白2個，核酸 結合蛋白10個，氧化還原酶10個，磷酸酶1個，蛋白酶6個，受體15個，信號分子9個，貯 藏蛋白1個，結構蛋白1個，表面活性劑2個，轉錄因子14個，傳輸/載體蛋白8個，轉移酶 11個，跨膜受體調節/接頭蛋白5個，轉運體9個。這157種蛋白的名稱及GI號見下文表 1-表27,蛋白的功能不是唯一的，一種蛋白可能同時具有兩種或兩種以上的功能。其中與 發育和繁殖相關蛋白共有15個，如表28所示。
[0008] 表 1、|丐結合蛋白（Calcium-bindingprotein)
[0009]
[0010] 表 2、細胞粘附分子（Celladhesionmolecule)
[0013] 表 3、細胞連接蛋白（Celljunctionprotein)
[0014]
[0015] 表 4、分子伴侶（Molecularchaperones)
[0016]
[0017] 表 5、細胞骨架蛋白（Cytoskeletalprotein)
[0018]
[0019] 表 6、防御 / 免疫蛋白（Defense/immunityprotein)
[0020]
[0021] 表 7、酶調節劑（Enzymemodulator)
[0022]
[0023] 表 8、細胞外基質蛋白（Extracellularmatrixprotein)
[0024]
[0025] 表 9、水解酶（Hydrolase)
[0028] 表 10、激酶（Kinase)
[0029]
[0030] 表 11、連接酶（Ligase)
[0031]
[0032] 表 12、裂解酶（Lyase)
[0033]
[0034] 表I3、膜轉運蛋白（Membranetrafficprotein)
[0035]
[0036] 表 14、核酸結合蛋白（Nucleicacidbindingprotein)
[0037]
[0038] 表 15、氧化還原酶（Oxidoreductase)
[0039]
[0040] 表 16、磷酸酶（Phosphatase)
[0041]
[0042] 表 17、蛋白酶（Protease)
[0043]
[0044] 表 18、受體（Receptor)
[0047] 表 19、信號分子（Signalingmolecule)
[0048]
[0049] 表 20、|C藏蛋白（Storageprotein)
[0050]
[0051] 表 21、結構蛋白（Structuralprotein)
[0054] 表 22、表面活性劑（Surfactant)
[0055]
[0056] 表 23、轉錄因子（Transcriptionfactor)
[0057]
[0058] 表 24、傳輸 / 載體蛋白（Transfer/carrierprotein)
[0059]
[0060] 表 25、轉移酶（Transferase)
[0061]
[0062] 表 26、跨膜受體調節蛋白 / 接頭蛋白（Transmembranereceptoregulatory/ adaptorprotein)
[0063]
[0064] 表 27、轉運體（Transporter)
[0065]
[0066]
[0067] 表28、與發育和繁殖相關蛋白（developmentalprocessandreproduction protein)
[0068]
[0069] 另一方面，本發明提供了所述鹿茸蛋白提取物的制備方法，包括：
[0070] 1)將鹿茸進行粉碎，得到鹿茸粉碎物；用水浸提所述鹿茸粉碎物，收集水溶性物 質得到鹿茸水溶性提取物；
[0071] 2)對所述鹿茸水溶性提取物用水進行透析至pH值為6. 5-8. 5(如7. 0)，結束透 析，得到所述鹿茸蛋白提取物。
[0072] 上述方法中，所述鹿鸞粉碎物的粒徑可為50μm-100μm，具體可為75μm。
[0073] 上述方法中，所述用水浸提時水的pH值為3-4(如3. 5)，所述水的pH值可通過向 水中加入冰醋酸進行調節。
[0074] 上述方法中，所述用水浸提為在2-6°C(如4°C)進行20-26h(如24h)。
[0075] 上述方法中，所述鹿茸粉碎物和水的質量比可為1 : (4-6)，具體可為1 : 5,所述 鹿茸的質量為鮮重。
[0076] 上述方法中，所述鹿茸可為新鮮的鹿茸。
[0077] 上述方法中，可采用離心收集所述水溶性物質。所述離心采用的離心力可為 3000g-5000g(如 4000g)，離心時間可為 10-20min(如lOmin)。
[0078] 上述方法中，所述透析采用截留分子量為lkDa的半透膜進行。所述透析可在水中 進行10-12h，每4h更換水一次。
[0079] 上述方法中，所述方法還包括將結束透析后得到的液體在50_60°C(如55°C) 進行濃縮，得到濃縮液；將所述濃縮液在3000g-5