獨一味中環烯醚萜苷的提取方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及獨一味中環烯醚萜苷的提取方法，尤其涉及一種微波提取方法。
【背景技術】
[0002] 獨一味為唇形科植物獨一味Lamiophlomis rotata (Benth) Kudo的干燥地上部分。 具有活血止血，祛風止痛，干黃水的功能，用于治療跌打損傷，外傷出血，風濕痹痛，黃水病 等癥。現有研究表明，環烯醚萜苷是獨一味的主要活性成分之一，具有較強的止血、促凝血 作用。因此，盡可能多地提取獨一味中的環烯醚萜苷類成分具有重要的意義。
[0003] 目前，針對獨一味中活性成分的提取方法，主要以總黃酮的含量為提取指標，并未 有針對獨一味中環烯醚萜苷類成分的報道。同時，對于獨一味中的環烯醚萜苷類成分，現有 報道的關注點也在于如何更好地將環烯醚萜苷類成分從獨一味的水提物中分離純化，例如 《獨一味不同提取物中總環烯醚萜苷、總黃酮和總苯乙醇苷的測定》（邱建國等，中國實驗方 劑學雜志，2013年23期，第119-124頁）、《工業化提取分離純化獨一味總環烯醚萜苷類成 分》（邱建國等，中國實驗方劑學雜志，2011年13期，第32-35頁）等，并未關注到如何從獨 一味提取出更多的環烯醚萜苷。
[0004] 因此，目前亟需一種針對獨一味中環烯醚萜苷的提取方法。
【發明內容】
[0005] 為解決上述問題，本發明提供了獨一味中環烯醚萜苷的提取方法，包括以下步 驟：
[0006] 取獨一味藥材，粉碎，加入濃度為10 % -70 %醇類溶劑，微波提取，所述醇類溶劑 與藥材的體積質量比為20-40: lmL/g。優選地，所述醇類溶劑選自甲醇、乙醇或者正丁醇，最 優選乙醇。
[0007] 優選地，所述醇類溶劑的濃度為10% -22% ;更進一步優選地，所述醇類溶劑的濃 度為20% -22%，最優選22%。
[0008] 優選地，所述醇類溶劑與藥材的體積質量比為35-36: lmL/g，最優選36: lmL/g。
[0009] 優選地，所述微波提取的溫度為40°C -80°C ;更優選地，所述微波提取的溫度為 60°C -70°C，最優選 63°C。
[0010] 優選地，所述微波提取的時間為6-10分鐘，最優選8分鐘。
[0011] 優選地，所述醇類溶劑的濃度為20-22 %，醇類溶劑與藥材的體積質量比為 35-36: lmL/g，微波提取的溫度為60-63°C ;更優選地，乙醇的濃度為22%，乙醇與藥材的體 積質量比為36: lmL/g，微波提取的溫度為63°C。
[0012] 優選地，所述獨一味藥材為獨一味葉部；更優選地，所述獨一味藥材為60°C下烘 干的獨一味葉部。
[0013] 本發明還提供了一種獨一味提取物，所述提取物是以前述的提取方法制備得到 的。
[0014] 本發明首次以醇類溶劑作為提取溶劑，與微波輔助提取技術相結合，用于獨一味 中環烯醚萜苷的提取，能耗低、操作簡便快捷、提取時間短、提出率高，適于推廣應用。
[0015] 同時，發明人在實驗中發現，當采用現有常用提取溶劑一一水對獨一味中的環烯 醚萜苷進行提取時，提取效果不佳。分析原因為環烯醚萜苷對酸較敏感，其苷鍵極易被酸水 解。因此對環烯醚萜苷進行水提時，需在藥材中拌入碳酸鈣或氫氧化鋇，以防止酶和有機酸 的影響。而本發明通過將醇類溶劑與微波輔助萃取相結合，此時無需加入其它試劑保護環 烯醚萜苷，即可高效提取出獨一味中的環烯醚萜苷，大幅簡化了提取方法。
[0016] 此外，2010年版《中國藥典》對獨一味的藥用部位作了重大改變，由使用全草改為 地上部分，以保護其野生資源。發明人在研究中（鐘世紅，古銳，王鈴鑫，等.HPLC同時測定 獨一味中7種成分含量，中國中藥雜志，2014, 39(22) :4373-4378)發現，地上部分各成分組 間具有較好的相關性，地上部分樣品中的環烯醚萜苷成分山梔苷甲酯和8-0-乙酰山梔苷 甲酯總量的均值為1. 44%，地上部分比地下部分成分種類更多，含量更高，以地上部分入藥 更合理。因此，本發明有效提取環烯醚萜苷的方法，也為進一步完善獨一味的質量標準提供 了有效的保障。
