G1/g0期阻滯的五環吲哚喹嗪、其合成、抗腫瘤活性和應用
【專利說明】G1/GO期阻滯的五環間噪喧睫、其合成、抗腫瘤活性和應用 發明領域
[000。 本發明涉及G1/G0期阻滯的五環巧隙哇嗦，即化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基 醜基）-氧化甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化巧隙巧，3-a]哇嗦，涉及它們的合成，涉及它們 的抗細胞增殖活性，進一步涉及它們在小鼠移植性腫瘤模型上的抗腫瘤活性。因而本發明 涉及化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基醜基）氧化甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化剛巧 [2, 3-a]哇嗦作為G1/G0期阻滯劑的臨床應用前景。本發明屬于生物醫藥領域。
【背景技術】
[0002] 細胞通過增殖產生新細胞代替因為衰老，死亡和創傷所損失的細胞，為機體生長 發育和延續種族提供基礎。細胞增殖的過程稱為細胞周期。或細胞周期是指細胞從一次分 裂結束開始生長，到下一次分裂結束所經歷的過程。細胞增殖周期分為間期和分裂期兩個 時期。
[0003] 細胞分裂W后進入間期，完成結構和生物合成的復雜變化。間期又分為DNA合成 前期（G1期），DNA合成期（S期）和DNA合成后期（G2期）H個分期。G1期細胞可分為永 遠停留在G1期直至死亡、暫時不增殖和繼續增殖H種類型。暫時不增殖的細胞又稱Go期 細胞。S初期細胞內迅速形成DNA聚合酶及四種脫氧核巧酸。S期末細胞核DNA復制為細 胞分裂作準備。S期大約持續7~8小時。G2期細胞合成RNA和蛋白質例如組蛋白、微管 蛋白和膜蛋白等，為紡健體和新細胞膜等備足原料，W便進入有絲分裂期。G2期大約持續 1~1.5小時。有絲分裂又稱M期。M期是前期、中期、后期和末期構成的連續過程，完成由 一個母細胞分裂成為兩個子細胞的任務。一般需1~2小時。
[0004]腫瘤細胞屬于持續增殖的G1期細胞，細胞周期是抗腫瘤藥物的重要祀點。作用 于腫瘤細胞細胞的化療藥物又稱細胞周期特異性藥物。雖然有些臨床應用的化療藥物，例 如5-氣脈嚼巧，巧喃氣尿嚼巧，阿霉素，自力霉素和阿糖胞巧，影響細胞周期，但缺乏特異 性。由是，腫瘤細胞周期抑制劑成為抗腫瘤藥物研究的重要領域。尤其是發明能夠讓腫瘤 細胞永遠停留在G1期的化療藥物，即G1/G0期阻滯劑，是抗腫瘤藥物設計的重要方向。不 過，至今沒有G1/G0期阻滯劑的成功案例。按照送些理解，發明人提出了五環剛巧哇嗦，即 (6S)-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基醜基）-氧化甲基-4,6,7，12-四氨-4-氧化剛巧巧， 3-a]哇嗦，作為G1/G0期阻滯的發明。
【發明內容】
[0005]本發明的下式代表的化合物7a-i，
[0006]
[0007] 7a中AA為k丙氨醜基，7b中AA為k鄉氨醜基，7c中AA為k苯丙氨醜基，7d 中AA為甘氨醜基，7e中AA為k脯氨醜基，7f中AA為k異亮氨醜基，7g中AA為k亮氨 醜基，化中AA為k蛋氨醜基，7i中AA為k色氨醜基。
[0008] 本發明的第二個內容是按照圖1的路線制備化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基 醜基）氧化甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化巧隙[2, 3-a]哇嗦仍-i)，包括：
[000引 1)制備1-化2-二甲氧己基）-3-居甲基-1，2,3,4-四氨巧晰（3);
[0010]
[0011] 。制備化巧-3-己醜基-6-居甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化巧隙[2, 3-a]哇嗦 (6)；
[0012]
[001引如制備化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基醜基）氧化甲基-4,6,7，12-四 氨-4-氧化巧隙[2, 3-a]哇嗦（7a-U。7a中AA為k丙氨醜基，化中AA為k鄉氨醜基， 7c中AA為k苯丙氨醜基，7d中AA為甘氨醜基，7e中AA為k脯氨醜基，7f中AA為k異 亮氨醜基，7g中AA為k亮氨醜基，化中AA為k蛋氨醜基，7i中AA為k色氨醜基。
[0014]
[0015] 本發明的第H個內容是評價化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基醜基）氧化甲 基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化巧隙[2, 3-a]哇嗦（7a-i)的抗細胞增殖活性。
