改進的傷口愈合組合物和治療的制作方法
【專利說明】改進的傷口愈合組合物和治療
[0001]序列表
[0002]本申請包含序列表，其已經以ASCII格式電子提交并由此以其全部內容通過引用結合于此。所述ASCII副本，創建于2014年6月17日，命名為E3697_00329_SL.txt并且大小1，925個字節。
技術領域
[0003]本發明涉及識別和治療按預期的速率不愈的難愈性慢性傷口的方法，以及劑量方案和含有適用于治療那些傷口的間隙連接調節劑的制造制品。
【背景技術】
[0004]以下包括可以用于理解本發明的信息。這并非承認本文所提供的任何信息是目前描述或要求保護的發明的現有技術，或是與其相關的，或者承認專門或隱含參考的任何公開或文件是現有技術。
[0005]在人和其他哺乳動物中，傷口損傷觸發細胞和生化事件的組織化復雜級聯，這在大多數情況下會使得傷口愈合。理想愈合的傷口是在細胞、組織、器官和生物體水平上恢復正常解剖結構、功能和外觀。傷口愈合，與是由外傷、微生物或是異物所致無關，會經由包括許多重疊階段的復雜過程而進展，包括發炎、上皮形成、血管生成和基質沉積。通常情況下，這些過程會導致成熟傷口和一定程度的瘢痕形成。雖然發炎和修復大多沿著規定的過程發生，但這個過程的敏感性取決于各種傷口愈合調節因子的平衡，包括例如調節性細胞因子和生長因子的復雜網絡。
[0006]間隙連接是促進直接細胞間通信的細胞膜結構。間隙連接通道由兩個連接子(半通道)組成，每一個由六個連接蛋白亞單位組成。每個六聚體連接子與在相對的膜中連接子對接(dock)而形成單間隙連接。據報道間隙連接通道發現于整個身體中。
[0007]連接蛋白為蛋白家族，通常根據其分子量命名或基于系統發生分類成α，β和γ亞類。已確定至少20種人類和19種小鼠的同種型。據報道不同組織和細胞類型具有特征的連接蛋白表達的模式。
[0008]反義技術已經報道用于調節涉及病毒、真菌和代謝性疾病的基因的表達。參見例如美國專利號5，166，195,5,004,810ο反義技術也已經開發用于調節連接蛋白和治療傷口。參見例如美國專利號 7,098，190、7，879，811、7，902、164、7，919，474、8，034，789、8，059，486,8, 063，023,8, 181，580和8，314，074。間隙連接和半通道的肽抑制劑也有報道。參見例如W02006/134494，公開的美國專利申請出版號20100279921。
[0009]盡管在傷口愈合過程所經歷的原理的理解上取得了進展，但在慢性傷口護理的合適治療選項上仍然存在顯著未滿足的需要。這些發明解決這個持續的需求。
【發明內容】
[0010]在本文中描述并要求保護的本發明具有許多屬性和實施方式，包括但不限于，在本
【發明內容】
部分中闡述或描述或引用的那些，其并不旨在是包容一切的。在本文中描述并要求保護的本發明并不限于或受限于本
【發明內容】
部分中確定的所述特性或實施方式，將其包括在內目的僅僅在于概述舉例說明而非進行限制。
[0011]本公開涉及識別和治療難愈性慢性傷口的方法，以及劑量方案和適用于治療那些傷口的制造制品。含有制造制品、并適用于本文中公開的方法的藥物組合物含有連接蛋白26、連接蛋白30和/或連接蛋白43，以及本文中公開的其他連接蛋白的有效劑量的抗連接蛋白多核苷酸(例如，連接蛋白反義寡脫氧核苷酸，如單鏈抗連接蛋白寡脫氧核苷酸)。
