麻）電泳結果，泳道13-14為苧麻（品種名分別為湘苧二號、湘苧三號）電泳 結果，泳道15-18為亞麻（品種名分別為西亞一號、吉亞二號、吉亞四號、吉亞六號）檢測結 果；
[0026] 圖4所述為采用SEQIDN0:5-6所示核苷酸序列擴增漢麻、苧麻和亞麻DNA后擴 增產物的瓊脂糖凝膠電泳圖，其中泳道19-21為漢麻（品種名分別為云麻一號、黑龍江工業 大麻、安徽大麻）電泳結果，泳道22-23為苧麻（品種名分別為湘苧二號、湘苧三號）電泳 結果，泳道24-27為亞麻（品種名分別為西亞一號、吉亞二號、吉亞四號、吉亞六號）檢測結 果。
【具體實施方式】
[0027] 本發明實施例公開了一種鑒別漢麻、苧麻、亞麻原麻纖維種類的PCR引物組以及 PCR鑒別方法。本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出 的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在 本發明。本發明的方法已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明 內容、精神和范圍內對本文所述的產品及方法進行改動或適當變更與組合，來實現和應用 本發明技術。
[0028] 為了進一步理解本發明，下面結合實施例對本發明提供的一種鑒別漢麻、苧麻、亞 麻原麻纖維種類的PCR引物組以及PCR鑒別方法進行詳細說明。
[0029] 實施例1:本發明所述引物組
[0030] 漢麻檢測上、下游引物：上游引物參見SEQIDNO: 1，具體 為 5Z-ATCGAAGAGCAGCAACAAGC-3' 下游引物參見SEQIDN0:2，具體為 5z-TGGAGATCTTGTCTTCCAGCTG-3z;
[0031] 苧麻檢測上、下游引物：上游引物參見SEQIDNO:3，具體 為 5Z-TCCAAGCATTTCCCGAACGA-3' 下游引物參見SEQIDN0:4，具體為 5z-GCCCGATCTTCCAGCTCTAC-3z;
[0032] 亞麻檢測上、下游引物：上游引物參見SEQIDNO:5，具體 為 5Z-TCATCAACAGCGCATCTGGT-3' 下游引物參見SEQIDN0:6，具體為 5z-AGCCTTACAGCCACACACTC-3 、
[0033] 實施例2 :本發明所述PCR鑒別方法
[0034] 采用市售商用DNA提取試劑盒提取待測的麻類植物纖維樣本的DNA;
[0035] 采用SEQIDN0:1-2所示核苷酸序列或SEQIDN0:3-4所示核苷酸序列或SEQID N0:5-6所示核苷酸序列對樣本DNA進行PCR擴增；
[0036] PCR擴增體系為：
[0037] 反應總體積為 25μ1，其中樣本DNA20ng，2XPremixTaq緩沖液 12·5μ1，5μΜ 上、下游引物各1μ1，余量為ddH20。
[0038] PCR擴增的程序為：
[0039] 95Γ預變性 5min;
[0040] 95Γ變性 30s、55Γ退火 30s、72Γ延伸 45s，循環 27 次；
[0041] 72°C延伸 10min，10°C保存。
[0042] PCR擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳（膠濃度2. 0 % )，若采用SEQIDN0:1-2所示 核苷酸序列擴增的產物為170bp片段的樣本即為漢麻纖維，若采用SEQIDN0:3-4所示核 苷酸序列擴增的產物為221bp片段的植物纖維為苧麻纖維，若采用SEQIDNO:5-6所示核 苷酸序列擴增的產物為270bp片段的植物纖維為亞麻纖維。
[0043] 實施例3 :鑒別試驗
[0044] 試驗樣本為漢麻、苧麻和亞麻，具體品種和采集地見表1。
[0045] 表1試驗樣本
[0046]
[0047] 采用SEQIDNO: 1-2所示核苷酸序列分別對上述樣本DNA進行PCR擴增并進行瓊 脂糖凝膠檢測，方法參照實施例2，DNAMarker條帶位置凝膠示意圖見圖1(下同），結果見 圖2 ;
[0048] 采用SEQIDN0:3-4所示核苷酸序列分別對上述樣本DNA進行PCR擴增并進行瓊 脂糖凝膠檢測，方法參照實施例2,結果見圖3 ;
