基于14個snp位點評估外周動脈疾病患病風險的試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物醫藥領域，設及一種基于14個SNP位點評估外周動脈疾病患病風 險的試劑盒。
【背景技術】
[0002] 外周動脈疾病（PAD)是指除冠狀動脈和煩內動脈W外所有的動脈血管粥樣硬化 性病變，常見的病變區域包括頸動脈、腎動脈和下肢動脈等。PAD影響病變動脈周圍組織的 供血，造成疼痛感，嚴重的甚至導致截肢。它不僅給患者帶來嚴重的身體行動負擔，也增加 了屯、血管疾病致殘及致死的風險。對肥胖、高血壓、吸煙等主要的PAD風險因素進行積極有 效的評估和控制，不僅可W減少遠期的不良屯、血管事件率，同時還可W提高生活質量。
[000引肥胖主要通過國際上常用的BMI進行評估。BMI是用體重公斤數化g)除W身高 米數的平方（m2)所得出的指數。流行病學研究發現BMI升高將導致PAD的患病風險升高。 但是，通過BMI評估PAD的患病風險時，容易受到混雜因素和反向因果關聯的影響，導致評 估結果不夠準確。
[0004]BMI不僅與飲食、運動等環境因素有關，還與遺傳因素有關。國外已有研究在歐美 和日韓人群中發現了一些W單核巧酸多態性（SN巧為主的遺傳位點與BMI相關。SNP是由 單個核巧酸的改變而引起的DNA序列改變，造成染色體基因組的多樣性。SNP分布廣、密度 高，已成為繼限制性片段長度多態性（RFL巧標志和微衛星（短串聯重復，STR)標記之后的 第S代遺傳標記，在腫瘤、糖尿病、屯、腦血管疾病的研究中具有重要作用。然而，運些BMI遺 傳位點是否也會增加PAD的患病風險，尤其是中國人群PAD的患病風險目前仍不明確，因而 尚未被納入我國PAD的風險評估體系中。 陽00引現有評估PAD的患病風險的方法有如下缺陷：其一，通過BMI評估PAD的患病風險 時，沒有綜合考慮BMI遺傳位點對PAD患病風險的影響，評估結果不夠全面。其二、國外報 道的BMI遺傳位點主要來自歐美和日韓人群，運些遺傳位點對于中國人群的適用性仍有待 驗證。其S、通過BMI評估PAD的患病風險時，容易受到混雜因素和反向因果關聯的影響， 評估結果不夠準確。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種用于檢測如下14個SNP位點的物質的新用途，化及提供 一種用于評價或輔助評價（特別是早期的評價或輔助評價）待測人患外周動脈疾病的風險 性的產品：rsl7817449位點、rs6567160位點、rsl0938397位點、rs6265位點、r巧74367位 點、rs4715210位點、rs4776970位點、rsll671664位點、rs6545814位點、rs9356744位點、 rs261967位點、rsl2597579位點、rs652722位點和rsl 1142387位點。
[0007] 本發明所提供的新用途具體為：用于檢測所述14個SNP位點的物質在制備評價或 輔助評價（特別是早期的評價或輔助評價）待測人患外周動脈疾病的風險性的產品中的應 用。 陽00引所述rsl7817449位點為：W人基因組DM為模板，采用引物對1進行PCR擴增得 到的擴增產物的自5'末端起第42位核巧酸；所述rsl7817449位點的核巧酸為G或T;
[0009] 進一步，W人基因組DNA為模板，采用所述引物對1進行PCR擴增得到的擴增產物 的序列為序列表中序列43。序列43的第42位核巧酸即為所述rsl7817449位點，為G或 T。
[0010] 所述rs6567160位點為：W人基因組DNA為模板，采用引物對2進行PCR擴增得到 的擴增產物的自5'末端起第50位核巧酸；所述rs6567160位點的核巧酸為C或T; 1] 進一步，W人基因組DNA為模板，采用所述引物對2進行PCR擴增得到的擴增產物 的序列為序列表中序列44。序列44的第50位核巧酸即為所述rs6567160位點，為C或T。 陽01引所述rsl0938397位點為：W人基因組DNA為模板，采用引物對3進行PCR擴增得 到的擴增產物的自5'末端起第61位核巧酸；所述rsl0938397位點的核巧酸為A或G; [001引進一步，W人基因組DNA為模板，采用所述引物對3進行PCR擴增得到的擴增產物 的序列為序列表中序列45。序列45的第61位核巧酸即為所述rsl0938397位點，為A或 G。
