一種低成本高效乳酸菌培養基及其用圖
【技術領域】
[0001]本發明涉及微生物培養發酵技術領域，具體地，涉及一種低成本高效乳酸菌培養基及其用途，專用于多種乳酸菌的快速、高密度培養。
【背景技術】
[0002]乳酸菌(Lactic acid bacteria, LAB)是一類能夠發酵糖類并產生乳酸、不形成芽孢、革蘭氏染色陽性細菌的總稱。乳酸菌已經被廣泛應用于食品發酵工業，從而提高食品營養價值，改善食品風味。但是，乳酸菌營養要求復雜，一般需要多種氨基酸酸類化合物、B族維生素、各種礦物元素等生長因子，不能利用復雜的碳水化合物。乳酸菌的傳統培養基成分復雜，價格較高，其中MRS和M17培養基是目前最常用的兩種乳酸菌培養基。MRS培養基包括蛋白胨、酵母提取物、檸檬酸二銨、葡萄糖、牛肉浸膏、MgS04.7H20、K2HP04、MnS04.4H20、乙酸鈉、吐溫80等10種營養成分；M17培養基包括植質蛋白胨、酵母提取物、抗壞血酸、MgS04.7H20、聚蛋白胨、牛肉浸膏、β -甘油磷酸二鈉等7種營養成分。
[0003]杏鮑燕YPleurotus eryngii (DC.Ex.Fr.) Quel.]屬于傘菌目(Aaricales)食用真菌，菌體肉質肥厚，口感鮮嫩，營養豐富。目前，杏鮑菇在我國的福建、江蘇、廣東、上海等地具有較大規模的工廠化栽培，年產量達50萬噸以上，價格6-15元/公斤。在杏鮑菇栽培過程中產生大量的次等菇，是開發乳酸菌培養基的廉價原料，并且能夠增加杏鮑菇工廠化栽培產業的經濟價值。
[0004]因此，現有技術還有待改進和發展。
【發明內容】
[0005]鑒于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種配方簡單、原料易于購買、成本低廉的食品級乳酸菌培養基及其應用。
[0006]本發明的目的通過以下技術方案實現:
一種乳酸菌培養基，其中，所述培養基組分包括杏鮑菇、乙酸鈉和維生素B2。
[0007]所述的乳酸菌培養基，其中，所述乳酸菌培養基以1L計算，包括以下成分，各成分的濃度或用量:
杏鮑菇 100-200 g ；
乙酸鈉 3-7 g ;
維生素 B2 0.1-2.5 mg 加蒸餾水補足1L。
[0008]所述的乳酸菌培養基，其中，所述乳酸菌培養基的pH值為6.8。
[0009]一種新型乳酸菌培養基的制備方法，其特征在于包括以下步驟:
(1)杏鮑菇的預處理:將杏鮑菇切成小塊，稱取100-200g杏鮑菇，加水100-200 mL，用打漿機打漿，再補水600-800 mL，轉移至鍋內煮沸20 min，用紗布過濾，取濾液；
(2)向濾液中添加3-7g乙酸鈉和0.1-2.5 mg維生素B2，然后利用蒸饋水定容至1L ；
(3)利用NaOH或HCI溶液，將pH值調整至6.8，121°C濕熱滅菌20 min。固體培養基需在步驟(2)的濾液中添加瓊脂粉10-20 g/Lo
[0010]一種如上述乳酸菌培養基的應用，其中，所述乳酸菌包括乳酸乳球菌乳酸亞 ft (Lactococcus lactis subsp.lactis)、乳酸乳球菌乳脂亞 ft (Lactococcuslac tis subsp.cremoris)、植物乳桿菌(Lac tobacillus plan tarum)、副干酪乳桿菌(Lac tobacillus paracasei')、戊糖片球菌(Ped1coccus pen tosaceus)、鼠李糖乳桿菌(Lac tobacillus rhamnosus)等。