[0012]正如本文中所用，在本發明的一個實施方式中，并舉例而言，難愈性傷口是慢性傷口，或按預期的速率不愈的傷口，如延遲愈合的傷口和不完全愈合傷口，其在標準護理治療期內例如，在二至四周內使用加壓包扎或減壓設備，在尺寸方面不降低超過約30%(+30% )，并且在傷口尺寸方面其不增加超過15% (-15% )。這種標準護理治療期也可以稱之為〃磨合(run-1n)〃或〃預處理〃期。傷口尺寸的增加或減少可以統稱為“表面面積減少”(也稱為“SAR”)。在磨合期內SAR范圍例如-15%至+30%，可以稱為磨合期SAR范圍。一旦出現針對治療的慢性傷口，提供標準護理持續二至四周的一段時間。出現之后(upon presentat1n)和在磨合期結束時的傷口尺寸的估計和/或正式測量被用于通過評估它是否隨著指定的SAR磨合期范圍下降以確定傷口是否對于標準護理治療是難愈性的。在一些方面中例如磨合期內的標準護理是多層加壓包扎(compress1n bandaging)。在其他方面中，標準護理例如是減壓(off-loading)。在一些實施方式中，磨合期內的標準護理治療是單層加壓包扎，或壓縮繃帶包扎(stocking)。加壓包扎通常約每周一次更換或重新應用。在其他的實施方式中，磨合期內的標準護理治療是減少壓力，或減壓。足壓力、震動、和剪切可以隨著經適當和適的鞋、鞋墊、和襪子降低。使用輪椅或拐杖的總非重支承是另一種有效的緩解壓力方法。其他的減壓標準護理方式包括全接觸石膏，去除石膏和可去除石膏助行架。
[0013]在其他實施方式中，難愈性傷口是慢性傷口，或按預期的速率不愈的傷口，如延遲愈合的傷口和不完全愈合傷口，其在標準護理治療期內在二至四周內使用加壓包扎在尺寸方面不降低超過約30% (+30% )。
[0014]在還有的其他實施方式中，難愈性傷口是慢性傷口，或按預期的速率不愈的傷口，如延遲愈合的傷口和不完全愈合傷口，其在標準護理治療期內使用加壓包扎在尺寸方面不降低超過約35% (+35% )其在傷口尺寸方面不增加超過15% (-15% )。
[0015]在進一步實施方式中，難愈性傷口是慢性傷口，或按預期的速率不愈的傷口，如延遲愈合的傷口和不完全愈合傷口，其在標準護理治療期內使用二至四周加壓包扎在尺寸方面增加或降低不超過約-5% /+30%、-10% /+30%、-15% /+30%、-20% /+30%^25%/+30% 或-30% /+30%。
[0016]令人驚訝的是，據觀察，難愈性慢性傷口易感于給予這樣的藥物組合物:其含有適合于局部給予的藥用載體和例如約0.5mg/mL至約40mg/mL、或舉其他實例而言約I至30mg/mL的抗連接蛋白26、抗連接蛋白30或抗連接蛋白43的多核苷酸。
[0017]因此，在一個方面中，本公開涉及一種治療難愈性傷口的方法，方法包括:
[0018]確定用于治療的慢性傷口的初始出現后的尺寸以獲得第一尺寸測量結果或估算值；
[0019]向傷口給予標準護理，如例如加壓包扎和/或減壓；
[0020]在給予所述標準護理之后約二至四周確定傷口的尺寸以獲得第二尺寸測量結果;
[0021]確定傷口的第二尺寸指標處于第一尺寸測量結果的預定范圍(例如，-15%至+30% /-35%至+30% )之內，或通過更多預定量(例如，超過約+30% -35%的傷口 SAR)而不治愈，由此識別出難愈性傷口 ；和
[0022]向傷口處或傷口附近給予含有例如有效量的抗連接蛋白43多核苷酸的藥物組合物。合適劑量、劑量用量和劑量濃度和制劑的實例在本文中進行了描述。
[0023]可以通過本領域內已知的各種方法，包括例如通過測定或合理估算或近似傷口的任何物理尺寸，如表面面積、最長直徑的長度和/或最長直徑的較長垂直平分線的長度測定傷口的尺寸。對于具有相對小的表面面積的深傷口，如糖尿病性足潰瘍，體積也可以作為尺寸測量。其他已知的傷口測量方法包括測面法、傷口示蹤法、數字化技術和立體光學測定法(stereophotograrometry)，以及簡單的基于標尺的方法。三種市售傷口測量技術包括維斯特拉克(Visitrak)系統(Smith and Nephew Healthcare，Hull，U.K.)，數字攝影和圖像處理系統(Analyze，vers1n 6.0 ；AnalyzeDirect, Lenexa，KS)，和使用計算橢圓面積的標準公式(Jiab)的橢圓測量方法。
