的超濾纖維膜分別為能截留 2000-10000分子量的纖維膜；
[0041] (7)將所得蛋白多肽濃縮液，經真空噴霧干燥，即得到桑葉蛋白多肽。
[0042] 實施例2:
[0043] -種微波輔助與膜過濾制備桑葉蛋白多肽的方法，包括如下步驟：
[0044] (1)取新鮮桑葉，經清洗，干燥后，粉碎至100目，得到桑葉粉；
[0045] (2)取桑葉粉按固液比1:15加入稀堿液，并添加穩定劑，調pH值為8. 5,至微波提 取裝置加熱至55°C，在此溫度下保持lh，200目尼龍布粗過濾得到桑葉提取粗濾液；所述的 稀堿液為NaOH溶液，其加入量可使料液的pH值調至9. 0弱堿性；所述的穩定劑為亞硫酸氫 鈉，其加入量為桑葉粉質量的0. 2% ;所述的微波提取裝置的頻率為2450MHZ，功率為20KW ;
[0046] (3)酶解1 :將上述的桑葉提取粗濾液降至室溫，調其pH值為8. 5,按底物質量的 3 %加入胰蛋白酶，充分攪拌，啟動微波提取裝置加熱20min，溫度控制在55°C，得到第一次 酶解液；酶解溫度為55°C ;酶解需控制pH值9. 5 ;所述的微波提取裝置的頻率為2450MHZ， 功率為20KW ;
[0047] (4)酶解2 :待第一次酶解液降至常溫，再調整其pH值至7. 6,按底物質量2%加入 多肽復合酶，充分攪拌，再次啟動微波提取裝置加熱l〇min，溫度控制在55°C，當pH值降至 7. 2時，酶解完成；酶解溫度為55°C ;所述的多肽復合酶為中性酶；所述的微波提取裝置的 頻率為2450MHZ，功率為20KW ;
[0048] (5)待酶解完成后，再次啟動微波提取裝置加溫至90°C，維持lOmin，滅酶活即完 成；所述的微波提取裝置的頻率為2450MHZ，功率為20KW ;
[0049] (6)在滅酶活的桑葉蛋白酶解液中按底物3%加入活性炭，攪拌均勻，在70°C保 持lh，然后使用三足離心機濾去沉渣，濾液再經過陶瓷微濾膜過濾、超濾纖維膜過濾與濃 縮，合并濃縮液得到桑葉蛋白多肽濃縮液；所述的三足離心機的過濾布為200目；所述 的微濾陶瓷膜為能截留15000-20000分子量的陶瓷膜；所述的超濾纖維膜分別為能截留 2000-10000分子量的纖維膜；
[0050] (7)將所得蛋白多肽濃縮液，經真空噴霧干燥，即得到桑葉蛋白多肽。
[0051] 實施例3:
[0052] -種微波輔助與膜過濾制備桑葉蛋白多肽的方法，包括如下步驟：
[0053] (1)取新鮮桑葉，經清洗，干燥后，粉碎至100目，得到桑葉粉；
[0054] (2)取桑葉粉按固液比1:15加入稀堿液，并添加穩定劑，調pH值為8. 5,至微波 提取裝置加熱至55°C，在此溫度下保持lh，200目尼龍布粗過濾得到桑葉提取粗濾液；所述 的稀堿液為NaOH溶液，其加入量可使料液的pH值調至8. 8弱堿性；所述的穩定劑為亞硫 酸氫鈉，其加入量為桑葉粉質量的〇. 15% ;所述的微波提取裝置的頻率為2450MHZ，功率為 20KW ；
[0055] (3)酶解1 :將上述的桑葉提取粗濾液降至室溫，調其pH值為8. 5,按底物質量的 3 %加入胰蛋白酶，充分攪拌，啟動微波提取裝置加熱20min，溫度控制在55°C，得到第一次 酶解液；酶解溫度為55°C ;酶解需控制pH值8. 0 ;所述的微波提取裝置的頻率為2450MHZ， 功率為20KW ;
[0056] (4)酶解2 :待第一次酶解液降至常溫，再調整其pH值至7. 6,按底物質量2%加入 多肽復合酶，充分攪拌，再次啟動微波提取裝置加熱lOmin，溫度控制在55°C，當pH值降至 7. 2時，酶解完成；酶解溫度為55°C ;所述的多肽復合酶為風味酶；所述的微波提取裝置的 頻率為2450MHZ，功率為20KW ;
[0057] (5)待酶解完成后，再次啟動微波提取裝置加溫至90°C，維持lOmin，滅酶活即完 成；所述的微波提取裝置的頻率為2450MHZ，功率為20KW ;
[0058] (6)在滅酶活的桑葉蛋白酶解液中按底物3%加入活性炭，攪拌均勻，在70°C保 持lh，然后使用三足離心機濾去沉渣，濾液再經過陶瓷微濾膜過濾、超濾纖維膜過濾與濃 縮，合并濃縮液得到桑葉蛋白多肽濃縮液；所述的三足離心機的過濾布為200目；所述 的微濾陶瓷膜為能截留15000-20000分子量的陶瓷膜；所述的超濾纖維膜分別為能截留 2000-10000分子量的纖維膜；
[0059] (7)將所得蛋白多肽濃縮液，經真空噴霧干燥，即得到桑葉蛋白多肽。
[0060] 實施例4 :傳統葉蛋白的提取方法
[0061] 桑葉蛋白提取的最佳工藝條件為：在溫度60°C下，以質量分數0. 7%的NaOH溶液 為浸提劑，浸提時問20min，料液比為1 :4,于pH 2-3酸沉絮凝，沉淀干燥即得桑葉蛋白，葉 蛋白提取率為4.42/100g。
