一種橘綠木霉菌及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及微生物技術領域，尤其涉及一種對辣椒苗期粹倒病具有高枯抗作用的 木霉困。
【背景技術】
[0002] 辣椒粹倒病是一種主要危害幼苗的病害，其癥狀主要為：出苗前的危害可導致 爛種、死苗；幼苗出±后危害幼苗莖基部，產生水潰狀斑，病部逐漸溢縮呈細線狀。后期 幼苗倒伏，濕度大時，病部密生白色棉絮狀物。該病除危害辣椒茄科蔬菜外，瓜類、窩宦、 芹菜、白菜、甘藍、蘿K洋蔥等蔬菜幼苗均能受害。該病的病原為瓜果腐霉菌Pythium aphanidermatum巧ds. )Fitzp.，屬鞭毛菌亞口真菌，是蔬菜苗期粹倒病的病原菌，該病一直 W來在蔬菜育苗過程中經常發生，并對蔬菜的育苗造成較大危害。
[0003] 為防止該真菌病害，目前通常使用的是化學農藥殺菌劑，在中國專利 CN01107887. 1中披露了一種組分組成（W重量份數計）為；喔枯哇1-20%、惡霉靈1-20%、 銅鹽1-20%、助劑2-10%的復配農藥，同時防治細菌性病原和對由腐霉菌、鑲刀菌引起的 作物苗期病害，其中其對黃瓜細菌性葉枯病和番茄細菌性斑疹病的防治效果可達85-90% ; 中國專利CN103109831A中，配制了一種含有化哇離菌醋與咪哇菌麗的殺菌組合物，用W防 治小麥、棉花、葡萄、煙草、草坪、向日葵、攻瑰、馬鈴墓和番茄等各種蔬菜的各種霜霉病、晚 疫病、疫霉病、粹倒病、黑斑病、斑腐病等，該復配殺菌劑具有明顯的增效作用，延緩了要害 抗藥性的產生，并取得了較好的防治效果。雖然送些藥物在一定程度上擴大了藥物的使用 范圍，并增強了藥效，降低了藥劑使用量，但它們仍屬于化學農藥，長期使用對環境造成的 污染仍然不可忽視，且采用化學農藥殺菌劑時各種植物病原菌對化學農藥產生耐藥性、抗 藥性，增加了防治的難度，甚至造成防治失敗。此外，化學農藥因其不具有選擇性，對有益的 生物也會造成威脅。而且，很多化學農藥是不可降解或難于降解的，容易在動植物體內積累 而造成污染物的富集。
[0004] 生物農藥是指利用生物活體或其代謝產物對害蟲、病原、雜草、線蟲、鼠類等有害 生物進行防治的一類農藥制劑，或者是通過仿生合成具有特異作用的農藥制劑，主要包括 生物化學農藥（信息素、激素、植物調節劑、昆蟲生長調節劑）和微生物農藥（真菌、細菌、 昆蟲病毒、原生動物，或經遺傳改造的微生物）兩個部分。
[0005] 我國生物農藥按照成分和來源可分為微生物活體農藥、微生物代謝產物農藥、植 物源農藥、動物源農藥四個部分。按照防治對象可分為殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、殺瞞劑、殺 鼠劑、植物生長調節劑等。按照利用對象而言一般分為直接利用生物活體和利用源于生物 的生理活性物質兩大類，前者包括細菌、真菌、線蟲、病毒及枯抗微生物等，后者包括農用抗 生素、植物生長調節劑、性信息素、攝食抑制劑、保幼激素和源于植物的生理活性物質等。
[0006] 生物農藥與化學農藥相比，主要有W下幾個方面的有點；（1)選擇性強，只對病蟲 害有作用，一般對人、畜等比較安全；（2)對環境影響小，主要利用了微生物的代謝產物殺 蟲、防病，未添加生態系統W外的其它物質；(3)生產成本低廉，目前國內生產加工生物農 藥，主要利用可再生資源。
【發明內容】
[0007] 本發明的目的在于提供一種產抱量多、高效防治辣椒粹倒病的木霉菌株，W解決 目前防治辣椒粹倒病的化學農藥量多且農藥會對環境產生影響的問題。
