抗folr1免疫綴合物給藥方案的制作方法
【專利說明】抗F0LR1免疫綴合物給藥方案 發明領域
[0001 ] 本發明的領域整體涉及施用抗F0LR1免疫綴合物以治療疾病諸如癌癥的方法。該 方法提供使不希望的副作用降至最低的給藥方案。
[0002] 發明背景
[0003] 癌癥是發達國家中死亡的主要原因之一，僅在美國每年就有超過一百萬人診斷患 有癌癥并且有500, 000例死亡。總的來說，據估計超過1/3的人會在他們的一生中出現某 種形式的癌癥。癌癥有200多種不同的類型，其中四種（乳腺癌、肺癌、結直腸癌和前列腺 癌）占所有新發病例的一半以上（Jemal等，2003,CancerJ.Clin. 53:5-26) 〇
[0004] 葉酸受體1 (F0LR1)也被稱為葉酸受體-α或葉酸結合蛋白，是在細胞質膜上表達 的Ν-糖基化蛋白。F0LR1具有對葉酸和若干還原型葉酸衍生物的高親和力。F0LR1介導生 理葉酸即5-甲基四氫葉酸向細胞內部的遞送。
[0005] F0LR1在絕大多數的卵巢癌以及在許多子宮癌、子宮內膜癌、胰腺癌、腎癌、肺 癌和乳腺癌中過表達，而在正常組織上的F0LR1表達僅限于腎近端小管、肺的肺泡肺細 胞、膀胱、睪丸、脈絡叢以及甲狀腺中的上皮細胞頂膜上（WeitmanSD等，CancerRes 52:3396-3401(1992);AntonyAC,AnnuRevNutr16:501-521(1996);KalliKR等Gynecol Oncol108:619-626(2008))。F0LR1的這種表達模式使其成為F0LR1導向的癌癥療法的理 想靶標。
[0006] 因為卵巢癌在晚期之前通常是無癥狀的，所以它經常是在晚期被診斷出來，并且 用目前可用的方法（通常是減積手術（surgicalde-bulking)之后的化療藥物）治療時具 有不良預后（vonGruenigenV等，Cancer112:2221-2227(2008);AyhanA等，AmJObstet Gynecol196:81e81-86 (2007);HarryVN等，ObstetGynecolSurv64:548-560(2009))。 因此，對用于卵巢癌的更有效的治療劑存在明顯的尚未滿足的醫療需求。
[0007] 抗體作為治療此類癌癥的有前景的方法逐漸興起。此外，包含綴合到另一種化合 物（例如，細胞毒素）的抗體的免疫綴合物也作為潛在的治療劑正受到研究。尤其是，包 含美登木素（其為植物源性抗真菌和抗腫瘤劑）的免疫綴合物已證實具有一些有益的活 性。S.M.Kupchan等首先報道了由卵葉美登木（Maytenusovatus)和山檨美登木（Maytenus buchananii)的乙醇萃取物中分離出三種橋環（ansa)大環內酯，它們連同其在鼠模型中以 yg/kg劑量范圍抗白血病作用的論證一起是美國專利號3, 896, 111的主題。然而，美登木 素具有不可接受的毒性，從而引起中樞和外周神經病變以及副作用：尤其是惡心、嘔吐、腹 瀉、肝功能檢測指標升高以及少見的虛弱和嗜睡。該總體毒性通過將美登木素綴合到抗體 而一定程度地降低，因為抗體綴合物對抗原陰性細胞的毒性比對抗原陽性細胞的毒性低幾 個數量級。然而，包含美登木素的免疫綴合物仍與不可接受水平的不良副作用相關。例如， 注射高劑量的包含美登木素的抗F0LR1免疫綴合物的動物顯示出眼毒性。該毒性的原因 (例如，可能是與Cmax還是與AUC相關）尚不清楚。因此，仍需要確定在人中在治療上有效 的但避免不良反應的抗F0LR1免疫綴合物的特定給藥方案。
[0008] 發明概述
[0009] 本文提供以使不希望的副作用降至最低的治療有效的給藥方案施用抗F0LR1免 疫綴合物的方法。因此，本文所述的是用于治療患有癌癥的患者的方法，其包括向患者施用 有效劑量的結合到F0LR1的免疫綴合物，其中免疫綴合物以約3.Omg/kg至約6mg/kg的劑 量施用。抗F0LR1免疫綴合物可包含帶電的接頭。在一些實施方案中，抗F0LR1免疫綴合 物包含抗體huMovl9、接頭磺基-SPDB和美登木素DM4。
[0010] 在一些實施方案中，免疫綴合物包含抗體或其抗原結合片段，其競爭性抑制具有 SEQIDN0:3和SEQIDN0:5的序列的抗體與F0LR1的結合。在一些實施方案中，抗體或其 片段包含huMovl9 的CDR(即，SEQIDN0:6-10 和 12 或SEQIDN0:6-9、ll和 12)。在一些 實施方案中，抗體或片段不含鼠Movl9的六個CDR(即，SEQIDN0:6-9、16和12)。在一些 實施方案中，抗體為huMovl9。在一些實施方案中，免疫綴合物包含美登木素。在一些實施 方案中，美登木素為DM4。在一些實施方案中，免疫綴合物包含磺基-SPDB接頭。在一些實 施方案中，免疫綴合物為頂GN853 (huMovl9-磺基-SroB-DM4)。
