免疫刺激劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明設及屬于明串珠菌屬的新分離的乳桿菌，包含所述乳桿菌或其經處理的細 菌的免疫刺激劑，特別是腸道免疫刺激劑，等等。更具體地，本發明設及具有促進產生IgA 的能力的保藏號為NITEBP-1519的腸膜明串珠菌NTM048菌株或其經處理的細菌，等等。
【背景技術】
[0002]腸道免疫器官通常指腸道相關淋己組織（GALT)，并主要由派亞氏淋己結，腸系膜 淋己結和腸上皮細胞構成。侵入腸內的異物（抗原）諸如病原體等被滲入派亞氏淋己結的 M細胞中，并通過在派亞氏淋己結中存在的抗原呈遞細胞諸如樹突狀細胞等呈遞給T細胞。 同時，B細胞也可識別抗原，并通過細胞因子刺激發生從IgM+B細胞到IgA+B細胞的類別轉 換，最終變成分泌免疫球蛋白A(W下稱為"IgA")的漿細胞。
[0003] 腸特異性IgA產生細胞的數目是存在于全身的漿細胞的約70-80%，且由漿細胞 分泌的IgA可提供感染防御，如抑制病原體附著在粘膜上皮細胞上、通過IgA結合到其上來 中和病原體產生的毒素和酶等。因此，通過IgA產生來激活腸道免疫W維持免疫平衡是非 常重要的。
[0004] 近年來，患過敏性疾病的患者數量快速增長。運種患者往往顯示腸道粘膜免疫的 降低，并因此，腸粘膜免疫的增強（發展）被認為很可能導致其預防。
[0005] 作為具有促進IgA產生的能力且能夠增強腸道免疫的細菌，已報道植物乳桿 菌（Xactobacillusplantarum)AYA菌株（專利文件 1)、加氏乳桿菌（Xactobacillus gassert)菌株（專利文件2)等。
[0006] 乳桿菌從各種植物諸如生的蔬菜、騰菜等分離出來，并作為益生菌被添加到食品、 飲料等中。然而，由于具有促進IgA產生能力和能夠激活腸道免疫的乳桿菌的報道限于上 述文件等，希望提供具有高度促進IgA產生能力的新型乳桿菌。
[0007][文件列表]
[0008][專利文件]
[0009]專利文件 1 :JP-A-2008-201708
[0010]專利文件 2 :JP-A-2010-130954
【發明內容】
[0011] 本發明要解決的問題
[0012] 本發明的目的在于分離具有促進IgA產生能力的新型乳桿菌，并提供包含該菌株 或其經處理的細菌等的腸道免疫刺激劑。
[001引解決問題的方法
[0014] 鑒于上述問題，本發明人已進行了深入研究，并發現了從各種生蔬菜、騰菜分離出 的約200個乳桿菌菌株中具有優異地促進IgA產生能力的菌株（NTM048)，并鑒定了該菌株 是屬于明串珠菌屬的新型乳桿菌。而且，本發明人已發現通過施用該菌株增加了在脾中的 輔助T細胞的數量，并確認該菌株提供不僅腸道免疫還有全身免疫系統的刺激作用，運致 使本發明的完成。
[0015] 因此，本發明提供如下。
[0016] [1]一種保藏號為NITEBP-1519的腸膜明串珠菌菌株NTM048或其突變菌株或其 經處理的細菌。
[0017] [2]乳桿菌的制備物，其包括[1]的菌株或其經處理的細菌。
[0018] [3]根據[2]所述的制備物，其為免疫刺激劑。
[0019] [4]根據[2]所述的制備物，其為腸道免疫刺激劑。
[0020][引根據巧]-[4]任意一項所述的制備物，其進一步包括其它乳桿菌或其經處理 的細菌，和/或除乳桿菌或其經處理的細菌之外的微生物。
[0021] [6]根據[引所述的制備物，其中其它乳桿菌選自乳桿菌、鏈球菌、明串珠菌、片球 菌、乳球菌、腸球菌和雙歧桿菌中的至少一種。
