檢測樣品中霉菌和酵母菌含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及食品領域，具體地，本發明涉及一種檢測樣品中霉菌和酵母菌含量的 方法。
【背景技術】
[0002] 應用GB4789. 15-2010《食品安全國家標準食品微生物學檢驗霉菌和酵母菌計數》 規定的方法檢測膠類或果醬類原料中霉菌和酵母菌的含量，檢測過程中樣品會聚集成塊， 無法檢測到樣品中的霉菌和酵母菌的含量。
【發明內容】
[0003] 本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此，本發明提 出了一種能夠檢測到溶解后集結成塊的樣品中的霉菌和酵母菌的含量，能夠提高樣品中霉 菌和酵母菌的檢出率。
[0004] 在本發明的第一方面，本發明提出了一種檢測樣品中霉菌和酵母菌含量的方法。 根據本發明的實施例，所述方法包括：
[0005] (1)將25g待測樣品置于225ml生理鹽水中，所述生理鹽水預先盛裝在第一無菌 均質袋中，并將所述待測樣品在轉速為lOOOOr/min的條件下進行第一均質處理1分鐘；（2) 將取步驟（1)所得第一均質處理后樣品IOg置于第二無菌均質袋中，并向第二無菌均質袋 中加入15ml孟加拉紅培養基，并對所述第一均質處理后樣品在轉速為8000r/min的條件下 進行第二均質處理1分鐘；以及（3)將步驟（2)所得的第二均質處理后樣品進行刮涂處理， 并在27~29攝氏度下培養5天，以便對所述待測樣品中霉菌和酵母菌的含量進行測定，其 中，所述樣品為膠類或果醬類物質。根據本發明的實施例，上述檢測樣品中霉菌和酵母菌含 量的方法中，利用均質袋實現了培養基與樣品的均勻混合，擴大了培養面積有利于菌落觀 察與計數。通過上述檢測樣品中霉菌和酵母菌含量的方法，能夠檢測到溶解后集結成塊的 樣品中的霉菌和酵母菌的含量，顯著提高了樣品中霉菌和酵母菌的檢出率，提高了檢測結 果的準確性降低了質量安全風險。
[0006] 在本發明的第二方面，本發明提出了一種檢測樣品中霉菌和酵母菌含量的方法。 根據本發明的實施例，所述方法包括：（1)將待測樣品置于生理鹽水中，所述生理鹽水預先 盛裝在第一無菌均質袋中，并將所述待測樣品進行第一均質處理；（2)將步驟（1)所得第一 均質處理后樣品置于第二無菌均質袋中，并向第二無菌均質袋中加入孟加拉紅培養基，并 對所述第一均質處理后樣品進行第二均質處理；以及（3)將步驟（2)所得的第二均質處理 后樣品進行刮涂處理和培養，以便對所述待測樣品中霉菌和酵母菌的含量進行測定。根據 本發明的實施例，在步驟（3)中的刮涂處理是指利用載玻片將樣品刮勻并使樣品均勻充滿 整個均質袋。根據本發明的實施例，上述檢測樣品中霉菌和酵母菌含量的方法中，利用均質 袋實現了培養基與樣品的均勻混合，擴大了培養面積有利于菌落觀察與計數；同時上述方 法能夠檢測到溶解后集結成塊的樣品中的霉菌和酵母菌的含量，顯著提高了樣品中霉菌和 酵母菌的檢出率提高了檢測結果的準確性降低了質量安全風險。
[0007] 根據本發明的實施例，上述檢測樣品中霉菌和酵母菌含量的方法還可以進一步包 括如下附加技術特征之一：
[0008] 根據本發明的實施例，所述樣品為膠類或果醬類物質。根據本發明的實施例，上述 方法能夠檢測到溶解后集結成塊的膠類或果醬類物質中的霉菌和酵母菌的含量，顯著提高 了膠類或果醬類物質中霉菌和酵母菌的檢出率。