[0014] 所述rs6265位點為：W人基因組DNA為模板，采用引物對4進行PCR擴增得到的 擴增產物的自5'末端起第43位核巧酸；所述rs6265位點的核巧酸為A或G;
[001引進一步，W人基因組DNA為模板，采用所述引物對4進行PCR擴增得到的擴增產物 的序列為序列表中序列46。序列46的第43位核巧酸即為所述rs6265位點，為A或G。
[0016] 所述rs574367位點為：W人基因組DNA為模板，采用引物對5進行PCR擴增得到 的擴增產物的自5'末端起第67位核巧酸；所述rs574367位點的核巧酸為G或T;
[0017] 進一步，W人基因組DNA為模板，采用所述引物對5進行PCR擴增得到的擴增產物 的序列為序列表中序列47。序列47的第67位核巧酸即為所述rs574367位點，為G或T。
[0018] 所述rs4715210位點為：W人基因組DNA為模板，采用引物對6進行PCR擴增得到 的擴增產物的自5'末端起第78位核巧酸；所述rs4715210位點的核巧酸為C或T;
[0019] 進一步，W人基因組DNA為模板，采用所述引物對6進行PCR擴增得到的擴增產物 的序列為序列表中序列48。序列48的第78位核巧酸即為所述rs4715210位點，為C或T。
[0020] 所述rs4776970位點為：W人基因組DNA為模板，采用引物對7進行PCR擴增得到 的擴增產物的自5'末端起第65位核巧酸；所述rs4776970位點的核巧酸為A或T;
[OOW 進一步，W人基因組DM為模板，采用所述引物對7進行PCR擴增得到的擴增產物 的序列為序列表中序列49。序列49的第65位核巧酸即為所述rs4776970位點，為A或T。 陽02引所述rsll671664位點為：W人基因組DNA為模板，采用引物對8進行PCR擴增得 到的擴增產物的自5'末端起第44位核巧酸；所述rsll671664位點的核巧酸為A或G; [002引進一步，W人基因組DNA為模板，采用所述引物對8進行PCR擴增得到的擴增產物 的序列為序列表中序列50。序列50的第44位核巧酸即為所述rsll671664位點，為A或 Go
[0024] 所述rs6545814位點為：W人基因組DM為模板，采用引物對9進行PCR擴增得到 的擴增產物的自5'末端起第73位核巧酸；所述rs6545814位點的核巧酸為A或G;
[00巧]進一步，W人基因組DNA為模板，采用所述引物對9進行PCR擴增得到的擴增產物 的序列為序列表中序列51。序列51的第73位核巧酸即為所述rs6545814位點，為A或G。
[00%] 所述rs9356744位點為：w人基因組DM為模板，采用引物對10進行PCR擴增得 到的擴增產物的自5'末端起第37位核巧酸；所述rs9356744位點的核巧酸為C或T;
[0027] 進一步，W人基因組DNA為模板，采用所述引物對10進行PCR擴增得到的擴增產 物的序列為序列表中序列52。序列52的第37位核巧酸即為所述rs9356744位點，為C或 T。
[0028] 所述rs261967位點為：W人基因組DNA為模板，采用引物對11進行PCR擴增得到 的擴增產物的自5'末端起第51位核巧酸；所述rs261967位點的核巧酸為G或T;
[0029] 進一步，W人基因組DNA為模板，采用所述引物對11進行PCR擴增得到的擴增產 物的序列為序列表中序列53。序列53的第51位核巧酸即為所述rs261967位點，為G或 T。
[0030] 所述rsl2597579位點為：W人基因組DNA為模板，采用引物對12進行PCR擴增得 到的擴增產物的自5'末端起第66位核巧酸；所述rsl2597579位點的核巧酸為C或T; [003U 進一步，W人基因組DM為模板，采用所述引物對12進行PCR擴增得到的擴增產 物的序列為序列表中序列54。序列54的第66位核巧酸即為所述rs12597579位點，為C