C5aR拮抗劑的用圖
【技術領域】
[0001] 本發明涉及C5aR拮抗劑的另外的治療用途，具體而言與骨損傷和與其相關的疾 病和病癥有關的用途。
[0002] 背景 C5aR是補體因子5的A片段（C5a)的受體。該受體在許多不同細胞類型（包括白細 胞）上表達。C5aR屬于七次跨膜G-蛋白-偶聯受體的家族，并且是C5a的高親和力受體， 其Kd為約I nM。受體的結構符合七次跨膜受體家族，其中胞外N-末端后接著通過交替作 為胞內和胞外環的螺旋間結構域連接的7個跨膜螺旋，和以胞內C-末端結構域終止。
[0003] C5a與C5aR拮抗劑反應的抑制減少通過C5a介導的急性炎性反應，而不影響其它 補體成分。為此，先前已描述了 C5aR肽詰抗劑和抗_C5a受體抗體（Watanabe等，1995 Journal of Immunological Methods 185: 19-29; Pellas 等，1998; Konteatis 等， 1994; Kaneko 等，1995; Morgan 等，1993)。例如，WO 95/00164 描述針對 C5aR 的 N-末 端肽（殘基9-29)的抗體。WO 03/062278描述與第2個胞外環反應的抗體（包括稱為7F3、 6C12和12D4的克隆）。其它C5aR抗體描述于W0/022390和近來的W02012/168199。所有 數據證實，有效阻斷C5a與其受體C5aR結合可體外抑制C5a刺激的嗜中性粒細胞迀移和預 防動物模型的炎癥。
[0004] C5a是參與炎性疾病例如類風濕性關節炎的發病的促炎蛋白，C5a和C5aR在類 風濕性關節炎中的關聯已在C5aR遺傳缺陷小鼠中得到證實，所述小鼠較不易于誘發關節 炎（Ji 等（2002) Immunity 16: 157-168; Grant 等（2002) J Exp Med 196: 1161-1171 ; Lee 等，2006 (Nat Biotechnol. 2006 Oct; 24 (10) :1279-84)和 Hishimoto 等 2010，J Exp Med. 2010 Jun 7;207(6):1135-43)。此外，用小分子 C5aR 拮抗劑（一種環肽）治 療，可在大鼠中誘發關節炎后減少炎癥和腫脹（Woodruff等（2002) Arthritis Rheum 46: 2476 - 2485)〇
[0005] 類風濕性關節炎（RA)是一種關節的炎性疾病。受累的關節通常腫脹和發熱，并隨 時間逐漸變得更加疼痛和僵硬。隨后的癥狀包括嚴重影響患者的運動性的關節破壞（包括 骨損傷），并可包括骨變形。
[0006] 盡管用于治療這樣的炎性疾病的大多數藥物主要是抗炎性的，但極為重要和引人 關注的是，RA和相關疾病的治療還積極影響關節和骨破壞。除了 RA之外，骨損傷的發生還 可與其它關節炎疾病有關，甚至與炎癥疾病無關。
[0007] 成骨細胞和破骨細胞共同負責維持骨，因為破骨細胞可不斷損壞骨組織而成骨細 胞刺激骨形成并因而增加骨質量和/或骨密度。因此，可影響骨體內穩態和重塑的調節的 任何化合物可能是相關的，并在影響骨的疾病或病癥和特別是骨損傷包括骨質侵蝕的治療 中具有廣泛應用。
[0008] 簡述 本申請的發明人已經發現，除了 C5aR拮抗劑具有可用性的適應癥/癥狀之外，C5aR拮 抗劑還具有治療關節破壞、骨損傷和特別是抑制骨質侵蝕的延伸的功能性。
[0009] 本發明的一個方面涉及C5aR拮抗劑用于治療或預防骨損傷的用途，例如用于治 療或預防骨損傷的方法的C5aR拮抗劑。骨損傷在此處被認為包括骨質侵蝕和骨密度損失。 此外，C5aR拮抗劑可進一步用于聯合治療或預防骨損傷和軟骨降解。這樣的治療或預防可 用于降低骨損傷的速率和/或用于改善或增加骨礦物質密度。骨損傷至少部分地是影響關 節的炎性疾病（特別是關節炎）的癥狀，因此，根據本發明，C5aR拮抗劑可用于治療或預防 患有各種形式的關節炎之一的受試者的骨損傷。
[0010] 本發明人令人驚訝地發現，使用C5aR拮抗劑的治療作用提供快速反應，因為治療 效果可在少數劑量后就已被觀察到。在一個實施方案中，本發明涉及用于治療或預防骨損 傷的方法的C5aR拮抗劑，其中在4、3、2或1個劑量后可獲得效果。
[0011] 根據本發明，拮抗劑的功能性可被認為與拮抗劑通過抑制或降低C5a與C5aR的結 合和/或通過抑制或降低C5aR介導的C5a生物學作用來詰抗C5aR的能力關聯，C5aR介導 的C5a生物學作用例如：a) C5a誘導的嗜中性粒細胞活化，b) C5a誘導的細胞迀移和/或 c) C5a誘導的嗜中性粒細胞成熟。
