用于治療慢性粒細胞白血病的檸檬苦素化合物及制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物技術領域，具體涉及從白鮮的干燥根皮中分離得到的一種具有治 療慢性粒細胞白血病作用的檸檬苦素類化合物及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 白鮮（DictamnusdasycarpusTurcz·)隸屬于蕓香科（Rutaceae)白鮮屬 (DictamnusL.)，為多年生的草本植物，植物體具有濃烈的特殊香味，主要分布于歐洲和亞 洲部分地區。該屬全世界約5種，中國植物志記載1種。據歷代本草及《中國藥典》2010版一部 收載記錄，中藥白鮮皮為蕓香科白鮮屬植物白鮮的干燥根皮，是中國常用中藥，又名北鮮 皮、野花椒根皮、臭根皮等。現代藥理學研究表明，中藥白鮮皮具有清熱燥濕、祛風止癢以及 解毒等功效，用以治療黃水淋滴、濕疼、風濕熱瘦、擠癖瘡癒、黃追尿赤等癥，從而引起廣泛 關注。
[0003]目前，從白鮮根皮以及地上部分已分離鑒定出多種化學成分，包括揮發油類、生物 堿類、檸檬苦素類、多糖化合物以及香豆素、黃酮類、留體類等成分。白鮮皮中所含的生物堿 為呋喃喹啉類生物堿，主要有白鮮堿、茵芋堿、萌蘆巴堿、膽堿、γ-崖椒堿、異斑佛林草堿、 7，8-dimethoxymyrtopsine、〇-ethylnor-γ-fagarine、platydesmine、〇-ethylnor dictamine、0_ethylnorskimmianin、7，8-dimethoxyplatydesmine等，其中白鮮喊為白鮮 皮的指標成分之一。此外，檸檬苦素類化合物是白鮮屬植物中分布最為廣泛的一類化合物， 為白鮮皮中一大類重要活性成分。
[0004]白鮮植物體揮發油類物質如倍半萜類化合物等具有抗腫瘤增生及細胞毒性活性， 其對6種腫瘤細胞株的生長具有明顯的抑制作用，如人類乳房腫瘤細胞株(MCF-7，ZR-75-30 和MDA-MB-435S)、人類肝臟癌細胞株（Bel-7402和HepG2)以及人類腎上腺細胞細胞株 (ACHN)。另外，白鮮皮中揮發油類還具有強烈的抑制耐甲氧西林金葡菌及金黃色葡萄球菌 ATCC25923的活性。生物堿具有強心、抗炎、收縮血管平滑肌、抗病原微生物等作用。其中， 白鮮堿為其重要活性成分，具有抗菌、抗病毒和皮膚濕疹、皮膚瘙癢和體外抗癌活性等多種 生物活性。白鮮皮中的檸檬苦素類化合物涔酮具有體外抗癌活性，并可作為一種新型的肝 病治療藥物，具有良好的保肝降酶和抑制肝纖維化等作用。藥理實驗表明，白鮮皮粗多糖能 明顯增加正常小鼠胸腺和脾臟的重量，提高網狀內皮系統吞噬功能，具有抗疲勞、耐缺氧、 提高機體抗應激能力，能顯著促進小鼠膽汁分泌，加速肝內毒物排泄，從而保護肝臟。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供一種從白鮮的干燥根皮中分離得到的一種具有治療慢性粒 細胞白血病作用的檸檬苦素類化合物及其制備方法。
[0006]本發明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現的：
[0007]具有下述結構式的化合物(I)，
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將白鮮的干燥根皮粉碎，用 75~85 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和 的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中乙 酸乙酯萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用75%乙醇洗脫10個柱體 積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（c)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸 膏用正相硅膠分離，依次用體積比為85:1、40 :1、20:1、12:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到5個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為20:1、12:1和 5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0010] 進一步地，步驟(a)中，用80%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011]進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0012]藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物(I)和藥學上可接受的載體。
[0013]所述的化合物(I)在制備治療慢性粒細胞白血病的藥物中的應用。
[0014]所述的藥物組合物在制備治療慢性粒細胞白血病的藥物中的應用。
[0015]本發明化合物用作藥物時，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0016]該藥物組合物含有治療有效量的本發明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、對 人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017]所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質體或乳劑等。
【附圖說明】
[0018]圖1為化合物(I)結構式；
[0019 ]圖2為化合物（I)理論ECD值與實驗ECD值比較。
【具體實施方式】
