用于檢測宮頸癌的多肽、檢測器件和檢測試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物檢測領域，特別是可用于宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷的多 肽、包含該多肽的檢測器件的檢測試劑盒。
【背景技術】
[0002] 抗原一抗體檢測是免疫檢測的常用檢測方法。大量研究表明，血清或血漿中的腫 瘤相關抗原能誘導機體產生自身抗體，在眾多患者血清中既存在腫瘤抗原，也存在針對該 腫瘤抗原的白身抗體。因此，既可以利用抗體檢測腫瘤抗原，也可以利用抗原檢測腫瘤抗原 的自身抗體，但利用腫瘤自身抗體檢測腫瘤的特異性和敏感性均比利用腫瘤抗原檢測腫瘤 要高得多。很多腫瘤相關抗原不僅在腫瘤患者體內存在，在正常人體內也存在，因此檢測腫 瘤相關抗原作為診斷依據可信性差。而腫瘤白身抗體在正常人體內含量很低檢測不到或根 本不存在，若體內腫瘤白身抗體水平明顯增高，則表明體內存在異常免疫情況，表明體內相 關抗原水平發生波動，預;^疾病的存在或原有疾病加重。
[0003] 近年來的研究表明，在惡性腫瘤體積發展到可用現代影像學技術檢出之前3-5 年，患者血中可出現高濃度的腫瘤相關抗原自身抗體。因此，檢測血中腫瘤相關抗原自身抗 體具有預測腫瘤發病風險和早期診斷腫瘤的重要價值。是腫瘤臨床診斷領域的重點發展方 向之一。在國外已有診斷肺癌和乳腺癌的早期診斷試劑盒市售。然而，目前所報道的自身 抗體檢測方法敏感度低，特異性差，假陰性比率可高達50%以上。其主要原因是由于每一種 腫瘤相關抗原自身抗體在癌癥患者中的陽性檢測率平均在10%左右。如何提高診斷試劑敏 感度是當前需要函待解決的關鍵問題。比較行之有效的方法是尋找新的可充當腫瘤標志物 的自身抗原，然后與現有己知的腫瘤相關抗原自身抗體組合成具有敏感度高和特異性強的 診斷試劑盒。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種多肽、包含該多肽的檢測器件、以及包含該檢測器件 的檢測試劑盒，它們對宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷有用的。本發明目的在于提供該 多肽在制備可用于宮頸癌臨床輔助診斷的檢測試劑盒中的用途。
[0005] 即，本發明包含下述技術方案：
[0006] 1. 一種多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO :1所示，即：
[0007] NGSCWGAGEENCQKLTKIIC。
[0008] 2. -種檢測器件，其包括：
[0009] 固體載體，以及
[0010] 連接于該固體載體上的權利要求1所述的多肽。
[0011] 3.根據權利要求2所述的檢測器件，其中，所述固體載體是iPDMS薄膜。
[0012] 4.根據權利要求2所述的檢測器件，其用于宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷。
[0013] 5. -種檢測試劑盒，其包括權利要求2-4中任一項所述的檢測器件。
[0014] 6.根據權利要求5所述的檢測試劑盒，其用于宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診 斷。
[0015] 7.權利要求1所述的多肽在制備檢測試劑盒中的用途。
[0016] 8.根據權利要求7所述的用途，其中，所述檢測試劑盒用于宮頸癌的早期篩查和 臨床輔助診斷。
[0017] 9.根據權利要求7所述的用途，其中，所述檢測試劑盒包括權利要求2-4中任一項 所述的檢測器件。
[0018] 將本發明應用于宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷，能夠取得令人滿意的效果。
【附圖說明】
[0019] 圖I iPDMS薄膜的制作過程進行說明的示意圖。
[0020] 圖2說明多肽微陣列點樣模式的示意圖。
[0021] 圖3是顯示對健康正常人或非宮頸癌病人血清進行檢測的結果的照片。
[0022] 圖4是顯示對宮頸癌病人血清進行檢測的結果的照片。
【具體實施方式】
[0023] 本發明的多肽