[0049] 采用SEQIDN0:5-6所示核苷酸序列分別對上述樣本DNA進行PCR擴增并進行瓊 脂糖凝膠檢測，方法參照實施例2,結果見圖4 ;
[0050] 由圖1-圖3的電泳圖可知，在使用SEQIDN0:1-2所示核苷酸序列擴增漢麻、苧 麻和亞麻的DNA時，各自PCR產物電泳僅能檢測到漢麻特有的170bp條帶，而苧麻、亞麻沒 有任何條帶產生；使用SEQIDN0:3-4所示核苷酸序列擴增漢麻、苧麻和亞麻的DNA時，各 自PCR產物電泳僅能檢測到苧麻特有的221bp條帶，而漢麻麻、亞麻沒有任何條帶產生；使 用SEQIDN0:5-6所示核苷酸序列擴增漢麻、苧麻和亞麻的DNA時，各自PCR產物電泳僅能 檢測到亞麻特有的270bp條帶，而苧麻、漢麻沒有任何條帶產生。
[0051] 以上實施例的說明只是用于幫助理解本發明的方法及其核心思想。應當指出，對 于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以對本發明進行 若干改進和修飾，這些改進和修飾也落入本發明權利要求的保護范圍內。
【主權項】
1. 一種鑒別漢麻、苧麻、亞麻原麻纖維種類的PCR引物組，其特征在于，由SEQID N0:l-6所示核苷酸序列組成，其中SEQIDN0:l-2所示核苷酸序列為鑒別漢麻的上、下游引 物，SEQIDN0:3-4所示核苷酸序列為鑒別苧麻的上、下游引物，SEQIDN0:5-6所示核苷酸 序列為鑒別亞麻的上、下游引物。2. 權利要求1所述PCR引物組在鑒別漢麻、苧麻、亞麻原麻纖維種類中的應用。3. -種漢麻、苧麻、亞麻原麻纖維種類的PCR鑒別方法，其特征在于，包括： 步驟1、提取待測的麻類植物纖維樣本的DNA; 步驟2、采用SEQIDNO: 1-2所示核苷酸序列或SEQIDNO: 3-4所示核苷酸序列或SEQ IDNO: 5-6所示核苷酸序列對樣本DNA進行PCR擴增； 步驟3、PCR擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳，若采用SEQIDNO: 1-2所示核苷酸序列擴 增的產物為17〇bp片段的樣本即為漢麻纖維，若采用SEQIDNO:3-4所示核苷酸序列擴增 的產物為221bp片段的植物纖維為苧麻纖維，若采用SEQIDNO:5-6所示核苷酸序列擴增 的產物為270bp片段的植物纖維為亞麻纖維。4. 根據權利要求3所述鑒別方法，其特征在于，步驟2所述PCR擴增體系為： 反應總體積為25μ1，其中樣本DNA20ng，2XPremixTaq緩沖液12·5μ1，5μΜ上、下 游引物各?μL，余量為ddH20。5. 根據權利要求3所述鑒別方法，其特征在于，步驟2所述PCR擴增的程序為： 95°C預變性5min; 95°C變性30s、55°C退火30s、72°C延伸45s，循環27次； 72°C延伸 10min，10°C保存。6. 根據權利要求3所述鑒別方法，其特征在于，所述瓊脂糖凝膠電泳采用膠濃度為 2.0 %的瓊脂糖凝膠。
【專利摘要】本發明涉及生物信息技術領域，公開了一種鑒別漢麻、苧麻、亞麻原麻纖維種類的PCR引物組以及PCR鑒別方法。該引物組由SEQ？ID？NO:1-6所示核苷酸序列組成，其中SEQ？ID？NO:1-2所示核苷酸序列為鑒別漢麻的上、下游引物，SEQ？ID？NO:3-4所示核苷酸序列為鑒別苧麻的上、下游引物，SEQ？ID？NO:5-6所示核苷酸序列為鑒別亞麻的上、下游引物。本發明依靠生物技術提供了一套專屬性較強的引物，可用來專屬鑒別漢麻、苧麻和亞麻，而彼此間互不干擾鑒別，同時所述方法借助PCR技術，具有需要樣本量小、檢測方便、穩定，可操作性強、結果可靠等優點，可以廣泛應用于紡織用麻類原麻纖維檢測成分分析中。
【IPC分類】C12Q1/68, C12N15/11
【公開號】CN105274103
【申請號】CN201510814830
【發明人】保琦蓓, 傅科杰, 任清慶, 馮云, 尤建武, 楊力生
【申請人】中華人民共和國鄞州出入境檢驗檢疫局
【公開日】2016年1月27日
【申請日】2015年11月22日...