一種棉鈴蟲微孢子蟲株系及其在農業害蟲防治中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及害蟲生物防治技術領域，具體是一種棉鈴蟲微孢子蟲株系及其在農業 害蟲防治中的應用。
【背景技術】
[0002] 棉鈴蟲屬于鱗翅目夜蛾科，為雜食性害蟲。棉鈴蟲的幼蟲蛀食危害棉花、玉米、番 茄、辣椒等，是我國農業上的主要害蟲，也是世界農業上的主要害蟲。我國自從1990年來， 棉鈴蟲連年大爆發，造成巨大的經濟損失。后來，隨著轉Bt基因的抗蟲棉的大面積使用，棉 鈴蟲在棉田中的危害得到了有效的控制，但是，近年來有報道稱棉鈴蟲對轉基因的Bt蛋白 已經產生了嚴重抗性，在南美洲的巴西，近年來棉鈴蟲又再次大爆發。
[0003]目前防治棉鈴蟲的方法主要是采用化學農藥防治，盡管化學防治可以迅速的壓低 棉鈴蟲的蟲口密度，但是往往造成環境污染、殺傷大量有益動物，人畜中毒和害蟲產生抗藥 性等不良后果。生物農藥防治棉鈴蟲不但可以有效控制棉鈴蟲的危害，而且不殺傷天敵、對 環境友好、對人畜安全，具有十分廣闊的應用前景。因此，開發利用其他的有效生物防治資 源對棉鈴蟲進行防治，有利于提高防治效果，減緩抗性發展，具有重要意義。
[0004] 微孢子蟲是昆蟲病原微生物，屬于專性細胞內寄生的單細胞原生生物。它一旦侵 入寄主昆蟲體內，便能夠通過食物，接觸等將病原體傳播給其他個體，而且可以通過卵傳染 給后代，從而引起昆蟲微孢子蟲病的發生和流行，是自然界制約昆蟲種群密度的重要因素 之一。
[0005] 雖然目前已經有報道棉鈴蟲核型多角體病毒可以用于生物防治棉鈴蟲，但是微孢 子蟲對棉鈴蟲的防治具有多種優勢。第一、棉鈴蟲核型多角體病毒對野外環境較為苛刻，對 紫外線敏感，而微孢子蟲較病毒更耐紫外線，可以滿足大田使用的要求。第二、棉鈴蟲核型 多角體病毒專一侵染棉鈴蟲殺蟲譜窄，而棉鈴蟲微孢子蟲可以侵染包括棉鈴蟲、小菜蛾、甜 菜夜蛾、菜青蟲、甘藍夜蛾、二化螟、稻縱卷葉螟等多種鱗翅目害蟲，其殺蟲譜廣。第三、棉鈴 蟲核型多角體病毒只能通過食入傳播侵染棉鈴蟲，而不能垂直傳播給下代的卵。棉鈴蟲微 孢子可以垂直傳播侵染下代的卵，造成下一代的幼蟲帶有微孢子蟲，并可以通過接觸傳播 侵染其他昆蟲，極大的控制整體的蟲群基數。
[0006] 因而，開發棉鈴蟲微孢子蟲用于農業害蟲防治具有現實意義。
【發明內容】
[0007] 本發明的目的在于提供一種棉鈴蟲微孢子蟲株系，及其在防治包括棉鈴蟲、小菜 蛾、甜菜夜蛾、菜青蟲、甘藍夜蛾、二化螟、稻縱卷葉螟等多種鱗翅目害蟲中的應用。
[0008] 為實現上述目的，本發明提供如下技術方案： 一種棉鈴蟲微孢子蟲株系，棉鈴蟲微孢子蟲FDK001株系，保藏于中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No. 11289。
[0009] 所述的棉鈴蟲微孢子蟲株系的制備方法，包括以下步驟： (1) 將棉鈴蟲微孢子蟲FDKOOl株系的孢子液噴灑在棉鈴蟲飼料上，喂食棉鈴蟲； (2) 棉鈴蟲食入帶有棉鈴蟲微孢子蟲FDK001株系的飼料后，被棉鈴蟲微孢子蟲感染而 死亡； (3) 取死亡的棉鈴蟲蟲體中的棉鈴蟲微孢子蟲FDK001株系的孢子，即為防治農業害蟲 的活性成分。
[0010] 作為本發明進一步的方案：步驟（1)中，所述孢子液與棉鈴蟲飼料的比例為50微 升孢子液噴灑于1立方厘米的飼料上。
[0011] 作為本發明再進一步的方案：所述的孢子液中孢子的濃度為IXlO4孢子/ml -IX 10s孢子/ml。
[0012] 作為本發明再進一步的方案：所述的棉鈴蟲的飼養條件為25-30Γ，相對濕度 60-70%，每日光照時間16小時。