[0009] 根據本發明的實施例，在步驟（1)中，所述第一均質處理是在轉速為lOOOr/min的 條件下進行1~2min，所述待測樣品在所述生理鹽水中的含量為10重量％;在步驟（2)中， 所述第二均質處理是在轉速為8000r/min的條件下進行lmin，所述步驟（1)所得第一均質 處理后樣品與所述孟加拉紅培養基的用量比是l〇g: 15ml。在上述均質處理、用量的條件下， 膠類或果醬類物質中霉菌和酵母菌的檢出率進一步提高。
[0010] 根據本發明的實施例，步驟（3)包括：將刮涂處理后的樣品在27~29攝氏度下 培養5天，以便對所述待測樣品中霉菌和酵母菌的含量進行測定。根據本發明的實施例，在 27攝氏度下培養5天后，單菌落形態變大，形態分明，以方便本領域技術人員對菌落進行計 數。在步驟（2)中，本領域技術人員可將步驟（1)中所得的第二均質處理后樣品，取相同量 的樣品至于2個均質袋中，繼而在步驟（3)中，對菌落進行計數則可計算2個均質袋中菌落 的平均數，計數結果更加接近實際值，準確度更高。
[0011] 需要說明的是，本發明的技術方案是發明人通過大量的篩選試驗而獲得的，發明 人曾經嘗試過其他的檢測方案，并未獲得有效的檢測結果。例如，發明人采用過下列檢測步 驟：（1)將待測膠類或果醬類物質用生理鹽水梯度稀釋100倍，得到稀釋液；(2)取稀釋液 與培養基在均質袋中混合，并靜置培養，通過計數菌落數以確定待測膠類或果醬類物質中 霉菌和酵母菌的含量。將待測膠類或果醬類物質稀釋100倍得到的稀釋液與培養基混合靜 置時，由于膠類或果醬類物質中霉菌和酵母菌的含量較少，容易導致每次吸取的稀釋液中 菌數不同，造成誤差。另外，還將使檢測限升高。
【具體實施方式】
[0012] 下面將結合實施例對本發明的方案進行解釋。本領域技術人員將會理解，下面的 實施例僅用于說明本發明，而不應視為限定本發明的范圍。實施例中未注明具體技術或條 件的，按照本領域內的文獻所描述的技術或條件或者按照產品說明書進行。所用試劑或儀 器未注明生產廠商者，均為可以通過市購獲得的常規產品。
[0013] 實施例1
[0014] 檢測膠類或果醬類物質中霉菌和酵母菌的含量的儀器、材料和操作方法如下所 述：
[0015] 1、實驗儀器
[0016] 恒溫培養箱：28 °C ± I °C ;
[0017] 冰箱：2°C ~5°C;
[0018] 天平：感量為0· lg;
[0019] 均質器。
[0020] 2、實驗試劑與材料
[0021] 無菌吸管：ImL (具0.0 lmL刻度）、IOmL (具0.1 mL刻度）或微量移液器及吸頭；
[0022] 無菌錐形瓶：容量250mL、500mL ;
[0023] 無菌均質：直徑90mm pH計或pH比色管或精密pH試紙；
[0024] 無菌均質袋：32cm*24cm ;
[0025] 載玻片。
[0026] 3、培養基的配制
[0027] 稱取孟加拉紅培養基36. 6g于1000 ml蒸餾水中，加熱煮沸至完全溶解，121°C高壓 滅菌15分鐘備用。
[0028] 4、操作過程
[0029] (1)稱取25g樣品置盛有225mL無菌水的無菌均質袋中，10000r/min均質Imin制 成1:10的均勻樣品（稀釋液）；
[0030] (2)稱取IOg上述1:10的均勻樣品（稀釋液）置于無菌均質袋中，加入15ml孟 加拉紅培養基，在均質機上8000r/min均質lmin，然后用載玻片將其刮勻并充滿整個均質 袋中；
[0031] (3)將步驟⑵所得到的含有培養基的無菌均質袋置于28°C ±1°C培養5d。
[0032] 對比例I
[0033] 檢測膠類或果醬類物質中霉菌和酵母菌的含量的儀器、材料和操作方法如下所 述：
[0034] 1、實驗儀器
[0035] 恒溫培養箱：28 °C ± I °C