一種新的異香豆素類化合物及其制備方法和醫藥用圖
【技術領域】
[0001] 本發明屬于藥物技術領域，具體設及從馬齒寬的干燥地上部分中分離得到的一種 異香豆素類化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 馬齒寬（PortulacaoleraceaL.)又名媽昨菜、長命菜、馬舌菜等，為馬齒寬科植 物全草，多W其干燥地上部分入藥，生于山區潮濕肥沃的地方，盛產于四川，遍布全國。性味 酸寒，具有清熱解毒、涼血止血之功效。主治熱頻脈血、熱淋、帶下、痛腫惡毒、丹毒。藥理研 究表明，馬齒寬具有降血脂、降血糖、抗動脈粥樣硬化等功效。馬齒寬可入藥，又可食用，是 我國衛生部劃定的78種藥食同源的野生植物之一，曾被列入2008北京奧運會菜譜。
[0003] 國內外研究人員對馬齒寬的化學成分做了大量研究，結果表明，馬齒寬中 富含有機酸、黃酬、祗類、醬體類、香豆素類、花色巧類W及揮發油等多種類型的化 學成分。目前，分離得到并且結構經過鑒定的香豆素類主要有6, 7-二徑基香豆素 (6, 7-dihy化oxycoumarin)、東賞窘亭（scopoletin)、佛手相內醋化ergapten)、異茵香內 酯（isopimpinellin)、lonchocarpicacid、lonchocarpenin和大葉按亭（robustin)。
[0004]現代藥理研究表明，馬齒寬藥理作用廣泛，包括：抗菌、抗病毒作用；興奮平滑肌 的作用；肌肉松弛作用；劑量依賴性地增加屯、肌收縮力度、速度，且可被屯、得安完全阻斷； 降血脂、抗動脈粥樣硬化作用；降血糖作用；抗腫瘤作用；抗衰老作用；增強免疫作用；抗過 敏反應等。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供一種從馬齒寬的干燥地上部分中分離得到的一種異香豆素 類化合物，含其的藥物組合物及其制備方法和應用。
[0006]本發明的上述目的是通過下面的技術方案得W實現的：
[0007] 具有下述結構式的化合物（I):
[0008]
[0009]所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：(a)將馬齒寬的干燥地上部 分粉碎，用80~90 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化） 步驟（a)中正下醇取物用大孔樹脂除雜，先用5%乙醇洗脫6個柱體積，再用75%乙醇洗脫 8個柱體積，收集75 %洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟化）中75 %乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1、30:1、15:1和8:1的二氯甲燒-甲醇梯 度洗脫得到4個組分；（d)步驟（C)中組分4用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為15:1、 8:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟（d)中組分2用十八烷基娃 燒鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0010] 進一步地，步驟（a)中，用85%乙醇熱回流提取，合并提取液。
[0011] 進一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0012] 藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學上可接受的載體。
[0013] 所述的化合物（I)在制備神經保護的藥物中的應用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備神經保護的藥物中的應用。
[0015] 本發明化合物用作藥物時，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發明化合物（I)，其余為藥物學上可接受的、 對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發明藥物可 通過口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無菌粉針、脂質體或乳劑等。
【附圖說明】
[001引圖1為化合物（I)結構式；
[0019] 圖2為化合物（I)計算ECD和實驗ECD圖；
[0020] 圖3為MTT代謝率檢測Aβ25 35對PC12細胞的毒性作用；
[0021] 圖4為Aβ25 35對PC12細胞LDH釋放率的影響；
[002引圖5為Aβ化35和/或化合物（I)對PC12細胞LDH釋放率的影口向。
【具體實施方式】
[0023] 下面結合實施例進一步說明本發明的實質性內容，但并不W此限定本發明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可W對 本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發明技術方案的實質和范圍。
[0024] 主要材料、試劑來源及儀器類型：
[00巧]乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購自上海凌峰化學試劑有限 公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[002引實施例1 :化合物（I)分離制備及結構確證