[0013] 作為本發明再進一步的方案：步驟（3)中，具體可以通過如下方法獲取死亡蟲體 中所述的棉鈴蟲微孢子蟲FDK001株系微孢子：將步驟（2)中所述死亡的棉鈴蟲研磨、再 用120目的網篩過濾，將所有過濾得到的組織液用等體積的水稀釋后，進行如下差速離心： 500-1000轉/分鐘離心15分鐘取上清，將上清液3000轉/分鐘離心30分鐘取沉淀，即為 所述的FDK001棉鈴蟲微孢子蟲株系的孢子。
[0014] 所述的棉鈴蟲微孢子蟲株系在防治農業害蟲中的應用。
[0015] 作為本發明再進一步的方案：所述害蟲為鱗翅目害蟲，包括棉鈴蟲、小菜蛾、甜菜 夜蛾、菜青蟲、甘藍夜蛾、二化螟和稻縱卷葉螟。
[0016] 作為本發明再進一步的方案：包括含有所述棉鈴蟲微孢子蟲FDK001株系孢子成 分的農業害蟲防治劑。
[0017] 作為本發明再進一步的方案：所述防治劑包括潤濕劑，為吐溫80,十二烷基苯磺 酸鈉、十二烷基硫酸鈉、烷基萘磺酸鈉、脂肪醇聚乙二醇醚硫酸鹽、脂肪醇聚氧乙烯醚、壬 基酚聚氧乙烯醚、山梨醇脂肪酸酯聚氧乙烯醚中的一種或幾種的混合物；包括分散劑，為 ΝΝ0、木質素磺酸鈉、木質素磺酸鈣、聚丙烯酸鈉、亞甲基雙萘磺酸鹽、烷基氨基牛磺酸鹽、亞 甲基雙萘磺酸鈉甲醛縮合物、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物、羧甲基纖維素、聚乙烯醇、聚 乙烯吡咯烷酮、三聚磷酸鈉、烷基萘磺酸鹽等中的一種或幾種混合物；包括防凍劑，為蔗糖、 乙二醇、丙二醇、甘油等中的一種或幾種的混合物；包括紫外防護劑，為苯丙氨酸、酪氨酸、 色氨酸、二苯甲酮、二甲氧基二苯甲酮、甲氧基肉桂酸辛酯、水楊酸辛酯等中的一種或幾種 的混合物。
[0018] 與現有技術相比，本發明的有益效果是：本發明提供的棉鈴蟲微孢子蟲可以用于 防治棉鈴蟲、小菜蛾、甜菜夜蛾、菜青蟲、甘藍夜蛾、二化螟、稻縱卷葉螟等多種鱗翅目農業 害蟲。該產品屬于生物農藥，對環境和人、畜、禽無毒害，對天敵安全，應用前景廣闊。
【具體實施方式】
[0019] 以下的實施例子便于更好的理解本發明，但并不限定本發明。下述的實施例子中 的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例子中所用的實驗材料，如無特殊說 明，均為自常規生化試劑商店購買得到的。以下實施例子中的定量實驗，均設置三次重復實 驗，結果取平均值。
[0020] 實施例1 棉鈴蟲微孢子蟲FDKOOl株系的獲得 將田間采集患病的棉鈴蟲(棉鈴蟲死蟲多為黑色死亡，不化水，蟲體軟，表皮容易破裂， 中腸腫脹變粗，脆弱易斷)，研磨、過濾、鏡檢，微孢子蟲在顯微鏡下為無色，折光性強，長卵 形，少數為腎形，大小約4. 5umX 2. 5um，用Giemsa染色，核被染色為淺紅色，細胞質染色為 藍色。將各個野生棉鈴蟲微孢子蟲株系以一系列的濃度涂抹在棉鈴蟲飼料上，之后飼喂棉 鈴蟲，收獲死亡較早的蟲體(代表毒力強的毒株)，經過研磨、過濾、離心等。得到純化的棉鈴 蟲微孢子蟲。連續篩選10代，得到棉鈴蟲微孢子蟲AeJioiAii/is) FDK001株系。
[0021] 在2015年10月19日將棉鈴蟲微孢子蟲（Afeseffi3 AdioFDK001株系保 藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC，地址北京市朝陽區北辰 西路1號院3號)，保藏編號CGMCC No. 11289。棉鈴蟲微孢子蟲（Afeseffi3 FDK001 株系 CGMCC No. 11289 簡稱 FDK001 株系。
[0022] 實施例2 F