一種通關藤總皂苷提取物及其提取方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種通關藤總皂苷提取物，該提取物中含有一種通關藤苷新化合物。 本發明還涉及含有所述通關藤苷新化合物的通關藤總皂苷提取物的制備方法。
【背景技術】
[0002] 惡性腫瘤發病率越來越高，且具有較高的死亡率，嚴重威脅人類健康。采用放化療 治療惡性腫瘤，在殺傷癌細胞的同時，也損害了機體正常細胞，愈后不理想。臨床常用的廣 譜抗癌藥物順鉑注射液對腫瘤細胞具有明顯的殺傷能力，但也有較強的免疫抑制作用，造 成治療過程中機體免疫力低下，副作用較大。目前亟待尋求一種抑瘤效果明顯但對機體損 傷較小的抗癌藥物。
[0003] 通關藤，又名烏骨藤、通光散、通光藤、黃木香、下奶藤（云南)等，系蘿蘑科牛奶菜 屬植物通關藤(Marsdeniatenacissima(Roxb).WightetAm)的干燥藤莖，廣泛分布于亞 洲熱帶和亞熱帶地區。通關藤的根、莖、葉均可入藥，主要含C21留體皂苷、生物堿、黃酮、多 糖、樹脂、色素及油脂等多種化學成分，其味苦，性微甘、涼，入肺、胃、膀胱經，具有清熱解 毒、消炎去痛、止咳平喘等功效。藥理研究表明，通關藤含有的化學成分具有明顯的抗腫瘤 活性。研究證實，其抗腫瘤有效成分為留體皂苷、生物堿和多糖，且主要活性成分是其中的 甾體類成分。大量研究表明，C21甾體皂苷具有明顯抑制大鼠瓦克瘤、小鼠肉瘤、宮頸癌、肝 癌、艾氏腹水瘤作用和平喘等多種生物活性。有報道稱通關藤多糖及一些脂溶性成分也具 有抗腫瘤作用。
[0004] 單用通關藤治療腫瘤，對食管癌、胃癌、肝癌、肺癌等都具有一定的療效。中藥消癌 平注射液是以單味通關藤藥材的水提取物為主要成分的制劑，具有清熱解毒、化痰軟堅之 功效，臨床用于各種消化系統腫瘤、肺癌、肝癌等的治療，還可用于放療，化療的輔助治療。 消癌平注射液作用溫和，具有顯著改善和提高患者生活質量的功效。
[0005] 目前已從通關藤植物中分離出50余種化學成分，其中主要的抗腫瘤活性成分C21甾 體皂苷類化合物多為白色結晶或粉末，已有40種以上，是一類苷元留體烷衍生物與2-去氧 糖等形成的化合物，其糖鏈最多含有6個糖。傳統觀點認為，通關藤中的苷元主要有 tenacigeninA、B、C(通光藤苷元A、B、C)、170_tenacigeninΒ(17β-通關藤苷元B)、 dihydrosarcostin(二氫肉珊瑚苷元）、tenacissigenin(通光素）、cissogenin(西索苷元）、 drevogeninQ(苦繩苷元Q)、metaplexigenin(蘿蘑苷元）等。留體阜苷苷元結構的差異可影 響其對腫瘤的抑制程度。
[0006] 楊仁洲等于1981年從通關藤中分離出了通光藤甙元甲、乙、丙，確定其分子式分別 為C21H32O5、C21H32O5和C21H34O6，羅思齊等從通關藤中分1?出一個分子式為C21H32O6的新化合 物，化學名稱5α，17α-孕留-3，8α，11α，12，14-五醇-20-酮-11-縮酮，被命名為通光藤素。邢 旺興等用現代色譜分離技術分出兩個新的化合物，并通過化學方法以及紅外、紫外、質譜、 核磁等技術確定了這兩個化合物的結構，其中一個化合物鑒定命名為通光藤J，其結構特點 為含有五個不同的糖，分別為磁麻糖、夾竹桃糖、3-0-甲基-6-脫氧阿洛糖和葡萄糖，與二氫 肉珊瑚苷元以1-4糖苷鍵連接;另一個化合物通光藤K較通關藤J少一個葡萄糖。Liu等從通 關藤藥材中分離出了通關藤N，其分子式為C54H84〇24,以通關藤B為苷元。雷勇勝通過硅膠柱 色譜、Sephadex LH-20柱色譜、開放ODS柱色譜、制備HPLC等多種色譜手段，從通關藤A乙醇 提取物中分離出了多種C21留體苷:通光藤苷元乙，17β_通光藤苷元乙，lla-O-tigloyl-UP-tenacigenin B,1la-〇-2-methylbutyryl-120-〇-acetyl tenacigenin Β，11α-〇-2_ methylbutyryl - 120-〇-benzoyl tenacigenin B，1 la-〇-2-methylbutyryl -12β-0- tigloyl tenacigenin B，Tenacigenoside A，通光藤苷G，170-通光藤苷G，通光藤苷H，通光 藤苷I，通光藤苦苷A，通光藤苦苷F，通光藤苷B、通光藤苷0、17β-通光藤苷0。邢旺興將通關 藤Α乙醇提取物制成浸膏，水混懸，用一系列溶劑萃取后反復用硅膠柱分離，純化得到八個 化合物，經結構鑒定，其中三個為大葉牛奶菜苷丁、大葉牛奶菜苷乙、喙柱牛奶菜苷乙。 [0007]目前通關藤藥材的主要用法為簡單水煮、水煮醇沉或用一定濃度乙醇提取，沒有 針對其中的藥效成分進行富集，造成許多無效成分(包括人體無法吸收的成分)含量增多， 服用劑量偏大。同時，由于藥材之間成分差異性較大，簡單工藝制成的粗提物不易控制已知 有效成分的含量，從而造成粗提物質量控制的不便，影響療效。