[0024]在另一方面中，本公開涉及檢測易感于通過含有例如約0.5mg/mL至約40mg/mL或約I至30mg/mL的例如抗連接蛋白43多核苷酸的藥物組合物的治療的難愈性慢性傷口的方法，方法包括
[0025]測定進行治療的傷口初始出現后的尺寸指標以獲得第一尺寸測量結果；
[0026]向傷口給予標準護理，如例如加壓包扎和/或減壓；
[0027]在給予初始標準護理治療之后約二至四周測定傷口面積以獲得第二尺寸測量結果;
[0028]確定傷口的第二尺寸指標處于本文內描述的第一尺寸測量結果的預定范圍之內，由此檢測易感于通過給予含有治療有效量的例如抗連接蛋白43多核苷酸的藥物組合物的治療的進展緩慢或難愈性的創傷。其他連接蛋白靶按照本文中也是設想的。
[0029]在另一方面中，本公開涉及適用于治療具有難愈性傷口的受試者的試劑盒、包裝和/或制造制品，包括包含藥物組合物的容器；和如本文中描述和要求保護的組合物的使用說明書，該藥物組合物包含以治療有效量或濃度例如1.0至3.0至約30.0至lOOmg/mL存在的抗連接蛋白43反義寡脫氧核苷酸，和藥用載體例如非離子聚環氧乙烷-聚環氧丙烷共聚物。這種藥物包括如本文中用于治療受試者的那些。
[0030]在另一方面中，本發明涉及一種在向傷口局部給予含有非離子聚環氧乙烷-聚環氧丙烷共聚物例如泊洛沙姆407 (以例如約15% -30%，如25% -27%的濃度)和例如以約3.0至約30mg/mL，或約1.0至約100mg/mL的濃度存在的單鏈抗連接蛋白43反義寡脫氧核苷酸的組合物之后、采用完全愈合的增加的可能性來檢測難愈性傷口的方法，例如，方法包括:
[0031]測定進行治療的傷口初始出現后的尺寸指標以獲得第一尺寸測量結果；
[0032]向傷口給予標準護理，如例如加壓包扎和/或減壓；
[0033]測定在開始標準護理治療之后約2-4周傷口的尺寸指標以獲得第二尺寸測量結果；和
[0034]檢測傷口面積處于的預定尺寸范圍之內，例如在磨合期之后其尺寸的約-15%至+30%，由此確定在向難愈性傷口局部給予含有所述抗連接蛋白43反義寡脫氧核苷酸的組合物之后完全愈合的增加的可能性。
[0035]在一些實施方式中，藥物組合物包含有效量的3-30mg/mL或Ι-lOOmg/mL或本文中公開的其他合適劑量的抗連接蛋白43多核苷酸。藥物組合物可以進一步包含一種或多種適合于局部給予的藥物載體。在一個實施方式中，藥物組合物可以包含約20% -30%的非離子聚環氧乙烷-聚環氧丙烷共聚物，和/或本文中公開的其他藥物載體。
[0036]在一個方面中，抗連接蛋白多核苷酸可以以約3.0至約30mg/mL，或約1.0至約100mg/mL的濃度存在于藥物組合物中。在一些方面中，抗連接蛋白多核苷酸可以以約3、約5、約10、或約30mg/ml、或最高達約100mg/mL的任何量的濃度存在。在其他方面中，抗連接蛋白多核苷酸可以例如以約100 μ M至約5000uM的濃度存在于藥物組合物中。在一些實施方式中，本發明的治療有效量的組合物含有藥用載體和以約0.5至約40mg/mL(mL ；mg/mL)或約3至約30mg/mL，或約100 μ M至約5000 μ M的濃度存在的抗連接蛋白的藥劑如單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸。