[0062] 以堿性蛋白酶制備桑葉蛋白水解肽的工藝：桑葉蛋白底物濃度為5% (w/v)， 40°C水浴溶解30min，以堿性蛋白酶為桑葉蛋白水解用酶，添加量為8000U/g，于55°C、 pH8. 0-9. O條件下水解4h，調節pH至3. O以下，離心，取上清液，脫鹽，干燥，得桑葉蛋白水 解肽。
[0063] 表1本發明提取方法的有益效果
[0065] 從表1可知，傳統方法不可避免使用較大量酸堿及溶劑，而且工序復雜，耗時長， 提取率低，雜質多等弱點和不足；而本發明釆用微波輔助與膜過濾技術，不需溶劑，酸堿用 量少，酶解時間短，轉化率高，且為下一步制備多肽創造更好條件。
[0066] 前述對本發明的具體示例性實施方案的描述是為了說明和例證的目的。這些描述 并非想將本發明限定為所公開的精確形式，并且很顯然，根據上述教導，可以進行很多改變 和變化。對示例性實施例進行選擇和描述的目的在于解釋本發明的特定原理及其實際應 用，從而使得本領域的技術人員能夠實現并利用本發明的各種不同的示例性實施方案以及 各種不同的選擇和改變。本發明的范圍意在由權利要求書及其等同形式所限定。
【主權項】
1. 一種微波輔助與膜過濾制備桑葉蛋白多肽的方法，其特征在于，包括如下步驟： (1) 取新鮮桑葉，經清洗，干燥后，粉碎至100目，得到桑葉粉； (2) 取桑葉粉按固液比1:15加入稀堿液，并添加穩定劑，調pH值為8. 5,至微波提取裝 置加熱至55°C，在此溫度下保持lh，200目尼龍布粗過濾得到桑葉提取粗濾液； (3) 酶解1 :將上述的桑葉提取粗濾液降至室溫，調其pH值為8. 5,按底物質量的3%加 入胰蛋白酶，充分攪拌，啟動微波提取裝置加熱20min，溫度控制在55°C，得到第一次酶解 液； (4) 酶解2 :待第一次酶解液降至常溫，再調整其pH值至7. 6,按底物質量2%加入多肽 復合酶，充分攪拌，再次啟動微波提取裝置加熱l〇min，溫度控制在55°C，當pH值降至7. 2 時，酶解完成； (5) 待酶解完成后，再次啟動微波提取裝置加溫至90°C，維持lOmin，滅酶活即完成； (6) 在滅酶活的桑葉蛋白酶解液中按底物3%加入活性炭，攪拌均勻，在70°C保持lh， 然后使用三足離心機濾去沉渣，濾液再經過陶瓷微濾膜過濾、超濾纖維膜過濾與濃縮，合并 濃縮液得到桑葉蛋白多肽濃縮液； (7) 將所得蛋白多肽濃縮液，經真空噴霧干燥，即得到桑葉蛋白多肽。2. 根據權利要求1所述的微波輔助與膜過濾制備桑葉蛋白多肽的方法，其特征在于， 步驟（2)中所述的稀堿液為NaOH溶液，其加入量可使料液的pH值調至8. 5-9. 0弱堿性；所 述的穩定劑為亞硫酸氫鈉，其加入量為桑葉粉質量的〇. 1-0. 2%。3. 根據權利要求1所述的微波輔助與膜過濾制備桑葉蛋白多肽的方法，其特征在于， 步驟（3)和步驟（4)中的酶解溫度為55°C。4. 根據權利要求1所述的微波輔助與膜過濾制備桑葉蛋白多肽的方法，其特征在于， 步驟（3)中所述的酶解需控制pH值彡7. 5。5. 根據權利要求1所述的微波輔助與膜過濾制備桑葉蛋白多肽的方法，其特征在于， 步驟（4)中所述的多肽復合酶為堿性酶、中性酶或風味酶。6. 根據權利要求1所述的微波輔助與膜過濾制備桑葉蛋白多肽的方法，其特征在于， 步驟（2)、（3)、（4)和（5)中所述的微波提取裝置的頻率為2450MHZ，功率為20KW。7. 根據權利要求1所述的微波輔助與膜過濾制備桑葉蛋白多肽的方法，其特征在于， 步驟（6)中所述的三足離心機的過濾布為200目。8. 根據權利要求1所述的微波輔助與膜過濾制備桑葉蛋白多肽的方法，其特征在于， 步驟(6)中所述的微濾陶瓷膜為能截留15000-20000分子量的陶瓷膜；所述的超濾纖維膜 分別為能截留2000-10000分子量的纖維膜。
【專利摘要】本發明屬于生物工程技術領域，具體涉及一種微波輔助與膜過濾制備桑葉蛋白多肽的方法。一種微波輔助與膜過濾制備桑葉蛋白多肽的方法，包括以下步驟：清洗、干燥、粉碎、加稀堿液、微波處理1、粗過濾、酶解1、微波處理2、酶解2、微波處理3、滅酶活、脫色、微濾、超濾、濃縮和噴霧干燥。本發明提取的桑葉蛋白多肽的方法具有收率高、純度高、溶劑消耗少、成本低和易于工業化生產的優點。本發明整個工藝流程短、時間短，能耗低、污染少、不使用有毒試劑、無污染物排放，達到清潔生產目標。
【IPC分類】C07K1/34, C12P21/06
【公開號】CN105385740
【申請號】CN201510908614
【發明人】梁滿水, 梁尚文, 曾志亮, 余冰妮
【申請人】南寧知本康業生物技術有限公司, 梁滿水
【公開日】2016年3月9日
【申請日】2015年12月9日