【發明內容】
[0008]本發明的目的是提供一種抑瘤效果明顯，對機體損傷較小的通關藤總皂苷提取 物，以及所述通關藤總皂苷提取物的制備方法。
[0009]本發明所述的通關藤總皂苷提取物是按照下述方法提取得到的： 1) 將通關藤藥材以相當于藥材8~12倍重量的70~75%乙醇浸泡過夜，加熱至回流溫 度進行提取，提取液過濾并減壓濃縮回收乙醇后，濃縮物干燥得到通關藤粗提取物； 2) 將通關藤粗提取物以相當于粗提取物10~20倍重量的蒸餾水溶解，離心，取上清液 上ZTC-1大孔吸附樹脂柱，依次用蒸餾水和50~55%乙醇淋洗樹脂柱至淋洗液無色，用70~ 75%乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至無醇味，濃縮物干燥得到通關藤粗皂苷； 3) 取通關藤粗皂苷，以相當于粗皂苷8~15倍重量的40~50%乙醇溶解，上MCIGel反 相樹脂柱，用40~50%乙醇淋洗樹脂柱至淋洗液吸光度恒定，以75~80%乙醇洗脫，收集洗脫 液，減壓濃縮至無醇味，濃縮物干燥得到通關藤總皂苷。
[0010] 本發明上述方法中，所述各乙醇溶液的濃度均為體積百分濃度。
[0011] 具體地，本發明是將所述浸泡過夜的通關藤藥材加熱回流提取3次，每次提取時間 為2~3小時。
[0012]本發明用于提取通關藤粗皂苷的ZTC-1大孔吸附樹脂的外觀為乳白色球狀顆粒， 具有弱極性，粒徑范圍0.3~1.25111111，比表面積480~520111 2/^，平均孔徑130~14011111，孔隙率 42 ~46%，孔容 0 · 73 ~0 · 77ml/g。
[0013]大孔吸附樹脂僅能按照洗脫劑濃度的不同對提取物進行粗分，不能按照分離成分 的化學性質類別進行純化。因此，本發明采用MCIGel反相樹脂對粗皂苷進行進一步純化。 本發明采用的MCIGel反相樹脂外觀為白色球型，粒徑50~75μπι，比表面積310m2/g，孔徑 120A〇
[0014]由于新購樹脂可能含有分散劑、致孔劑、惰性溶劑等化學殘留，所以本發明所述 ZTC-1大孔吸附樹脂和MCIGel反相樹脂在使用前都需要進行預處理，具體方法是先將樹脂 以2~4倍體積的丙酮浸泡過夜，使樹脂充分溶脹后，置于層析柱中，先以丙酮淋洗至溶液無 白色沉淀，再用乙醇淋洗至乙醇液加水無白色渾濁，最后以蒸餾水淋洗至無醇味。
[0015] 進一步地，本發明是采用冷凍干燥的方式對各步驟的濃縮物進行干燥。
[0016]采用本發明上述方法制備得到的通關藤總皂苷，每mg通關藤總皂苷中含有的活性 組分包括:0.3~0.4mg通關藤苷A，0.1~0.2mg牛奶菜苷K，0.02~0.03mg異通關藤苷A，0.02 ~0.03mg通關藤苷元B，以及0.1~0.2mg通關藤苷G。
[0017] 更進一步地，每mg通關藤總皂苷中含有〇 · 32~0 · 36mg通關藤苷A，0 · 12~0 · 18mg牛 奶菜苷K，0 · 02~0 · 03mg異通關藤苷A，0 · 02~0 · 03mg通關藤苷元B，0 · 12~0 · 18mg通關藤苷G〇
[0018] 其中，所述的異通關藤A為首次報道的新化合物，該通關藤化合物為白色粉末，熔 點218.2°C，以1Ια-O-順芷酰基-12β-0-乙酰基-通關藤苷元B作為其苷元，連接有Glc-Allo-〇le_的糖鏈，分子式C48H74O19，分子量954，為化合物通關藤苷A的同分異構體，具有下述式 (I)所述的結構，其結構式中18位為反式構型。
[0019]本發明采用制備、半制備色譜系統對提取得到的通關藤總皂苷進行進一步的反復 分離，得到了5種含量較高的純度80%左右的活性組分，繼而以FujiC18制備色譜柱將這些 活性組分提純至純度>98%，采用1H-NMR，13C-NMR，HMQC，FT-MS等手段進行結構鑒定，確定了 這5種活性組分的化學結構。
[0020] 鑒定結果顯示，化合物3為未報道化合物，其余化合物均為已知化合物，其中化合 物1為通關藤苷A，化合物2為牛奶菜苷K，化合物4為通關藤苷元B，化合物5為通關藤苷G。 [0021 ]化合物1為白色粉末，易溶于甲醇、三氯甲烷，微溶于DMS0，熔點207.5°