[0037]—種或多種劑量可以給予至具有難愈性傷口的受試者。在一些實施方式中，可以按照合適或所需的間隔反復給予一種或多種劑量的藥物組合物。在一些實施方式中，藥物組合物可以例如每日、或每周一至六次反復給予。例如，本文中所描述的含抗連接蛋白的藥劑的組合物和制劑能夠按照所需每周一次給予直至觀察到愈合進展或完全。本發明的組合物可以更加頻繁地施用，例如兩或三次/周。它們也可以每兩周、或每月施用。給予的頻率和劑量可以在治療過程中隨著傷口面積和體積的變化而變化。此外，在傷口愈合再次變得停滯不前或延遲的情況下能夠進行進一步的一次或多次施用。
[0038]根據本發明的另一方面，促進了傷口再上皮化和/或肉芽組織的形成。促進皮膚傷口再上皮化的方法包括以有效促進再上皮化的量向具有按照預期速率不愈合的傷口，包括例如延遲愈合或不完全愈合傷口或慢性傷口的受試者給予抗連接蛋白的藥劑例如抗連接蛋白多核苷酸。類似的方法可以用于調節上皮基礎細胞分裂和生長。
[0039]令人驚訝地觀察到，難愈性傷口易感于在其之上或附近給予例如含有0.5至40mg/mL或更高濃度的抗連接蛋白多核苷酸和適合于局部給予的藥用載體的藥物組合物。舉例而言，檢測難愈性傷口可以有利地用于識別服從于采用含有0.5至40mg/mL抗連接蛋白多核苷酸、例如3至30mg/mL的抗連接蛋白430DN的藥物組合物治療的患者。本文中提供了其他合適劑量和劑量濃度。
[0040]在本發明的方法的一些方面中，如上所述，通過確定傷口的長度、寬度、深度、評估、邊緣周長、體積、或表面面積，或它們的函數評估患者傷口的大小。可以使用任何合適方法，包括直接手動測量、激光掃描、成像裝置如相機、平板電腦或PDA、表面映射等。對于傷口尺寸目前優選的度量是傷口表面面積，優選作為傷口長度乘以寬度傷口的乘積，傷口示蹤法，或通過測面法獲得。
[0041]令人驚訝和出乎意料地已經發現，磨合期內的尺寸變化范圍為例如在磨合期內在傷口尺寸方面不超過約30%的增加至在傷口尺寸方面不超過15%的降低，和如前提及的其他范圍和/或閾值量。優選的磨合階段范圍為約7至約30天，優選約7天至約21天，更優選約7天至約14天。優選14天的磨合。
[0042]以下提供的本發明的這些和其他方面，不限于或不受限于本
【發明內容】
中的信息。
【附圖說明】
[0043]圖1A-圖1C顯示了在10周治療期之后在磨合期內使用-40%至+40%傷口尺寸變化的2B期臨床研究的結果。圖1A顯示了在每個研究組中患者的％完全傷口封閉的作圖:標準護理(SOC)，僅媒介物，和低劑量(Img)或高劑量(Img)的示例性抗連接蛋白43多核苷酸。圖1B顯示了每個研究小組中患者傷口表面面積降低的作圖。圖1C顯示了基于磨合期內-40%至+40%傷口尺寸變化選擇的患者并未在表面面積減少終點和完全傷口愈合次要終點的背景中表現出統計上的顯著響應。
[0044]圖2顯示了來自滿足-15%至+30%傷口尺寸變化標準的研究的每個小組中2B期研究的患者亞群體數據的重新分析的在第10周的％完全傷口封閉的作圖。
[0045]圖3顯示了基于來自針對在研究每個小組中滿足-15%至+30%傷口尺寸變化標準的患者亞群的2B期研究的數據的重新分析的表面面積減少的作圖。。
[0046]圖4表明滿足-15%至+30%傷口尺寸變化標準的患者亞群體在表面面積減少終點和完全傷口愈合次要終點的背景中表現出統計顯著性(P〈0.05)響應。
【具體實施方式】
