一種北蟲草多肽的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物工程技術領域，尤其是一種北蟲草多肽的制備方法。
【背景技術】
[0002]北蟲草的培育過程是放生野生冬蟲夏草的生育條件開展仿生栽培的結果；其富有蟲草素、蟲草酸、蟲草多糖、微量元素、S0D酶、蛋白質，脂肪等多種營養物質，具有很高的營養價值。北蟲草的用途廣泛，適用于飲料，酒類、保健品等，市場需求量大，前景廣闊，產品價值高。目前國內外對北蟲草的研究較多，北蟲草的開發利用多以提取蟲草素，蟲草多糖，蟲草酸等活性物質為主。關于北蟲草制備多肽的研制方法較少。如何更好地開發利用北蟲草這一新資源食品，使其豐富的營養得到更充分的利用，同時最大限度地減少對環境的污染，是國內眾多專家關注的焦點。
[0003]北蟲草中含有豐富的蛋白質，而多肽則是蛋白質的初級形式，涉及人體激素調節和神經調節，具有調節身體機能，維持生命活力等功能的活性物質。現有技術中對北蟲草多肽的提取主要有水提醇沉法和酶解法，存在提取效率低，提取得到的多肽活性低等問題。
【發明內容】
[0004]本發明提供一種北蟲草多肽的制備方法，包括以下步驟:
[0005]1)將北蟲草制成北蟲草培養基，并向其中接種腸道益生菌進行發酵培養；
[0006]2)將所述步驟1)發酵培養得到的培養液與酶混合，進行酶解得到酶解后的培養液；
[0007]3)將所述酶解后的培養液進行固液分離，將所述固液分離后的上清液過濾后，得到北蟲草多肽液；
[0008]將所述北蟲草多肽液真空冷凍干燥粉碎，得到北蟲草多肽。
[0009]優選的，所述的腸道益生菌為保加利亞乳桿菌、嗜酸乳桿菌和嗜熱鏈球菌中的一種或幾種；
[0010]優選的，所述的腸道益生菌的發酵培養采用靜置培養，發酵培養的培養溫度優選的為40?45°C，更優選的為42°C，培養時間優選的為24?48小時，更優選的為36小時。
[0011]優選的，所述的北蟲草培養基包括以下質量份的組分:
[0012]80?100份北蟲草；
[0013]800?1000份無菌去離子水；
[0014]5?10份葡萄糖。
[0015]所述的烘干的北蟲草優選的通過高溫60?80°C烘干至恒重，更優選的溫度為70°C，所述的過篩優選的為過80?100目篩，更優選的為過90目篩。
[0016]所述的酶優選的為纖維蛋白酶、果膠酶、木瓜蛋白酶、堿式蛋白酶和風味蛋白酶。
[0017]所述的酶解優選的包括以下步驟:
[0018](1)將纖維蛋白酶和果膠酶組成的復合酶與北蟲草發酵培養液混合，在41?46°C的溫度下酶解2?3小時，得到酶解液A ；
[0019](2)將木瓜蛋白酶和堿式蛋白酶組成的復合酶與酶解液A混合，在58?62°C的溫度下酶解3?5小時，得到酶解液B ；
[0020](3)將風味蛋白酶與B酶解液混合，在52?58°C的溫度下酶解5?6小時，得到酶解液C。
[0021]優選的，所述步驟3)中的固液分離為離心，所述的離心的轉速優選為8000?lOOOOrpm，更優選的為lOOOOrpm，所述離心的時間為5?lOmin，更優選的為lOmin ；
[0022]所述過濾優選的為分子膜過濾，所述的分子膜優選的規格為5000?10000D。
[0023]優選的，所述步驟3)中的沉淀為真空冷凍干燥，所述真空冷凍干燥的溫度優選的為-15?-20°C，更優選的為_18°C，真空度優選的為10-12Pa，更優選的為llPa，時間優選的為3?15小時，更優選的為10小時。
[0024]優選的，所述真空冷凍干燥前將沉淀置于_20°C冷凍10?12小時。
