一種食醋中耐高溫產氣嗜酸菌的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及釀造食醋檢測技術領域，尤其是一種食醋中耐高溫產氣嗜酸菌的檢測方法。
【背景技術】
[0002]食醋是以糧食為原料，通過微生物制曲、糖化、酒精發酵、醋酸發酵等工藝和各種氨基酸、酶制劑的結合釀制而成的。在成品醋生產過程中會有微生物的存在，例如:霉菌、酵母菌、一定數量的細菌以及放線菌。根據食醋屬于調味性食品的屬并綜合其風味，其滅菌條件為:60-80°C恒溫20-30min或者醋液加溫到100°C維持5min，若無特殊污染，上述條件可以將食醋在釀造過程中的菌殺死，且符合現如今釀造食醋的衛生標準GB2719-2003所制定的微生物要求:大腸菌群少于3MPN/100mL，菌落總數不得超過lOOOOcfu/mL，不得檢出致病菌，灌裝密封后不會出現產氣嗜酸現象。若其出現產氣嗜酸現象則說明被其他菌污染，上述滅菌條件則不能將其殺死，則不能符合釀造食醋衛生標準中的大腸菌群和菌落總數(指在一定條件下(如需氧情況、營養條件、PH、培養溫度和時間等)每克(每毫升)檢樣所生長出來的細菌菌落總數)的要求。因此，簡單且快速檢測出造成釀造食醋產氣嗜酸現象的菌種類和位置尤為關鍵。
[0003]食品微生物檢測指標有三個:大腸菌群、菌落總數以及致病菌。常見微生物檢測方法有:培養膜法、螺旋平板計數法、濾膜法、ATP生物熒光法、電阻抗法、顏色變化法、流式細胞儀技術以及激光掃描技術等，這些技術成本高，不適于工業化生產的公司進行微生物檢測。
【發明內容】
[0004]本發明所要解決的技術問題在于提供一種具有降壓功效的組合物。
[0005]本發明所要解決的另一技術問題在于提供上述具有降壓功效的組合物的制備方法。
[0006]為解決上述技術問題，本發明的技術方案是:
[0007]—種食醋中耐高溫產氣嗜酸菌的檢測方法，具體步驟如下:
[0008](1)按重量體積比g/ml或按體積比計將待測樣品以1:10的比例稀釋并搖勻(樣品為固體時，10g樣品放入含有100mL蒸餾水且一起滅菌的三角瓶；樣品為液體時，10mL樣品放入含有100mL蒸餾水且一起滅菌的三角瓶)；
[0009](2)取稀釋后溶液繼續進行梯度稀釋，將步驟(1)中稀釋溶液和每個梯度的稀釋液樣品各取6mL用于微生物實驗，其中，每個試管lmL，共兩個試管用于檢測大腸菌群；每個平板各lmL，共四個平板一一兩個平板檢測菌落總數，另外兩個平板檢測霉菌；
[0010](3)菌群靜止培養，其中，
[0011]大腸菌群37 °C靜置培養24h±2h ;
[0012]菌落總數37°C靜置培養48h±2h ;
[0013]霉菌以及酵母菌28°C靜置培養5_7d±2h，計數觀察過后，利用伊紅美藍培養基檢測具有會發生產氣嗜酸現象的菌，進行挑菌劃線，劃線后37°C靜止培養24h±2h，培養過后，進行染色并用顯微鏡觀察確定染菌。
[0014]對于染菌的種類以及最后對其理化指標進行檢測可利用B10L0G鑒定系統。
[0015]優選的，上述食醋中耐高溫產氣嗜酸菌的檢測方法，所述步驟(2)中梯度稀釋的方法為lmL稀釋液加入含有9mL蒸餾水且一起滅過菌的試管中，一次稀釋2次。