[0012] 本發明的C5aR拮抗劑可以是適于治療性給予的任何類型的化合物，包括抗體和 肽分子。本發明的C5aR拮抗劑可作為任選包括一種或多種藥用賦形劑的藥物組合物的一 部分給予。在一個方面，本發明涉及用于治療或預防骨損傷的方法，所述方法包括給予有需 要的個體治療有效量的本文所述的C5aR拮抗劑。
[0013] 序列表 SEQ ID NO. 1:人 C5aR MDSFNYTTPD YGHYDDKDTL DLNTPVDKTS NTLRVPDILA LVIFAVVFLV GVLGNALVVff VTAFEAKRTI NAIffFLNLAV ADFLSCLALP ILFTSIVQHH HffPFGGAACS ILPSLILLNM YASILLLATI SADRFLLVFK PIffCQNFRGA GLAffIACAVA WGLALLLTIP SFLYRVVREE YFPPKVLCGV DYSHDKRRER AVAIVRLVLG FLffPLLTLTI CYTFILLRTff SRRATRSTKT LKVVVAVVAS FFIFffLPYQV TGIMMSFLEP SSPTFLLLKK LDSLCVSFAY INCCINPIIY VVAGQGFQGR LRKSLPSLLR NVLTEESVVR ESKSFTRSTV DTMAQKTQAV 第2個環通過下劃線AA 171-206表示。
[0014] SEQ ID NO. 2:小鼠 C5aR MNSSFEINYD HYGTMDPNIP ADGIHLPKRQ P⑶VAALIIY SWFLVGVPG NALWWVTAF EPDGPSNAIff FLNLAVADLL SCLAMPVLFT TVLNHNYffYF DATACIVLPS LILLNMYASI LLLATISADR FLLVFKPIffC QKVRGTGLAff MACGVAffVLA LLLTIPSFVY REAYKDFYSE HTVCGINYGG GSFPKEKAVA ILRLMVGFVL PLLTLNICYT FLLLRTffSRK ATRSTKTLKV VMAVVICFFI FffLPYQVTGV MIAffLPPSSP TLKRVEKLNS LCVSLAYINC CVNPIIYVMA GQGFHGRLLR SLPSIIRNAL SEDSVGRDSK TFTPSTDDTS PRKSQAV 第2個環通過下劃線AA 167-203表示。
[0015] 附圖簡述 圖1示出抗-C5aR mAb與嵌合人/小鼠 C5aR的結合。圖指出源自人和小鼠的C5a受 體蛋白的區，小鼠序列用粗線表示和人序列用細線表示。
[0016] 圖2示出作為△平均熒光強度（FI)定量的C5a_誘導的⑶Ilb表達：從獲自未加 入C5a的血液的平均FI值中減去給定抗-C5aR mAb濃度的平均FI值。mAb 20/70的結果 表示為mAb濃度的函數。虛線表示IC50值，其計算為0,6 Pg/ml。
[0017] 圖3示出抗_C5aR減少CIA小鼠模型的組織學評分。圖示出分別用抗_C5aR、 Enbrel? (Etanerc印t)和同種型對照治療來治療的小鼠的組織學評分指數。對各小鼠的兩 個后爪進行關節炎變化的組織病理學終點評價。與同種型對照治療相比，用抗_C5aR治療 顯著減少組織學評分指數。
[0018] 圖4示出在CIA小鼠模型中抗-C5aR抑制骨質侵蝕和軟骨降解。對各小鼠的最壞 受累的后爪的HE染色切片評價骨質侵蝕和軟骨降解。與用抗-TNP對照抗體治療的小鼠相 比，用抗_C5aR治療顯著減少骨質侵蝕和軟骨降解兩者。
[0019] 圖5示出用抗_C5aR治療降低在單爪關節炎模型中的各種關節炎參數。從用阻斷 性抗-C5aR抗體或同種型對照抗體治療的具有DTH-關節炎的小鼠中獲得數據。抗-C5aR 治療顯著減少關節炎變化，包括滑膜炎、軟骨降解和骨質侵蝕。此外，治療顯著減少炎性細 胞的關節外浸潤。
[0020] 圖6示出在CIA小鼠模型中治療后48小時用抗_C5aR的單劑量改善關節炎。圖 6A和6B分別示出隨時間的平均臨床評分（土SEM)/組和AUC (個體臨床評分的曲線下面 積）。黑線表示平均值。圖6C示出組織學評分指數。臨床和組織病理學評價均表明顯著減 少疾病。
