一種對映-貝殼杉烷型二萜化合物及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種對映-貝殼杉烷型二萜化合物及其制備方法和應用，屬于藥物化 學的技術領域。
【背景技術】
[0002] 狹葉鳳尾蕨Pteris henryi Chirst系鳳尾蕨科鳳尾蕨屬。植物為多年生草本，植 株高25-40cm。鳳尾蕨屬植物包括300種以上的植物，其中有超過66種分布在中國。但是 該屬植物只有很少的植物化學研究的相關報道。我們目前對于狹葉鳳尾蕨的研究表明，狹 葉鳳尾蕨是一種多年生草本，分布于云南、四川、貴州海拔2000m以下的石灰巖地區。全草 入藥。味苦、澀，性涼。歸肝、膀胱經。清熱解毒，斂瘡止血，利濕。主治燒燙傷，狂犬咬傷， 外傷出血，帶下量多，小便澀痛[潘爐臺，趙俊華，孫慶文.貴州藥用蕨類植物植物[M].貴 州貴陽：貴州科技出版社，2012, 07:113.]。
[0003] 鳳尾蕨屬植物中含有多種二萜類化合物，其中以對映-貝殼杉烷、對映-貝殼杉 烯為基本骨架，羥基取代一般在2,6, 7,9, 1 1，15等位，少部分在16, 17位，15位羥基氧化 生成15-氧-對映貝殼杉烷或15-氧-對映-貝殼杉烯，部分化合物的19位與6位結合 成對映貝殼杉燒內酯或對映貝殼杉稀內酯。在這些二砲化合物中，7 a，9-dihydroxy-15_o x〇-ent-kaur-16-en_19, 6 β -olide (6F)，是一個典型的對映-貝殼杉燒結構，這個化合物 被報道有顯著的抗腫瘤活性[鄧亦峰，梁念慈.半邊旗二萜類化合物的液-質聯用圖譜鑒 定[J]· 2005,28(4):278-280 ;X Zhang, J H Li, C W He, et al. Study on the diterpenoid constituents and anticancer action of Pteris semipinnata[J]. Chin Pharm J, 1999, 34(8):512-514 ；C ff He, N C Liang1L E Mo. Inhibitory effect of compound 6F isolated from Pteris semipinnata L.on biosynthesis of DNA, RNA and protein in HL-60cells[J]. Journal of Guangdong Medical College, 2002, 20(4) :247-250.]
[0004] 本發明所述的對映-貝殼杉烷型二萜化合物為首次從狹葉鳳尾蕨中分離提取得 到，在現有技術中未有報道，而實驗證明這個化合物具有明顯的抗病毒、抑制HIV病毒的活 性。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在于提供一種對映-貝殼杉烷型二萜化合物（狹葉鳳尾蕨甲素）及 其制備方法和應用，所述化合物具有明顯的抗病毒、抑制HIV病毒的活性。
[0006] 本發明的技術方案：
[0007] -種對映-貝殼杉烷型二萜化合物，所述化合物化學名為對 映-2 β，13 α，16 α -三羥基-貝殼杉燒，分子式為C2()H3(j03，化學結構式如下：
[0008]
[0009] 前述的對映-貝殼杉烷型二萜化合物的制備方法為：
[0010] (1)甲醇冷浸提取：取陰干的狹葉鳳尾蕨葉，經粉碎后用甲醇冷浸提取，減壓濃 縮，得稀甲醇提取液；
[0011] (2)濃縮稀甲醇提取液：將稀甲醇提取液減壓濃縮得甲醇浸膏；
[0012] (3)萃取：甲醇浸膏用蒸餾水溶解，再用乙酸乙酯萃取，保留乙酸乙酯萃取相，得 稀乙酸乙酯萃取液；
[0013] (4)濃縮稀乙酸乙酯萃取液：將稀乙酸乙酯萃取液減壓濃縮，得乙酸乙酯浸膏；
[0014] (5)柱層析分離：將乙酸乙酯浸膏與硅膠拌樣，轉入層析柱，硅膠粒度200~300 目，用石油醚-乙酸乙酯洗脫液洗脫，將洗脫液進行薄層檢測，濃縮合并類似洗脫流分，靜 置，過濾，得粗品。
[0015] (6)單體化合物的純化：粗品用甲醇反復重結晶，即得。
[0016] 上述對映-貝殼杉烷型二萜化合物的制備方法中，所述步驟（1)中，甲醇濃度為 85 %~95 %，提取次數為2-4次，每次2-4日。