[0011]本發明的有益效果是:
(1)培養基配方成分簡單，所用原料容易大批量獲得，培養基制作方法簡單；
(2)原料價格低廉，不需要傳統乳酸菌培養基中的牛肉浸膏、蛋白胨、酵母提取物等價格高的原料，本發明培養基成本較傳統培養基大幅降低；
(3)本發明提供的培養基能夠用于培養多種乳酸菌，具有極佳的實用性，培養液菌體密度達到109 CFU/mL以上，菌液具有較強的存活能力。本發明提供的培養基接近、達到、甚至超過了傳統培養基，完全達到實驗室和生產的要求，可以很好的替代價格較高的傳統培養基。
【附圖說明】
[0012]圖1為本發明培養基為液體培養基時的物理形態。
[0013]圖2為乳酸乳球菌乳酸亞種在本發明培養基中的生長動態實驗結果。
[0014]圖3為植物乳桿菌在本發明培養基中的生長動態實驗結果。
[0015]圖4為乳酸乳球菌乳脂亞種在本發明培養基中的生長動態實驗結果。
[0016]圖5為副干酪乳桿菌在本發明培養基中的生長動態實驗結果。
[0017]圖6為戊糖片球菌在本發明培養基中的生長動態實驗結果。
[0018]圖7為鼠李糖乳桿菌在本發明培養基中的生長動態實驗結果。
【具體實施方式】
[0019]下面結合具體實施例對本發明進行詳細的說明。
[0020]本發明所用杏鮑菇是從超市隨機購買。本發明所用乳酸菌菌株部分是本研究室分離、鑒定或收集獲得，部分是通過市售購買獲得，具體乳酸菌菌株包括乳酸乳球菌乳酸亞種(Lac tococcuslac tis subsp.lac tis) SLPE1-3菌株、乳酸乳球菌乳脂亞種 1.Lactococcuslactis subsp.cremoris) MG1363 菌株、植物乳桿菌{Lactobacillusplan tarum ) 1-3 菌株、副干酪乳桿菌(Zac tobacillus paracasei) M9_4 菌株、戊糖片球菌 QPed1coccuspentosaceus) SR2-6 菌株、鼠李糖乳桿菌 QLactobacillus rhamnosus)ATCC53103 菌株等。
[0021]以下實施例用于說明本發明，但并不限定于本發明。本領域的技術人員從本發明公開的內容直接或間接導出的所有變形，均應認為是本發明的保護范圍。若無特別說明，下述實施例中所用技術方法均為常規方法；若無特別說明，下述實施例中所用實驗材料，均為常規材料和化學試劑。
[0022]以下所述的MRS培養基為:蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，檸檬酸二銨2 g，葡萄糖 20 g，牛肉浸膏 10 g，MgS04.7H20 0.58 g，MnS04.4H20 0.25 g，K2HP04 2 g，乙酸鈉 2 g，吐溫80 1 mL，蒸餾水定容至1000 mL，pH 6.8，121°C條件下濕熱滅菌20 min。固體培養基需添加瓊脂粉16 g/Lo
[0023]以下所述的M17培養基為:植質蛋白胨5 g，酵母提取物5 g，抗壞血酸0.5 g，MgS04.7H20 0.25 g，聚蛋白胨5 g，牛肉浸膏2.5 g，β -甘油磷酸二鈉19 g，蒸餾水定容至1000 mL，121°C條件下濕熱滅菌20 min。
[0024]實施例1: 一種新型乳酸菌培養基的制作方法
一種新型乳酸菌培養基，配置1 L所述乳酸菌培養基，由以下成分組成:杏鮑菇200 g、乙酸鈉5 g和維生素B2 0.5 mg，其余用蒸饋水補足至1 L。
[0025]一種新型乳酸菌培養基的制作方法，其特征在于包括以下步驟:
(1)杏鮑菇的預處理:將杏鮑菇切成小塊，稱取200g杏鮑菇，加水200 mL，用打漿機打成楽，再補水600 mL，轉移至鍋內煮沸20 min，用紗布過濾，取濾液；
(2)向濾液中添加5g乙酸鈉和0.5 mg維生素B2，然后利用蒸饋水定容至1000 mL ；
(3)利用1mol/L的NaOH或HCI溶液，將pH值調整至6.8，121°C濕熱滅菌20 min ；
(4)結果分析:如圖1，配置的液體培養基滅菌后基本透明，長時間放置不產生明顯的沉淀，無分層現象，物理形態穩定。
[0026]實施例2:乳酸乳球菌乳酸亞種生長動態測定實驗 (1)受試培養基:本發明培養基(簡稱PSR)、MRS和M17。
[0027](2)乳酸乳球菌乳酸亞種SLPE1-3菌株來源:本實驗室從腐敗杏鮑菇表面分離、鑒定獲得。
[0028](3)本發明培養基:200 g杏鮑菇、5 g乙酸鈉和0.5 mg維生素B2，其余用蒸餾水補足至1 L，pH值調整至6.8，121 °C濕熱滅菌20 min。
[0029](4)乳酸菌種子液的制備:利用滅菌牙簽挑取乳酸乳球菌乳酸亞種SLPE1-3菌株單菌落接種于MRS培養基，30°C靜置培養14 h，作為種子菌液。
[0030](5)生長測定:將種子菌液分別以0.5% (v/v)比例接種到PSR、MRS和M17培養基中，每個處理3個重復。將接種好的培養基放置在30°C靜置培養，分別于接種后0、3、9、18、30、48、72、120 h稀釋涂布MRS固體平板，將涂布好的平板放置在30 °C靜置培養，調查每個平板形成的單菌落個數，計算每毫升培養液中含有的乳酸菌細胞個數，即CFU/mL。
[0031](6)結果分析:結果發現(圖2)，在培養的前48 h，乳酸乳球菌乳酸亞種在本發明培養基(PSR)中的菌體密度與傳統培養基MRS及M17在一個數量級別，培養9_48 h期間，乳酸乳球菌乳酸亞種在三種培養基中的菌體密度在1.23-6.81X 109 CFU/mL之間；48 h后，3種培養基的菌體密度開始下降，特別是MRS培養基中的菌體密度在120 h迅速下降到1.45X 105 CFU/mL，但是本發明培養基的菌體密度為1.49X 108 CFU/mL，與M17培養基的菌體密度(1.45X108 CFU/mL)相近。這些結果表明，乳酸乳球菌乳酸亞種在本發明培養基中的生長顯著優于MRS培養基，與M17培養基的培養效果相當。
[0032]實施例3:植物乳桿菌生長動態測定實驗
(1)受試培養基:本發明培養基(簡稱PSR)、MRS和M17。
[0033](2)植物乳桿菌1-3菌株來源:本實驗室從發酵蔬菜中分離、鑒定獲得。
[0034](3)本發明培養基:100 g杏鮑菇、3 g乙酸鈉和1.5 mg維生素B2，其余用蒸餾水補足至1 L，pH值調整至6.8，121 °C濕熱滅菌20 min。
[0035](4)乳酸菌種子液的制備:利用滅菌牙簽挑取植物乳桿菌1-3菌株單菌落接種于MRS培養基，30°C靜置培養14 h，作為種子菌液。
[0036](5)生長測定:將種子菌液分別以0.5% (v/v)比例接種到PSR、MRS和M17培養基中，每個處理3個重復。將接種好的培養基放置在30°C靜置培養，分別于接種后0、3、9、18、30、48、72、120 h稀釋涂布MRS固體平板，將涂布好的平板放置在30 °C靜置培養，調查每個平板形成的單菌落個數，計算每毫升培養液中含有的乳酸菌細胞個數，即CFU/mL。
[0037](6)結果分析:結果發