[002引 [7]根據閒或[6]任意一項所述的制備物，其中除乳桿菌外的微生物選自酵母、 桿菌、下酸菌（下酸梭菌）和真菌的至少一種。
[0023][引根據巧]-[7]任意一項的制備物，其用于預防或改善設及所述腸道免疫的疾 病。
[0024] [9]根據[引所述的制備物，其中所述設及腸道免疫的疾病選自過敏性疾病、感 染、炎癥性腸病和自身免疫性疾病。
[002引 [10]根據巧]-[9]任意一項所述的制備物，其為食品或食品添加劑。
[002引[山根據巧]-[9]任意一項所述的制備物，其為藥品。
[0027] [12]根據巧]-[9]任意一項所述的制備物，其為飼料或飼料添加劑。
[0028] [13]-種刺激溫血動物免疫的方法，包括向哺乳動物施用有效量的腸膜明串珠菌 NTM048菌株、或其突變菌株或其經處理的細菌。
[0029] [14]用作免疫刺激劑的腸膜明串珠菌NTM048菌株或其突變菌株或其經處理的細 -tt： 園O
[0030] [1引腸膜明串珠菌NTM048菌株或其突變菌株或其經處理的細菌用于產生免疫刺 激劑的用途。
[0031] 本發明的效果
[0032] 在本發明中，從魏豆新分離的乳桿菌NTM048菌株已被明確具有促進IgA產生能力 和增加輔助T細胞作用。本發明可提供包含乳桿菌或其突變菌株和其經處理的細菌的乳桿 菌制備物和免疫（具體地腸道免疫）刺激劑。由于它們可被用于如食品和飲料、藥品、飼料 等各種領域中，本發明在工業上極其有用。
【附圖說明】
[0033] 圖1顯示本發明分離的乳桿菌NTM048菌株的促進IgA產生能力的結果。在附 圖中，豎直軸顯示了在培養上清液中的總IgA(ng/mL)，鹽水顯示陰性對照（單獨添加生理 鹽水），LI^顯示陽性對照（添加LP巧，并且數據顯示了 6個不同實驗的平均+標準誤差 (S巧。*沖< 0.01(對比鹽水）
[0034] 圖2顯示NTM048菌株的IgA產生誘導活性與其它明串珠菌菌株（JCM16943菌株 和JCM6124菌株）之間的對比結果。在附圖中，豎直軸顯示了在培養上清液中的總IgA(ng/mL)，鹽水顯示陰性對照（單獨添加生理鹽水），并且數據顯示了 6個不同實驗的平均+標 準誤差（S巧。沖< 0. 05, *沖< 0.Ol(對比鹽水）
[0035] 圖3顯示了在各種組合物（每個圖上數值顯示NTM048濃度）中包含NTM048菌株 的飼料口服施用于小鼠時的IgA產生誘導活性。在附圖中，豎直軸顯示了在糞便提取物中 的總IgA(ng/mL)，并且水平軸顯示了施用天數，并且數據顯示了測試段中每5只小鼠的實 驗平均+標準誤差（S巧。
[0036] 圖4顯示了體內NTM048菌株在腸粘膜中的IgA產生誘導活性和JCM6124菌株之 間的對比結果。在附圖中，豎直軸顯示了一天內糞便中的IgA量（yg/天），并且水平軸顯 示了施用天數，并且對照顯示陰性對照（施用僅包含分散介質的AIN-76化05% (w/w)))。 沖< 0. 05 (對比JCM6124)，*沖< 0.Ol(對比對照）
[0037] 圖5顯示了在體內NTM048菌株的全身免疫刺激作用和JCM6124菌株之間的對比 結果。上半部顯示了在對照組（左側）、NTM048施用組（中間）和JCM6124施用組（右側） 在小鼠脾臟T淋己細胞中的CD4,CD8的表達。在各個附圖中，左上側的方塊表示CD4陽性 細胞，右下側的方塊表示CD8陽性細胞，下半部顯示了CD4陽性-CD3陽性細胞在各組中的 比率（％)，并且數據顯示了平均+標準誤差（S巧。 具體實施方案
[003引 W下詳細描述本發明。本發明提供提供一種新分離的乳桿菌（NTM048菌株）或其 突變菌株或其經處理的菌株、和包含任意運些菌株的乳桿菌制備物或免疫刺激劑（特別是