野生松茸馴化母種制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及松茸培養領域，具體涉及一種野生松茸馴化母種制備方法。
【背景技術】
[0002]松鸞Tricholoma matsutake Sing.是世界著名的野生食用菌之一。近幾年來云南出口的松茸已占世界主要市場——日本市場銷售量的60%以上，年出口松茸創匯達到4000萬美元以上，2004年達到5361萬美元，出口量為1280.85噸，其中鮮松茸973.5噸，松茸制品307.35噸。據調查，德欽縣和香格里拉縣農民經濟收入的60%以上來源于松茸。松茸產業的持續、健康發展將為山區農民脫貧致富、邊疆少數民族地區的農村經濟的發展、社會的穩定提供重要經濟保障。
[0003]—個多世紀的松茸馴化研究表明，直接采用純培養菌種實現松茸人工栽培是一種難以實現的目標，為此，非常有必要進行人工馴化栽培技術開發。
【發明內容】
[0004]為解決上述問題，本發明提供了一種野生松茸馴化母種制備方法。
[0005]為實現上述目的，本發明采取的技術方案為:
[0006]野生松茸馴化母種制備方法，包括如下步驟:
[0007]S1、采集自然野外生長的松茸，取發育完全的子實體菌蓋部分，切掉菌柄，用75%的酒精棉球擦凈菌蓋表面，菌褶朝下用滅過菌的鐵鉤勾住懸掛于滅菌的三角瓶中，用無菌棉塞封口過夜，收集孢子印，用無菌水制成孢子液；
[0008]S2、加入到液體培養基中進行搖菌，進行液體多孢自交，搖菌條件為:轉速140r/min，培養溫度為25°C，得松茸混合菌絲液；
[0009]S3、將所得的松茸混合菌絲液在潔凈室接種于栽培瓶的培養料上，用透氣蓋封口，并置于14?15°C的培養室內暗培養25?30d，在2?6d時，進行超聲波水浴培養，超聲波的頻率和功率分別設定為68kHz和600W，超聲波處理時間為lOmin?90min，超聲間歇比為20s/5s ?30s/5s；
[0010]S4、待菌絲長滿栽培瓶后，感染處理松茸的優勢伴生樹種，澆水900ml?1000ml，
蓋好覆蓋物，人工馴化，即可得到穩定性強，可用于繁殖生產的松茸母種。
[0011 ] 其中，所述步驟S2中的液體培養基每升含:
[0012]葡萄糖20?24g、酵母膏0.3?0.5g、蛋白胨0.5?0.7g、葛仙米凍干粉3?5g、氨基酸螯合鎂0.05?0.07g、磷酸二氫鉀0.1?0.2g、水溶性淀粉40?60g，其余為無菌水。
[0013]其中，所述步驟S3中的培養料通過以下步驟制備:
[0014](1)稱取松樹木肩36?48份、魔芋粉8?10g、大蒜素0.5?0.6份、風化煤8?10份置于汽爆罐內，先通入氮氣至汽爆罐內壓力為0.7?1.3MPa，爆破處理8?25min ;然后迅速通入蒸汽至汽爆罐內壓力為1.3?1.7MPa，蒸汽爆破處理0.5?2.5min，得混合物；
[0015](2)將所得的混合物自然降溫至常溫后，加入氮化硅超微粉3?7份、甲殼素纖維4?6份、海藻酸纖維3?5份混合攪拌均勾，并通過加入水調整水分含量為總重量的64?68%，得培養基料備用。
[0016]其中，所述葛仙米凍干粉通過以下步驟制備:
[0017]取50?55份葛仙米，清洗，用研磨機磨成粗粉，然后用90?95°C熱水浸泡50?85min，撈出瀝干后，加入10?12份常溫純凈水，和勻，然后按照接種量1?1.5%的比例接種微生物發酵劑，保持溫度38°C，發酵52?58小時，發酵結束后低溫烘干，研磨成細粉。
[0018]其中，所述微生物發酵劑的成分為:按照菌株數量比乳酸桿菌:地衣芽孢桿菌:谷氨酸棒桿菌為:1: 1.2: 2的比例配制成1.5X107菌株/ml的發酵劑。
[0019]本發明具有以下有益效果:
[0020]通過培養基和培養方法的合理改進，實現了松茸母種的人工馴化，改變了松茸生產完全依靠自然的現狀，而且還實現了松茸產品的穩產、高產和優質。同時，本發明還有效地保護了松茸種質資源及其所依賴的生態環境，為實現了松茸生產的可持續發展提供了一條有效的途徑。
【具體實施方式】
[0021]為了使本發明的目的及優點更加清楚明白，以下結合實施例對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0022]以下實施中，所述步驟S2中的液體培養基每升含:
[0023]葡萄糖20?24g、酵母膏0.3?0.5g、蛋白胨0.5?0.7g、葛仙米凍干粉3?5g、氨基酸螯合鎂0.05?0.07g、磷酸二氫鉀0.1?0.2g、水溶性淀粉40?60g，其余為無菌水。
[0024]所述步驟S3中的培養料通過以下步驟制備:
[0025](1)稱取松樹木肩36?48份、魔芋粉8?10g、大蒜素0.5?0.6份、風化煤8?10份置于汽爆罐內，先通入氮氣至汽爆罐內壓力為0.7?1.3MPa，爆破處理8?25min ;然后迅速通入蒸汽至汽爆罐內壓力為1.3?1.7MPa，蒸汽爆破處理0.5?2.5min，得混合物；
[0026](2)將所得的混合物自然降溫至常溫后，加入氮化硅超微粉3?7份、甲殼素纖維4?6份、海藻酸纖維3?5份混合攪拌均勾，并通過加入水調整水分含量為總重量的64?68%，得培養基料備用。
[0027]所述葛仙米凍干粉通過以下步驟制備:
[0028]取50?55份葛仙米，清洗，用研磨機磨成粗粉，然后用90?95°C熱水浸泡50?85min，撈出瀝干后，加入10?12份常溫純凈水，和勻，然后按照接種量1?1.5%的比例接種微生物發酵劑，保持溫度38°C，發酵52?58小時，發酵結束后低溫烘干，研磨成細粉。
[0029]其中，所述微生物發酵劑的成分為:按照菌株數量比乳酸桿菌:地衣芽孢桿菌:谷氨酸棒桿菌為:1: 1.2: 2的比例配制成1.5X107菌株/ml的發酵劑。
[0030]實施例1
[0031]S1、采集自然野外生長的松茸，取發育完全的子實體菌蓋部分，切掉菌柄，用75%的酒精棉球擦凈菌蓋表面，菌褶朝下用滅過菌的鐵鉤勾住懸掛于滅菌的三角瓶中，用無菌棉塞封口過夜，收集孢子印，用無菌水制成孢子液；
[0032]S2、加入到液體培養基中進行搖菌，進行液體多孢自交，搖菌條件為:轉速140r/min，培養溫度為2