[0047]按預期的速率不愈的傷口，包括愈合緩慢傷口、愈合延遲傷口、不完全愈合傷口、裂開性傷口以及慢性傷口，往往會造成感染，并可能導致截肢或死亡。通過間隙連接的細胞間通信在傷口愈合中起著關鍵作用。據發現，使用某些化合物，即抗連接蛋白的藥劑，包括本文中描述或所提及或另外現在已知或以后開發的那些，可以阻斷、抑制或改變細胞通信以促進按預期的速率不愈的傷口包括愈合緩慢傷口、愈合延遲傷口、不完全愈合傷口、裂開性傷口、以及慢性傷口的封閉和愈合。此外，如本文中的描述，令人驚奇和出乎意料的是，據發現，通過給予例如連接蛋白26(Cx26)、連接蛋白30(Cx30)或連接蛋白43 (Cx43)的一種或多種抗連接蛋白的藥劑，通過向其一個或多個慢性傷口在標準護理(預處理)磨合階段期間內維持于某尺寸范圍內的患者給予所需的抗連接蛋白的藥劑可以進一步促進難愈性慢性傷口的愈合。其他連接蛋白靶包括連接蛋白30.3(Cx30.3)、連接蛋白31(Cx31)、連接蛋白31.l(Cx31.1)、連接蛋白32(Cx32)、連接蛋白37 (Cx37)、連接蛋白40 (Cx40)和連接蛋白45(Cx45)，即，是抗連接蛋白26,30,30.3,31,31.1、32、37、40、43、或45的多核苷酸。優選的是，在約I至約30天、優選約5天至約20天、更加優選約7天至約14天的預處理階段的期間內，待治療的傷口在尺寸方面增加不超過約30%，例如，或作為另一實例在尺寸方面增加不超過約35%，或例如，在尺寸方面增加不超過約30%或在尺寸方面降低不超過約15%。
[0048]令人驚訝的是，據觀察，在尺寸方面不增加約30%或在尺寸方面不降低約15%的難愈性傷口易感于向傷口處或傷口附近給予含有約0.5mg/mL至約40mg/mL，或約I至30mg/mL的抗連接蛋白多核苷酸和適合于局部給予的藥用載體的藥物組合物。在其他實施方式中，難愈性傷口是慢性傷口，或按預期的速率不愈的傷口，如延遲愈合的傷口和不完全愈合傷口，其在標準護理治療期內使用例如在二至四周內加壓包扎或減壓設備在尺寸方面不降低超過約30% (+30%)。在還有的其他實施方式中，難愈性傷口是慢性傷口，或按預期的速率不愈的傷口，如延遲愈合的傷口和不完全愈合傷口，其在標準護理治療期內使用例如加壓包扎或減壓設備在尺寸方面不降低超過約35% (+35% )，其在傷口尺寸增加不超過15% (-15% ) ο在進一步實施方式中，難愈性傷口是慢性傷口，或按預期的速率不愈的傷口，如延遲愈合的傷口和不完全愈合傷口，其在標準護理治療期內使用例如在二至四周內加壓包扎或減壓設備在尺寸方面不增加或降低超過約-5% /+30%,-10% /+30%,-15%/+30%, -20% /+30%,25% /+30%或-30% /+30%。在其他實施方式中，磨合期內標準護理治療是降低壓力，或減壓。可以采用適當合適的鞋、鞋墊和襪子降低足壓、沖擊和剪切。使用輪椅或拐杖的總非重支承(Total non-weight bearing)是另一種有效的緩解壓力方法。其他的減壓標準護理方式包括全接觸石膏、去除石膏和可去除石膏助行架。
[0049]在一些實施方式中，治療有效量的本發明組合物含有藥用載體和以約0.5至約40.0mg/mL (mL ；mg/mL)或約3至約30mg/mL的濃度存在的抗連接蛋白的藥劑如單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸。優選的濃度范圍為約1.5至約30mg/mL(mg/mL)、約1.5至約1mg/mL、或約3、約5、約10、或約30mg/mL。在一些方面中給予的抗連接蛋白多核苷酸的總劑量可以為約100 μ g至約30mg。
[0050]尤其優選的連接蛋白反義多核苷酸(例如，單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸)的濃度范圍為約150 μ M至約10，000 μ Μ。從另一方面而言，根據本發明通過給予約150 μ g至約10，OOOyg的連接蛋白反義多核苷酸(例如，單鏈抗連接蛋白43寡脫氧核苷酸)/平方厘米的傷口表面面積可以有效治療難愈性慢性皮膚傷口。
[0051]