[0017] 具體地說，所述步驟（1)中，甲醇濃度為95%，提取次數為3次，每次3日。
[0018] 上述對映-貝殼杉烷型二萜化合物的制備方法中，所述步驟（3)中，乙酸乙酯萃取 3~4次。
[0019] 所述步驟（5)中洗脫劑石油醚-乙酸乙酯的體積比為1 :0、9 :1、7 :1或5 :1。
[0020] 具體地說，所述步驟（5)中洗脫劑石油醚-乙酸乙酯的體積比為9 :1。
[0021] 所述對映-貝殼杉烷型二萜化合物在制備抗病毒藥物中的應用。
[0022] 所述對映-貝殼杉烷型二萜化合物在制備抗HIV藥物中的應用。
[0023] 本發明從貴州省安順市產的狹葉鳳尾蕨（Pteris henryi Chirst)中首次提取分 離得到一種對映-貝殼杉烷型二萜化合物，名稱為狹葉鳳尾蕨甲素，化學名為對映-2 β， 13 α，16 α -三羥基-貝殼杉烷。本發明產品經超導核磁共振波譜、高分辨質譜、傅立葉變換 紅外光譜等多種手段檢測，確定了狹葉鳳尾蕨甲素的分子式為C mH34O3，化學結構式：
[0025] 產品狹葉鳳尾蕨甲素為白色片狀晶體，易溶于乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇等有機 試劑，熔點為 246 ~248°C;光學活性，[a ]nD-5. 66° (c 2. 12，MeOH) ;UV(CH30H) λ_204ηπι; IR(KBr) v nax3386cm 1Hffl) 〇
[0026] 我們對這個化合物測試了一系列的生物活性，包括對抗癌、抗真菌和抗HIV。實驗 證明狹葉鳳尾蕨甲素在制備HIV藥物中的應用，在IC 5。值為9. 1 μ M時對HIV病毒的選擇系 數（SI)為 12. 2。
【附圖說明】
[0027] 圖1為紫外光譜圖，說明了狹葉鳳尾蕨甲素結構中羥基的存在；
[0028] 圖2為紅外光譜圖，說明了狹葉鳳尾蕨甲素結構中含氧官能團（-OH)，甲基的存 在；
[0029] 圖3為高分辨質譜圖，說明了狹葉鳳尾蕨甲素的分子量；
[0030] 圖4為核磁共振1H NMR譜圖，說明了狹葉鳳尾蕨甲素結構中氫（-CH-OH)的歸屬；
[0031] 圖5為核磁共振13C NMR譜圖，說明了狹葉鳳尾蕨甲素結構中碳（-C-OH等）的歸 屬；
[0032] 圖6為核磁共振DEPT譜圖，說明了狹葉鳳尾蕨甲素結構中甲基，亞甲基，次甲基， 季碳的個數；
[0033] 圖7為本發明所述化合物的關鍵1H-1HCOSYai-Hh HMBC (丨丨〇(:)和 ROESY (ΗΠΗ)相關譜圖.
[0034] 圖8為本發明所述化合物的晶體結構.
[0035] 圖9為本發明所述化合物對HIV/VSV-G的抑制作用.
【具體實施方式】
[0036] 下面結合實施例對本發明作進一步闡述。必須說明下述實施例是用于說明本發明 而不是對本發明的限制。根據本發明的實質對本發明進行的簡單改進都屬于本發明要求保 護的范圍。
[0037] 實施例1 :
[0038] 旋光Rudolph-型旋光儀（美國魯道夫公司）測定；核磁共振氫譜1HNMR,核磁共振 碳譜 13CNMR和2D NMR由JEOL 500MHZ超導核磁共振波譜儀測定（四甲基硅醚TMS為內標）； 高分辨質譜HR-S頂S由VG Autospec-3000質譜儀（在70eV)測定；紫外光譜UV由HP8453 紫外可見分光光度計（惠普公司）測定；紅外光譜IR由VECT0R22型傅立葉變換紅外光譜 儀（德國BRUKER儀器公司，KBr壓片）測定；恪點由XT-4雙目顯微熔點測定儀（北京泰克 儀器有限公司）測定；柱層析硅膠（200-300目）及薄層層析硅膠均為青島海洋化工產；其 它試劑均為分析純。
[0039] -、狹葉鳳尾蕨中對映-貝殼杉烷型二萜化合物狹葉鳳尾蕨甲素的提取分離方 法：
[0040] 本發明實驗藥材于2010年9月采自貴州省安順，由貴陽中醫學院趙俊華教授鑒定 為狹葉鳳尾蕨Pteris henryi Chirst，植物標本存放在貴陽中醫學院中藥研究所（標本憑 證：20101003)。
[0041] 狹葉鳳尾蕨甲素的制備步驟依次如下：
[0042] (1)甲醇冷浸提取：狹葉鳳尾蕨葉經自然風干后粉碎，取粉碎的狹葉鳳尾蕨葉 5Kg，用95 %的甲醇冷浸提取3次，得稀甲醇提取液；
[0043]