[0008] 本發明提供的木霉菌株屬于橘綠木霉（Trichodermacitrinoviride)菌株，具有 防治辣椒粹倒病的特性。該菌株于2014年1月14日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員 會普通微生物中必（CGMCC)，保藏單位地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏號為 CGMCCNo. 8722O
[0009] 橘綠木霉菌株具有W下性質：
[0010] 本發明橘綠木霉菌株的分生抱子階段為半知菌n，絲抱綱，絲抱目，叢梗抱科，木 霉屬，其有性態是屬于子囊菌口子囊菌綱。
[0011] 菌株培養特性：
[0012] 本發明橘綠木霉菌株在PDA培養基上黑暗條件下25°C~35°C培養64小時，菌落 半徑為60~68mm;40°C培養64小時，菌落半徑為45mm。在PDA上，大多數菌株的菌落表面 產生分生抱子處沒有游離的氣生菌絲。分生抱子產生方式多變，2(TC~25C時幾乎不產生 分生抱子，而35C~4(TC時產生大量分生抱子。分生抱子呈黃綠色至深綠色，有時產生黃 色色素；2(TC時黃色素產量很少，而35C和4(TC時產量很大；分生抱子簇缺乏，產生的分生 抱子簇細小，直徑小于0. 5mm。
[0013] 本發明的橘綠木霉菌株的液體培養法為，在培養瓶中加入培養液并接種抱子懸浮 液，在35C環境下振蕩培養，4天后便可收獲大量的抱子。在抱子中添加等體積比的娃藻± 抽濾并干燥可長久保存。
[0014] 菌株微觀形態特性：
[0015] 參照圖1~圖3,本發明橘綠木霉菌株的分生抱子簇缺乏，即使產生分生抱子簇， 也很細小，直徑小于0. 5mm。分生抱子梗沒有可育的延伸結構，分生抱子梗主要產生于氣生 菌絲上，是一長的軸狀結構，至頂均可育。瓶梗單生于主軸上，在第一個側向短分支前面，距 離大約為45Um;瓶梗在側向分枝的頂端行呈縱潤狀排列；主軸的寬度為2. 0~3. 2Um，最 寬處的寬度為2. 5~3.Sum,基部寬度為1. 5~2.Sum,長度與寬度的比例為1. 5~3.1， 母細胞的寬度為2.0~3.2Um。瓶梗多數為間生。分生抱子綠色，長方形至楠圓形，大小 為3. 0~3. 5X2. 0~2.8ym，長度與寬度比例為1. 4~2. 0,光滑。有的菌株不產生厚垣 抱子，有的則產生大量的厚垣抱子，端生或間生，球形至亞球形，直徑為4. 5~9.2Um。沒有 共無性階段。
[0016] 系統發育學鑒定：
[0017] 通過PCR任olymerase化ainReaction,多聚酶鏈式反應）對本發明橘綠木霉菌株 進行系統發育學的鑒定，確定橘綠木霉菌株的進化關系。
[0018] 將引物口S4和口S5擴增到口S1-5. 8S-口S2區序列得到的序列段，通過NCBIGen Bank建立的DNA序列數據庫中數據進行比對，該序列段與橘綠木霉的相似度達到100%。 [001引ITS序列如下：
[002。提供采用引物Ef728和TenaR擴增Tena序列得到的序列段，通過NCBI Gen Bank建立的DNA序列數據庫中數據進行比對，Tefla序列與棘抱木霉的相似度達到100%。 [0022]Tefl a序列如下：
[0024]重寄生性
[00巧]木霉菌對病原菌主要通過枯抗作用、競爭作用、重寄生作用、誘導抗性和促生作用 來防治粹倒病的發生。重寄生性是木霉菌對病原菌的主要作用方式，通過在橘綠木霉菌株 自身產生的真菌細胞壁降解酶，如幾了質酶、葡聚糖酶等，溶解病原菌細胞壁并滲透進入其 細胞中形成大量的分枝和有性結構，使病原真菌生長受抑制而死亡。
[0026] 防治辣椒椒粹倒病的制劑
[0027] 本發明提供的用于防治辣椒粹倒病的制劑，所述制劑中包括上述的橘綠木霉菌。
[0028] 所述制劑的劑型可為泡騰粒劑、乳油、水分散粉劑、懸乳劑、微乳劑、可溶粉劑、可 濕性粉劑、油劑中的任意一種。
[0029] 優選地，所述制劑中還可W包括助劑。
[0030] 所述的助劑可W選自填料、潤濕劑