[0025]本發明的有益效果:本發明所述的方法提取得到的北蟲草多肽，由于結合了微生物的發酵作用，在酶解前已經將北蟲草部分分解，使得酶解更加完全，從而使北蟲草多肽的提取更徹底，提取效率更高，所得的北蟲草多肽的活性高。
【具體實施方式】
[0026]本發明提供一種微生物發酵酶解北蟲草多肽的制備方法，具體包括以下步驟:
[0027]1)將北蟲草制成北蟲草培養基，并向其中接種腸道益生菌進行發酵培養；
[0028]2)將所述步驟1)發酵培養得到的培養液與酶混合，進行酶解得到酶解后的培養液；
[0029]3)將所述酶解后的培養液進行固液分離，將所述固液分離后的上清液過濾后，得到北蟲草多肽液；將所述北蟲草多肽液真空冷凍干燥粉碎，得到北蟲草多肽。
[0030]本發明微生物發酵酶解北蟲草多肽的制備方法步驟1)中所述的北蟲草優選的通過烘干后粉碎得到的，所述的烘干和粉碎設備為本領域常規設備，無其他特殊要求，所述烘干具體可采用烘箱，烘干的溫度優選為60?80°C，更優選的為70°C，所述的粉碎具體的可采用小型粉碎機；粉碎后的北蟲草優選的過80?100目篩，更優選的過90目篩；
[0031]所述的北蟲草培養基是將粉碎過篩后的北蟲草80?100份，無菌去離子水800?1000份，葡萄糖5?10份混合后制備而成；其中所述的葡萄糖為市售分析純，所述的無菌去離子水為實驗室常用的無菌去離子水，無其他特殊要求；
[0032]所述的向北蟲草培養基中接種腸道益生菌進行發酵培養；其中所述的腸道益生菌具體的可以是保加利亞乳桿菌、嗜酸乳桿菌和嗜熱鏈球菌中的一種或幾種；所述的接種是在無菌條件下進行的，所述的無菌條件即為厭氧操作箱或其他普通實驗室可以實現的無菌厭氧條件；所述的發酵培養采用靜置培養，具體的發酵培養優選的培養溫度為40?45°C，更優選的為42°C，優選的培養時間為24?48小時，更優選的為36小時。
[0033]本發明微生物發酵酶解北蟲草多肽的制備方法步驟2)中所述的將發酵培養得到的培養液與酶混合，進行酶解得到酶解后的培養液；其中所述的酶優選的為纖維蛋白酶、果膠酶、木瓜蛋白酶、堿式蛋白酶和風味蛋白酶；所述的酶解具體的包括以下步驟:
[0034](1)優選的將纖維蛋白酶和果膠酶以1: 1的重量比例混合組成的復合酶與北蟲草發酵培養液混合酶解，所述的酶解溫度優選為41?46°C，更優選的為44°C，酶解時間優選為2?3小時，更優選為2.5小時，酶解后得到酶解液A ;
[0035](2)將木瓜蛋白酶和堿式蛋白酶以1: 1的重量比例混合組成的復合酶與酶解液A混合繼續酶解，酶解溫度優選為58?62°C，更優選的為60°C，酶解時間優選為3?5小時，更優選為4小時，酶解后得到酶解液B ;
[0036](3)將風味蛋白酶與酶解液B混合酶解，酶解溫度優選為52?58°C，更優選的為55°C，酶解時間優選為5?6小時，更優選為5.5小時，酶解后得到酶解液C ；
[0037]本發明微生物發酵酶解北蟲草多肽的制備方法步驟2)中所述的酶解具體的采用恒溫震蕩的方式，優選的震蕩頻率為30?80rpm，更優選的為50rpm。
[0038]本發明微生物發酵酶解北蟲草多肽的制備方法步驟3)中所述的固液分離具體的選擇離心的方式，離心的轉速優選為8000?lOOOOrpm，更優選的為lOOOOrpm，離心的時間優選為5?lOmin，更優選的為8min ；
[0039]本發明微生物發酵酶解北蟲草多肽的制備方法步驟3)中所述的上清液的過濾優選的為分子膜過濾，過濾用的分子膜優選的規格為5000?10000D ；
[0040]本發明微生物發酵酶解北蟲草多肽的制備方法步驟3)中的所述的上清液的干燥，具體的為真空冷凍