[0011] 在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-SPDB-DM4)以 約3.Omg/kg的劑量施用。在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺 基-STOB-DM4)以約3. 3mg/kg的劑量施用。在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如， huMovl9-磺基-SH)B-DM4)以約4.Omg/kg的劑量施用。在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑 (例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4)以約5mg/kg的劑量施用。在一些實施方案中，抗F0LR1 結合劑（例如，huMovl9-磺基-SPDB-DM4)以約5. 5mg/kg的劑量施用。在一些實施方案中， 抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-SPDB-DM4)以約6mg/kg的劑量施用。
[0012] 根據本文所述的方法，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4)可以約 每4周施用一次。在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4) 約每3周施用一次。在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4) 約每2周施用一次。在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4) 約每1周施用一次。在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4) 約每周施用兩次。
[0013] 在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-STOB-DM4)通過靜脈 內輸注約每21天施用一次。
[0014] 根據本文所述的方法，施用可產生約10,000-18,000h·yg/mL、約 10, 000-17, 500h·μg/mL、約 10, 000-17, 000h·μg/mL或約 10, 000-16, 000h·μg/mL的 AUC(。inf)。在一些實施方案中，AUC(。inf)為約 12,OOOh·μg/mL至約 13, 500h·μg/mL。在 一些實施方案中，AUC(。inf)為約12, 708h·μg/mL。在一些實施方案中，AUC(。inf)為實施例 1中所得的并在圖1中所示的AUC(。inf)。
[0015] 根據本文所述的方法，施用可產生約7, 500-12, 500h·yg/mL、約 7, 500-12, 000h·μg/mL、約 7, 500-10, 000h·μg/mL或約 8, 000-10, 000h·μg/mL的 AUCW16S)。在一些實施方案中，AUCW16S)為約 8,OOOh·μg/mL至約 8, 500h·μg/mL。在一 些實施方案中，AUC(。16S)為約8, 254h·μg/mL。在一些實施方案中，AUC(。16S)為實施例1中 所得的并在圖1中所示的AUC(。168)。
[0016] 根據本文所述的方法，施用可產生約50-250μg/mL、約50-200μg/mL、約 50-175μg/mL、約 50-150μg/mL、約 50-125μg/mL、約 75-250μg/mL、約 75-200μg/mL、約 75-175μg/mL、約 75-150μg/mL或約 75-125μg/mL的Cmax。在一些實施方案中，Cmax為 約100μg/mL至約150μg/mL。在一些實施方案中，Cmax為約100μg/mL至約120μg/mL。 在一些實施方案中，Cmax為約108μg/mL。在一些實施方案中，Cmax是在實施例1中所得 的并在圖1中所示的Cmax。