[0027](a)將馬齒寬的干燥地上部分（8kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提取（3化X3次）， 合并提取液，濃縮至無醇味化L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋化LX3次）和水飽 和的正下醇化LX3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（375g)和正下醇 萃取物；化）步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用AB-8大孔樹脂除雜，先用5%乙醇洗脫6個柱 體積，再用75 %乙醇洗脫8個柱體積，收集75 %洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫濃縮物 (129g) ;(c)步驟化）中75%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1(8個 柱體積）、30:1 (8個柱體積）、15:1 (8個柱體積）和8:1 (10個柱體積）的二氯甲燒-甲醇 梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟（C)中組分4(27g)用正相硅膠進一步分離，依次用體積 比為12:1 (8個柱體積）、8:1 (10個柱體積）和5:1 (8個柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗 脫得到3個組分；（e)步驟（d)中組分2 (15g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體 積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~12個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮 得到純的化合物（I) (40mg)。
[0028] 結構確證：HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z425. 1608,結合核磁特征可得分子式 為C2化6〇7,不飽和度為10。核磁共振氨譜數據5H(Ppm，DMS0-d6,500MHz) :H-1(5.01， d，J= 4. 9)，H-2 (4. 54,d，J= 4. 9)，H-3 (4.68,br，s)，H-5 (2.88,s)，H-7 (5. 78,s)， H-9(2. 91，m)，32,m)，57,m)，H-14(2. 63,d，J= 16. 0)，H-14(2. 21，d，J =16. 0)，H-15 巧.78,dd，J= 17. 8,11.2)，H-16 巧.10,d，J= 11.2)，H-16(4. 94,d，J= 17. 8)，H-17(1.02,s)，H-19(1.39,s)，H-20(1.08,s)，l-0Ac(2. 21，s);核磁共振碳譜數 據δc(卵m，DMSO-de，125MHz) :71. 9 (CH，1-C)，74. 4 (CH，2-C)，64. 2 (CH，3-C)，46. 2 (C，4-C)， 58. 1 (CH，5-C)，193.6(C，6-C)，126. 2 (CH，7-C)，155. 3 (C，8-C)，40. 1 (CH，9-C)，34.8(C， 10-C)，37. 5 (邸2,11-C)，210. 1 (C，12-C)，55. 7 (C，13-C)，42. 2 (邸2,14-C)，141. 1 (CH，15-C)， 115. 8(細2,16-C)，17. 8(邸3,17-C)，174. 9(C，18-C)，12. 2(邸3,19-C)，17. 3(邸3,20-〇， 170. 1 (C，1-OAc)，20.8(邸3,1-OAc);碳原子標記參見圖1。該化合物在227nm處有紫外吸 收帶，說明含有α,β-不飽和酬幾基基團。電和"C-NMR譜顯示了Ξ個甲基[δ化.02(s， H-17)，1. 39 (S，H-19)和 1. 08 (S，H-20) ;δC17. 8(C-17)，12.2 (C-19)和 17. 3(C-20)]，一 個2, 18-內醋結構[δΗ4. 54(d，J=4. 9Hz，H-2);δ C74. 4(C-2)和174. 9(C-18)]，一個α，e-不飽和酬幾基[δ冊.78 (s，H-7) ; δ C193. 6 (C-6)，126. 2 (C-7)和155. 3 (C-8)]，一 個酬幾基[δ C210. 1(C-12)]，乙締基[δ冊.78(dd，J=17. 8，11. 2Hz，H-15)，4. 94(d，J= 17.細z，H-16)和5. 10(d，J = 11. 2Hz，H-16) ; δ C141. 1(C-15)和115. 8(C-16)]，一個乙酷 氧基[δ肥.21 (s，1-OAc);δ C170. 1 (1-OAc)和20. 8 (1-OAc)]。含氧碳信號δ C64. 2W及氨 質子信號δ H4. 68表明C-3位連有一個徑基。HMBC譜中，質子信號δ冊.01與相應醋幾基 碳δ C170. 1的相關性表明C-1(δ C71. 9)位連有一個乙酷氧基。通過核磁數據可知，C-13 同時連有乙締基和叔甲基；HMBC譜中C-13與&-16, &-14和Me-17, C-15與H-16b，&-14 和Me-17, W及C-16與Me-17的相關性驗證了上述推論。綜合氨譜、碳譜、HMBC譜和N犯SY 譜，W及文獻關于相關類型核磁數據，可基本確定該化合物如圖1所示，立體構型進一步通 過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致（圖2)。
[002引實施例2 :化合物（I)藥理作用試驗 [0030] 一、材料和儀器
[00引]Αβ2535購于美國sigma公司。化合物（I)自制，制備方法見實施例LHPLC歸一 化純度大于98%。MTT(四挫氮藍）購于美國Amresco公司。LDH測定試劑盒購于南京建成 生物有限公司。叮晚澄（A0)購于美國sigma公司。漠化乙晚巧B)購于美國sigma公司。 RNase酶購于美國sigma公司。蛋白酶K購于美國sigmaAnnexin公司。V-FITC細胞調亡 檢測試劑盒購于南京凱基生物科技發展有限公司。D-MEM/F12培養基干粉購于美國GibwL 公司。馬血清購于美國hycLon公司。胎牛血清購于杭州四季青生物工程有限公司。多聚 賴氨酸（PLL)購于美國sigma公司。
[0032