[0020]下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0021 ]實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0022] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0023]制備方法：（a)白鮮的干燥根皮（10kg)粉碎，用80 %乙醇熱回流提取(25LX3次），合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽和的 正丁醇（3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物（398g)和正丁醇萃取物； (b) 步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用 75%乙醇洗脫10個柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏（163g); (c) 步驟(b)中75%乙醇洗脫浸膏用200-300目正相硅膠分離，依次用體積比為85:1(8個柱 體積）、40:1 (8個柱體積）、20:1 (8個柱體積）、12:1 (10個柱體積)和1:1 (5個柱體積）的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脫得到5個組分；（d)步驟(c)中組分4(49g)用200-300目正相硅膠進一步 分離，依次用體積比為20:1(8個柱體積）、12:1(10個柱體積)和5:1(5個柱體積）的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2(25g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠 0DS-C18分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~10個柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I) (44mg)。
[0024] 結構確證：白色粉末;HR-ES頂S顯示[M+Na]+為m/z741.3114，結合核磁特征可得分 子式為C37H50OW，不飽和度為13。核磁共振氫譜數據δΗ(ppm，DMS〇-d6，400MHz):Η-1 (4.68，br， s)，H-2(2.13，m)，H-2(2.17，m)，H-3(4.82，dd，J= 3.0,2.4)，H-5(2.35，d，J=12.8)，H-6 (3.99，dd，J=12.8,3.2)，H-7(4.96，d，J= 3.2)，H-9(2.85，d，J= 3.4)，H-ll(5.03，ddd，J= 9.5,3.8,3.4)，H-12(2.03，dd，J=15.1，9.5)，H-12(1.39，dd，J=15.1，3·8)，Η-15(4·42， s)，H-17(5.46，s)，H-18(1.17，s)，H-19(1.13，s)，H-21(7.28，br，s)，H-22(6.21，br，s)，H-23(7.30，dd，J=1.7，1.7)，H-28(3.24，br，d，J= 7.8)，H-28(3.43，d，J= 7.8)，H-29(1.09， s)，H-30(1.22，s)，H-2'（2.17，m)，H-3'（1.41，m)，H-3'（1.67，m)，H-4'（0.88，t，J=7.4)，H-5'（1.06，d，J= 7.1)，l-0Ac(2.01，s)，7-0Ac(2.02，s)，ll-0Ac(1.99，s);核磁共振碳譜數據 Sc(ppm，DMS0-d6，125MHz):70.8(CH，1-C)，27.2(CH2,2-C)，72.6(CH，3-C)，41.8(C，4-C)， 41.3(CH，5-C)，71.7(CH，6-C)，73.2(CH，7-C)，43.7(C，8-C)，39.0(CH，9-C)，39.5(C，10-C)， 65.8(CH，11-C)，37.9(CH2，12-C)，37.2(C，13-C)，87.7(C，14-C)，69.8(CH，15-C)，166.1(C， 16-C)，77.8(CH，17-C)，18.4(CH3，18-C)，17.1(CH3，19-C)，119.7(C，20-C)，140.8(CH，2卜 C)，109.2(CH，22-C)，142.8(CH，23-C)，77.8(CH2,28-C)，19.4(CH3,29-C)，19.8(CH3,30-C)， 175.1(C，1，-C)，40.9(CH，2，-C)，26.2(CH2,3，-C)，11.3(CH3,4，-C)，16.9(CH3,5，-C)，168.7 (C，1-0Ac)，21.1(CH3，1-0Ac)，169.3(C，7-0Ac)，20.3(CH3,7-0Ac)，168.9(C，11-0Ac)，21.2 (CH3，11-0Ac);碳原子標記參見圖1。紅外光譜表明該化合物含有羥基（3435CHT1)和羰基 (1743和1712cm-3基團。匪R數據表明該化合物含有一個β-取代呋喃環[SH7.28(br，s，H- 21)，6.21(1^，8，!1-22)和7.30((1(1，了=1.7，1.7抱，!1-23);3(：142.8，140.8，119.7，109.2]，四 個甲基 0!11.22，1.17，1.13，1.〇9)，一個2-甲基丁酰氧基（3(：175.1，4〇.9,26.2，16.9和 11.3)，三個乙酰氧基0!12.〇2,2.〇1和1.99)和內酯羰基0(：166.1)。圓8(：數據顯示該化合物 還含有6,28-醚橋。!1\?(：譜中，!1-10!14.68，1^，8)，!1-7(5!14.96，(1，1 = 3.2取）和!1-11(3 !15.03，(1(1(1，1 = 9.5,3.8,3.4他）與相應的酯羰基碳6(：168.7，169.3和168.9的相關性說明三 個乙酰氧基分別與C-l，C-7和C-l1相連。此外，HMBC譜中H-3 (δΗ4.82，dd，J= 3.