[0017] 根據本文所述的方法，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4)的 清除率可低于l.OmL/h/kg。在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺 基-STOB-DM4)的清除率低于0.6mL/h/kg。在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如， huMovl9_磺基-SFOB-DM4)的清除率為約0. 2mL/h/kg至約0. 6mL/h/kg。在一些實施方 案中，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-SPDB-DM4)的清除率為約0· 3mL/h/kg至約 0. 4mL/h/kg。在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4)的清除 率為約0· 3mL/h/kg。在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4) 的清除率為約〇.4mL/h/kg。在一些實施方案中，清除率是在實施例1中所得的并在圖1中 所示的清除率。
[0018] 根據本文所述的方法，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-STOB-DM4)的半衰 期可為至少約4天。在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-STOB-DM4) 的半衰期為約3至約5天，或約4至約4. 5天。在一些實施方案中，半衰期為約4. 4天。在 一些實施方案中，半衰期是在實施例1中所得的并在圖1中所示的半衰期。
[0019] 根據本文所述的方法，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4)的穩態 表觀分布容積（Vss)可為約25至約100mL/kg、約25至約75mL/kg、約30至約75mL/kg或 約35至約70mL/kg。在一些實施方案中，Vss為約55mL/kg至約65mL/kg。在一些實施方 案中，Vss為約61mL/kg。在一些實施方案中，Vss是在實施例1中所得的并在圖1中所示 的Vss〇
[0020] 在一些實施方案中，抗F0LR1結合劑（例如，huMovl9-磺基-SH)B-DM4)經靜脈內 施用。
[0021] 本文所述的方法可用于治療癌癥。在一些實施方案中，癌癥選自卵巢癌、腦癌、乳 腺癌、子宮癌、子宮內膜癌、胰腺癌、腎癌（例如，腎細胞癌）和肺癌（例如，非小細胞肺癌或 細支氣管肺泡癌（BAC))。在一些實施方案中，癌癥為卵巢癌或肺癌。在一些實施方案中，癌 癥為上皮性卵巢癌。
[0022] 在一些實施方案中，癌癥表達F0LR1多肽或核酸。在一些實施方案中，癌癥具有升 高的F0LR1多肽表達水平，如通過免疫組織化學（IHC)所測量。例如，在一些實施方案中， 癌癥是以2異質或更高的水平（通過IHC確定）表達F0LR1多肽的癌癥。在一些實施方案 中，癌癥是以2均質或更高的水平（通過IHC確定）表達F0LR1多肽的癌癥。在一些實施 方案中，癌癥是以3異質或更高的水平（通過IHC確定）表達F0LR1多肽的癌癥。在一些 實施方案中，癌癥是以3均質或更高的水平（通過IHC確定）表達F0LR1多肽的癌癥。在 一些實施方案中，癌癥是以2異質或更高的水平（通過IHC確定）表達F0LR1多肽的肺癌。 在一些實施方案中，癌癥是以3異質或更高的水平（通過IHC確定）表達F0LR1多肽的肺 癌。在一些實施方案中，癌癥是以3異質或更高的水平表達F0LR1多肽的上皮性卵巢癌（例 如，鉑耐性的或復發性的或難治性的）。
[0023] 在一些實施方案中，方法還包括向患者施用類固醇。類固醇可作為預治療而施用， 即，在施用抗F0LR1結合劑之前。類固醇可以是地塞米松。
[0024] 本文所述的方法可導致腫瘤尺寸的減小。本文所述的方法可導致卵巢癌患者中 CA125水平的降低。在一個實例中，在治療前測量得自卵巢癌患者的樣品中的CA125水平， 然后在治療后測量一次或多次，并且CA125水平隨著時間的降低指示療效。本文所述的方 法可導致癌癥治療之間的時間延長。本文所述的方法可導致無進展生存期（PFS)延長。本 文所述的方法可導致無病生存期（DFS)延長。本文所述的方法可導致總生存期（0S)延長。 本文所述的方法可導致完全應答（CR)增加。本文所述的方法可導致部分應答（PR)增加。 本文所述的方法可導致穩定的疾病（SD)增加。本文所述的方法可導致進行性疾病（PD)減 少。本文所述的方法可導致進展時間（TTP)減少。