[0017] 顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離 本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0018] 以下通過實施例形式的【具體實施方式】，對本發明的上述內容再作進一步的詳細說 明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發明上述內容 所實現的技術均屬于本發明的范圍。
【附圖說明】
[0019] 圖1為對照品色譜圖，其中：1_胡麻屬苷；2-山梔苷甲酯；3-8-0-乙酰山梔苷甲 酯。
[0020] 圖2為胡麻屬苷光譜圖。
[0021] 圖3山梔苷甲酯光譜圖。
[0022] 圖4為8-0-乙酰山梔苷甲酯光譜圖。
[0023] 圖5為本發明的典型樣品色譜圖。
[0024] 圖6為圖5中色譜峰1的光譜圖。
[0025] 圖7為圖5中色譜峰2的光譜圖。
[0026] 圖8為圖5中色譜峰3的光譜圖。
[0027] 圖9為圖5中色譜峰4的光譜圖。
[0028] 圖10為圖5中色譜峰5的光譜圖。
[0029] 圖11為圖5中色譜峰6的光譜圖。
[0030] 圖12為圖5中色譜峰7的光譜圖。
[0031] 圖13為提取溶劑篩選試驗的結果。
[0032] 圖14為提取溫度篩選試驗的結果。
[0033] 圖15為乙醇濃度篩選試驗的結果。
[0034] 圖16為液料比篩選試驗的結果。
[0035] 圖17為提取時間篩選試驗的結果。
【具體實施方式】
[0036] 本發明所用材料和儀器的來源如下：
[0037] 獨一味藥材（2013年7購于四川阿壩縣）經鑒為獨一味Lamiophlomis rotata(Benth)Kudo的干燥葉；色譜純甲醇，乙腈，其余試劑均為分析純，試劑均來自成都 市科龍化工試劑廠。
[0038] UltiMate3000高效液相色譜儀，德國戴安；Discover微波合成儀，美國CEM JE系 列多功能電子天平，上海浦春計量儀器有限公司；中草藥粉碎機，天津市秦斯特儀器有限公 司；電熱鼓風干燥箱，上海一恒科學儀器有限公司。
[0039] 在本發明中，獨一味藥材粉末中的總環烯醚萜苷含量采用高效液相色譜法來進行 檢測，通過比較提取液中總環烯醚萜苷類成分的總峰面積的大小來比較提取效果。
[0040] 高效液相色譜法條件為：Welchrom C18色譜柱，乙睛-0. 1 %磷酸水溶液梯度洗脫 系統。流動相為A:乙腈-B:0. 1%磷酸水溶液，梯度洗脫程序：0~15min，8%~12% A; 15 ~20min，12 % ~19 % A ;20 ~35min，19 % ~31 % A。體積流量 1.0 mL/min，檢測波長： 238nm，柱溫：30°C。
[0041] 將圖譜中的各環烯醚萜苷類色譜峰用光譜圖進行指認，并加和其總峰面積作為測 定依據。
[0042] 圖1為胡麻屬苷、山梔苷甲酯和8-0-乙酰山梔苷甲酯的對照品色譜圖。
[0043] 由于獨一味中環烯醚萜苷類均具有相似的光譜圖，依據圖2-4已知對照品光譜圖 和圖5樣品中1-7色譜峰的光譜圖6-12對照，判斷尋找出圖5樣品圖譜中的7個主要環烯 醚萜苷色譜峰.
[0044] 指認結果如下：1_7色譜峰均為環烯醚萜苷，本文篩選條件的依據為總峰面積，即 指這7個色譜峰面積之和，其中第3、4、7號色譜峰分別與對照品色譜的1、2、3號色譜峰相 對應，即第3、4、7號色譜峰分別為胡麻屬苷、山梔苷甲酯和8-0-乙酰山梔苷甲酯。
[0045] 因此，此方法對獨一味中環烯醚萜苷的成分檢測準確可靠，重復性好，結果穩定。
[0046] 實施例1本發明的提取方法
[0047] 1、材料制備
[0048] 獨一味葉置于60°C的鼓風干燥箱中烘干；打粗粉，粉末于陰暗干燥處密封保存備 用。
[0049] 2、提取
[0050] 稱取獨一味藥材粉末1.0 OOg于IOOmL圓底燒瓶中，加入22%乙醇溶液36. OmL， 63°C下微波提取8min即可。
[0051] 3、測定
[0052] 將提取液補足失重后密封靜置5min，將其上清液倒入IOmL離心管中密封靜