[0016]優選的，上述食醋中耐高溫產氣嗜酸菌的檢測方法，所述步驟(3)中使用伊紅美藍培養基對引起產氣嗜酸菌進行檢測，所述伊紅美藍培養基的組方為每升培養基中:蛋白胨log ;乳糖10g ;磷酸氫二鉀2g ;瓊脂20-30g ;2%伊紅水溶液20ml ;0.5%美藍水溶液13ml ;其余為水(蒸餾水或去離子水);攪拌至完全溶解，121°C高壓滅菌15min即得。
[0017]原理:當大腸桿菌分解乳糖產酸時細菌帶正電荷被染成紅色，再與美藍結合形成紫黑色菌落，并帶有綠色金屬光澤。而產氣桿菌則形成呈棕色的大菌落；在堿性環境中不分解乳糖產酸的細菌不著色，伊紅和美藍不能結合，故沙門氏菌等為無色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培養基上不生長。
[0018]優選的，上述食醋中耐高溫產氣嗜酸菌的檢測方法，所述步驟(3)中:
[0019]大腸菌群的檢測，使用乳糖膽鹽培養基，所述乳糖膽鹽培養基的組方為每升培養基中:胨20.0g ;乳糖5.0g ;氯化鈉5.0g ;磷酸氫二鉀4.0g ;磷酸二氫鉀1.3g ;去氧膽酸鈉/牛膽鹽0.5g (去氧膽酸鈉)/2.0g (牛膽鹽)；其余為水(蒸餾水或去離子水)；最終pH =
7.4±0.2 ；
[0020]使用方法:在燒杯中稱取上述各組分加入蒸餾水或去離子水，攪拌加熱煮沸至完全溶解，115°C滅菌15min，待冷至常溫后，備用；
[0021]原理:胨提供碳氮源；乳糖是可發酵的糖類；氯化鈉維持均衡的滲透壓；磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀為緩沖劑；牛膽鹽和去氧膽酸鈉為選擇性抑菌劑；
[0022]菌落總數的檢測，使用平板計數培養基，所述平板計數培養基的組方為每升培養基中:胰蛋白胨:5.0g ;酵母浸粉:2.5g ;葡萄糖:1.0g ;瓊脂:15.0g ;其余為水(蒸餾水或去離子水)；pH 7.0 士 0.2 ;
[0023]使用方法:在燒杯中稱取上述各組分加入蒸餾水或去離子水，攪拌至完全溶解，121°C高壓滅菌15min，備用；
[0024]原理:胰蛋白胨提供碳源和氮源；酵母膏粉提供B族維生素；葡萄糖提供能源；瓊脂是培養基的凝固劑；
[0025]霉菌以及酵母菌的檢測，使用孟加拉紅培養基，所述孟加拉紅培養基的組方為每升培養基中:蛋白胨5g ;葡萄糖10g ;磷酸二氫鉀lg ;硫酸鎂0.5g ;瓊脂15g ;孟加拉紅
0.03g ;氯霉素0.lg ;其余為水(蒸餾水或去離子水);最終pH = 7.2±0.2 ;
[0026]使用方法:在燒杯中稱取上述各組分加入蒸餾水或去離子水，攪拌至完全溶解，121°C高壓滅菌20min，備用；
[0027]原理:蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；磷酸二氫鉀為緩沖劑；硫酸鎂提供必須的微量元素；瓊脂是培養基的凝固劑；氯霉素可抑制細菌的生長；孟加拉紅作為選擇性抑菌劑可抑制細菌的生長，并可減緩某些霉菌因生長過快而導致菌落漫延生長。
[0028]本發明的有益效果:
[0029]上述食醋中耐高溫產氣嗜酸菌的檢測方法，通過最簡單且有效的方法檢測出釀造食醋發生產氣嗜酸現象的菌種，且適用于釀造食醋的大曲、原輔料以及罐裝密封所需的瓶和蓋子的檢測，有利于污染源和污染情況的判斷，使污染范圍降低且減少企業的損失，適合規模化工業生產的需求。
【具體實施方