[0025] 本文所述的方法還可以導致不良反應減少。
[0026] 尤其是，本文所提供的給藥方案實現功效（例如，PR)與降低的毒性之間最佳的平 衡，如例如在實施例1和2以及圖1中所示。
[0027] 附圖簡述
[0028] 圖1提供如實施例1中所述因頂GN853 (0· 15mg/kg至7.Omg/kg)的施用而產生的 藥代動力學數據。
[0029] 發明詳述
[0030] 本發明提供F0LR1結合免疫綴合物的新給藥方案。
[0031] I.定義
[0032] 為了有利于理解本發明，下文定義了多個術語和短語。
[0033] 如本文所用的術語"人葉酸受體1"、"F0LR1"或"葉酸受體α(FR-α) "除非另外指 明否則是指任何天然的人F0LR1。因此，所有這些術語均可指如本文所指示的蛋白或核酸序 列。術語"F0LR1"涵蓋"全長"、未加工的F0LR1，以及由細胞內的加工所產生的任何形式的 F0LR1。該術語還涵蓋天然存在的F0LR1變體，例如剪接變體、等位基因變體以及同工型。本 文所述的F0LR1多肽可以從多種來源諸如從人組織類型或從另一種來源中分離，或通過重 組或合成方法制備。F0LR1序列的實例包括但不限于NCBI參考號P15328、NP_001092242. 1、 AAX29268.UAAX37119. 1、ΝΡ_057937· 1 和ΝΡ_057936· 1。
[0034] 術語"抗體"意指通過免疫球蛋白分子可變區內的至少一個抗原識別位點識別并 特異性結合到靶標的免疫球蛋白分子，所述靶標諸如為蛋白、多肽、肽、碳水化合物、多核苷 酸、脂質或前述物質的組合。如本文所用，術語"抗體"涵蓋完整的多克隆抗體、完整的單克 隆抗體、抗體片段（諸如Fab、Fab'、F(ab'）2和Fv片段）、單鏈Fv(SCFv)突變體、多特異性 抗體諸如由至少兩個完整的抗體生成的雙特異性抗體、嵌合抗體、人源化抗體、人抗體、包 含抗體的抗原決定部分的融合蛋白，以及包含抗原識別位點的任何其它修飾的免疫球蛋白 分子，只要該抗體表現出所需的生物活性即可。抗體可以是以下五大類免疫球蛋白中的任 何一類 ：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，或其亞類（同種型）（例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和IgA2)，分別基于它們的重鏈恒定結構域（分別稱為α、δ、ε、γ和μ)的種類。不同 類的免疫球蛋白具有不同的且熟知的亞基結構和三維構型。抗體可以是裸抗體或綴合到其 它分子，諸如毒素、放射性同位素等。
[0035] "阻斷性"抗體或"拮抗性"抗體是抑制或降低其結合的抗原諸如F0LR1的生物活 性的抗體。在一些實施方案中，阻斷性抗體或拮抗性抗體基本上或完全抑制抗原的生物活 性。生物活性可以降低 10%、20%、30%、50%、70%、80%、90%、95%或甚至100%。
[0036] 術語"抗F0LR1抗體"或"結合到F0LR1的抗體"是指這樣的抗體，其能夠以足夠 的親和力結合F0LR1以使得該抗體可用作靶向F0LR1的診斷劑和/或治療劑。抗F0LR1 抗體與不相關的非F0LR1蛋白的結合程度可小于抗體結合到F0LR1的約10%，如例如通過 放射性免疫測定法（RIA)所測定。在某些實施方案中，結合到F0LR1的抗體具有<ΙμΜ、 彡ΙΟΟηΜ、彡ΙΟηΜ、彡InM或彡0·InM的解離常數（Kd)。
[0037] 術語"抗體片段"是指完整抗體的一部分，并指完整抗體的抗原決定可變區。抗體 片段的實例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab'）2和Fv片段、線性抗體、單鏈抗體以及由抗體片 段形成的多特異性抗體。
[0038] "單克隆抗體"是指在單個抗原決定簇或表位的高度特異性識別和結合中涉及到 的均質性抗體群。這與多克隆抗體形成對比，多克隆抗體則通常包括針對不同抗原決定簇 的不同抗體。術語"單克隆抗體"涵蓋完整及全長單克隆抗體以及抗體片段（諸如Fab、 Fab'、F(ab'）2、Fv)、單鏈（scFv)突變體、包含抗體部分的融合蛋白以及任何其它包含抗原 識別位點的修飾的免疫球蛋白分子。此外，"單克隆抗體"是指通過任何多種方式制備的此 類抗體，包括但不限于通過雜交瘤、噬菌體篩選、重組表達和轉基因動物。
[0039] 術語"人源化抗體"是指作