[0021] 圖7示出單劑量的抗-C5aR mAb后60小時DTHA模型中疾病活動減少。7A示出 兩個治療組中關節炎誘導后經60小時測量的爪和踝腫脹的曲線下面積（AUC)。顯示平均 值土 SEM，n=10。*: p 彡 0.05;林：p 彡 0.01，Student t 檢驗。7B 示出 0-3 刻度上的 在兩個治療組中關節炎和炎性參數的半定量組織病理學評分。用抗_C5aR治療的小鼠顯 示較低程度的滑膜炎、軟骨破壞和骨質侵蝕。n=10。*: p < 0. 05; **: 0. 01; ***: p < 0.001，Student t檢驗，具有Welch校正。7C示出B中的個體評分的總和（關節炎總 評分）和減去額外的關節浸潤的B中的個體評分的總和（關節炎評分）。最大可能評分分 別是 15 和 9。n=10。*: p < 0.05;林：p < 0.01，Student t 檢驗，具有 Welch 校正。
[0022] 描述 C5aR詰抗劑的用途 抑制或減少通常由配體-受體相互作用引起的生物學反應的化合物或藥物被稱為受 體拮抗劑。這樣的受體拮抗劑會結合受體，但相互作用將沒有效力。因此，拮抗劑的存在會 抑制或減少受體的配體的生物學作用。拮抗劑的作用可通過結合受體的活性位點而阻斷或 干擾配體相互作用來介導。或者，拮抗劑可在也有效防止配體結合或受體信號轉導的不同 位點上結合受體。
[0023] 已發現，基于來自數個特定關節炎疾病模型的結果，C5aR拮抗劑具有在治療炎性 疾病和病癥中的關聯性。因此，在結合C5a時由C5a受體介導的信號轉導可受到抑制或減 少，導致抑制或減少發展中的炎癥過程，因此關節腫脹減輕。此外，已發現，C5a和C5aR具 有與骨體內穩態和重塑有關的功能。本申請的發明人進一步確立，C5aR拮抗劑具有對骨損 傷的有利作用。
[0024] 本發明的一個方面涉及用于治療或預防骨損傷或用于治療或預防骨損傷的方法 的C5aR拮抗劑。在一個類似的方面中，本發明涉及C5aR拮抗劑在制備用于治療骨損傷的 藥物中的用途。
[0025] C5aR詰抗劑影響骨損傷的發展的能力可能涉及骨質侵蝕和骨密度損失中的一項 或多項。一般而言，治療是非常廣義的術語并涵蓋多個方面，包括作為對患者的益處見到的 任何作用，所述患者患有骨損傷或有發展骨損傷的風險，例如骨質侵蝕和骨密度損失中的 一項或多項。在本說明書中，當涉及觀察到骨損傷的情況時使用治療，而當涉及尚未觀察到 骨損傷的情況時使用預防。注意，在本文件的實施例中，"治療"僅是指給予化合物，而不論 該給予的任何治療效果。
[0026] 在一個實施方案中，C5aR詰抗劑用于治療骨損傷（骨質侵蝕和骨密度損失中的一 項或多項）和軟骨破壞的方法。
[0027] 骨損傷通過可導致對關節移動性有嚴重影響的連續過程發生。給定患者的骨損傷 可在患者（或醫師）知道他或她具有發生骨損傷風險之前已經開始。在其它情況中，C5aR 拮抗劑可用于預防有發生骨損傷的風險的患者的骨損傷。在一個實施方案中，C5aR拮抗劑 可用于預防性治療骨損傷的方法。
[0028] 在一些實施方案中，C5aR拮抗劑用于治療以逆轉或減少骨損傷，例如使關節的骨 質再生。在進一步的實施方案中，C5aR拮抗劑用于治療以改進骨礦物質密度。
[0029] 骨損傷可完全預防或完全治療可能是罕見的，和C5aR拮抗劑治療的目的可能更 經常是延緩或停止骨損傷的進展或預防骨損傷的進一步發展。
[0030] 在進一步的實施方案中，C5aR拮抗劑用于預防骨損傷、用于減少骨損傷和/或用 于抑制骨損傷。在進一步的實施方案中，C5aR拮抗劑用于延緩或停止骨損傷進展。在進一 步的實施方案中，C5aR拮抗劑用于抑制骨損傷的進展。
[0031] 在進一步的實施方案中，C5aR拮抗劑用于在哺乳動物受試者和特別是人受試者中 治療骨損傷的方法。從上文顯而易見的是，本發明涉及在人受試者中治療骨損傷的任何方 面，例如預防、抑制、停止和逆轉骨損傷。同樣，本發明涉及治療骨損傷，包括在人受試者中 骨質侵蝕和骨密度損失中的一項或多項。
[0032] 因此，本發明涉及用于治療受試者的骨損傷的方法的C5aR拮抗劑，其中所述受試 者是有需要的個體。因此，有需要的個體是可能獲益于治療骨損傷的個體，例如患有骨損傷 或具有發展骨損傷的風險的患者，所述骨損傷同樣包括骨質侵蝕和骨密度損失中的一項或 多項。
[0033] 在進一步的實施方案中，治療的受試者可以是患有關節炎的患者。在一個實施方 案中，受試者具有骨關節炎（變性關節疾病）。在進一步的這樣的實施方案中，骨關節炎 可以是由于對關節的創傷、關節感染或與年齡相關。在一個實施方案中，受試者具有類風 濕性關節炎，其還可包括具有青少年