[0024] 在另一個方面中，本發明提供對宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷有用的多肽， 由SEQ ID N0:1所示的氨基酸序列構成，即：NGSCWGAGEENCQ KLTKIIC。如實施例所示，本發 明的多肽對宮頸癌病人的血清呈陽性反應，而對健康正常人或非宮頸癌病人血清呈陰性反 應。因此，本發明的多肽作為宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷工具是有用的。本發明的 多肽可以用于制造可用于宮頸癌的早期篩查和臨床輔助診斷的檢測器件（例如下述的本 發明的檢測器件）或檢測試劑盒（例如下述的本發明的檢測試劑盒）。
[0025] 本發明的多肽可以適宜采用（1)化學合成方法、或（2)酶反應合成方法等公知方 法來獲得，但不限于此，其中化學合成更為簡便。在化學合成本發明的多肽情況下，通過使 用肽合成儀合成或者半合成該多肽來進行。作為化學合成方法，可以列舉出例如肽固相合 成法等。這樣合成的肽可以采用常規手段例如離子交換色譜、反相高效液體色譜、親和色譜 等進行純化。這樣的肽固相合成方法以及其后的肽純化都是本技術領域公知的。
[0026] 此外，在通過酶反應生產本發明的多肽的情況下，可以采用例如國際公開小冊子 W02004/011653號所述的方法。即，可以這樣來生產：將一方的氨基酸或二肽的羧基末端被 酯化或酰胺化而得到的氨基酸或二肽、與氨基酸處于游離狀態的氨基酸（例如羧基保護的 氨基酸）在肽合成酶的存在下進行反應，生成的二肽或三肽。作為肽合成酶，可以列舉出： 具有生成肽的能力的微生物的培養物、由該培養物分離的微生物菌體、或該微生物的菌體 處理物、或該微生物來源的肽合成酶。
[0027] 而且，除了上述的酶方法、化學合成方法以外，還可以采用例如基因工程方法來生 產本發明的多肽。
[0028] 本發明的多肽的氨基酸序列可以采用常規的方法進行分析和確認，例如可以利用 質譜、色譜等方法來進行分析和確認。
[0029] 本發明的檢測器件
[0030] 在另一方面中，本發明還提供一種檢測器件（本發明的檢測器件），其包括固體載 體、以及連接于該固體載體上的本發明的蛋白質或本發明的多肽。所述檢測器件對于宮頸 癌的早期篩查和臨床輔助診斷是有用的。
[0031] 在本發明中，對固體載體沒有特殊限制，只要是作為固體或不溶性材料（例如是 可以通過過濾、沉淀、磁性分離等從反應混合物中分離的材料）的載體即可。
[0032] 構成固體載體的材料包括但不限于：硅膠（聚二甲基硅氧烷，PDMS)、纖維素、特 氟隆TM、硝基纖維素、瓊脂糖、葡聚糖、殼聚糖、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚酯、聚碳酸酯、聚 酰胺、聚丙烯、尼龍、聚偏二氟乙烯、膠乳、二氧化硅、玻璃、玻璃纖維、金、鉑、銀、銅、鐵、不銹 鋼、鐵氧體、硅晶片、聚乙烯、聚乙烯亞胺、聚乳酸、樹脂、多糖類、蛋白（白蛋白等）、碳或它 們的組合等。
[0033] 固體載體的形狀包括但不要限于：珠子、磁珠、薄膜、微細管、濾膜、板、微量板、碳 納米管、傳感器芯片等。正如本技術領域公知的那樣，薄膜或板等平坦的固體載體上可以設 置凹坑、溝槽、濾膜底部等。
[0034] 在本發明中，磁珠可以具有約25nm_約Imm范圍的球體直徑。在優選的實施方式 中，磁珠具有約50nm_約10 μπι范圍的直徑。磁珠的尺寸可以根據特定的用途來進行選擇。
[0035] 在本發明中，由Sepharose等高交聯球形瓊脂糖制成的珠子具有約24 μm-約 165 μ m范圍的直徑。優選地，高交聯球形瓊脂糖珠具有約24 μ m-約44 μ m范圍的直徑。高 交聯球形瓊脂糖珠的尺寸可以根據特定的用途來進行選擇。
[0036] 具有疏水性表面的固體載體的例子包括可從Polysciences，Warrington，PA或 Spherotech，Liberville，IL購買的制品等聚苯乙稀膠乳珠。
[0037] 二氧化硅（SiO2)-處理或二氧化硅（SiO2)基的固體載體的例子包括可從 Polysciences，Warrington，PA購買的超常磁性二氧化娃珠等，其可以用于捕捉核酸（例如 DNA)。或者，還可以使用可從Dynal Biotech購買的M-280等。
[0038] 具有親水性表面的磁珠可用于捕捉增殖期的細菌細胞、核酸以及其它成分。作為 該磁珠的例子，可以列舉出Poly