[0016] 本發明的第四個內容是評價化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基醜基）氧化甲 基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化剛巧[2, 3-a]哇嗦（7a-i)的抗腫瘤活性。
[0017] 本發明的第五個內容是W其中一個化合物為代表，考察對細胞周期的影響。
【附圖說明】
[0018] 圖1.化巧-3-己醜基-6-(N-苯己醜氨基醜基）氧化甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧 化巧隙[2,3-a]哇嗦（7a-U的合成路線.a)二氯亞諷/甲醇；（ii)l，l，3,3-四甲氧基丙 焼，H氣己酸/甲醇；（m)LiAlH4,THF;(iv)雙己帰麗，H己胺/丙麗；（v)2N肥1/丙麗； (vUKzCOs/甲醇；（vU)N-苯己醜氨基酸，DCC/冊Bt，NMM，THF。7a中AA為k丙氨醜基，7b 中AA為k鄉氨醜基，7c中AA為k苯丙氨醜基，7d中AA為甘氨醜基，7e中AA為k脯氨 醜基，7f中AA為k異亮氨醜基，7g中AA為k亮氨醜基，化中AA為k蛋氨醜基，7i中AA為k色氨醜基。
【具體實施方式】
[0019] 為了進一步闡述本發明，下面給出一系列實施例。送些實施例完全是例證性的，它 們僅用來對本發明進行具體描述，不應當理解為對本發明的限制。
[0020] 實施例1制備k色氨酸甲醋鹽酸鹽（1)
[0021] 50ml無水甲醇在冰浴下滴加3. 75ml(50mmol)氯化亞諷，30min內滴加完畢后，分 批加入9. 20g(42mmol)k色氨酸，室溫攬拌2地，化"(：肥13 :Me0H=2 : 3)監測至原料 消失終止反應。水泉抽走未反應完的氯化亞諷S0C12和肥1，用己離反復研磨得白色固體， 甲醇-己離重結晶，得心色氨酸甲醋鹽酸鹽為無色固體。收率在85-99%之間。ESI-MS(m/ e) 219 [M+Hr，烙點、旋光等物理常數與已報道的數據一致。
[002引實施例2制備1-化2-二甲氧己基）-2,3,4,9-四氨-目-巧晰駿酸甲醋似
[0023] 在250ml的圓底燒瓶中加入k色氨酸甲醋鹽酸鹽20g(78. 6mmol)，100ml甲醇， 加入H氣己酸20ml，活化半小時，再加入1，1，3, 3-四甲氧基丙焼16mU97. 6mmol)，攬拌下 升溫到8(TC，保溫反應10小時，TLC監測原料斑點消失，將反應液降溫至室溫，滴加飽和 化肥化水溶液調節抑至中性，減壓回收甲醇，殘余物中加入100ml二氯甲焼，分液后水層 用二氯甲焼萃取巧0mlX3)，合并有機層，無水硫酸鋼干燥，過濾，濾液減壓濃縮至干，殘余 物用硅膠柱層析（石油離：丙麗=2 : 1)純化得14. 2g(57% )化合物2,為黃色油狀物。 ESI-MS(m/e)319[M+Hr。
[0024] 實施例3制備1-化2-二甲氧己基）-3-居甲基-1，2,3,4-四氨巧晰（3)
[002引在250ml的圓底燒瓶中加入50ml無水四氨巧喃，攬拌下分批加入LiAlH40. 9g(23. 6mmol)，活化半小時。將5g(15. 7mmol)化合物（2)溶于50ml無水四氨巧 喃中，再將其緩慢滴入反應瓶中，升溫到4(TC，保溫反應3小時，TLC監測原料斑點消失。 將反應液降溫至室溫，加入0. 5mll5%的化0H水溶液，卒滅反應，用布什漏斗過濾除去鉛 鹽，濾液減壓濃縮至干，加入己酸己醋，己離磨洗得到目2. 52g(54% )合物3,為無色粉末。 ESI-MS(m/e)291[M+Hr。
[002引實施例4制備1-化2-二甲氧己基）-2- (1，3-二撰基了基）-3- (1，3-二撰基了 基）氧化甲基-1,2, 3,4-四氨巧晰（4)
[0027]在100ml的圓底燒瓶中加入1.Og(3. 8mmol)化合物（3)，再加入20ml丙麗攬拌溶 解，在冰浴下加入雙己帰麗1ml(11. 9mmol)，H己胺0. 4ml。反應液室溫攬拌24小時，TLC監 測原料斑點消失，加入0. 2ml水卒滅未反應的雙己帰麗，減壓回收溶劑。殘余物中加入50ml 二氯甲焼和50ml飽和化Cl水溶液，分液后水層用二氯甲焼萃取（30mlX3)，合并有機層，無 水硫酸鋼干燥，過濾，濾液減壓濃縮至干，殘余物用硅膠柱層析（石油離：丙麗=6 : 1)純 化得1. 32g(76% )化合物4,為黃色粉末。ESI-MS(m/e)459[M+田+。
[002引實施例5制備3-己醜基-6- (1，3-二撰基了基）氧化甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧 化巧隙[2,3-a]哇嗦巧）
[0029]在100ml的圓底燒瓶中加入1. 98g(4. 3mmol)化合物（4)，加入50ml丙麗攬拌溶 解，在冰浴下加入3ml鹽酸水溶液（2mol/L)，室溫反應12小時。TLC監測原料斑點消失，加 入飽和NaHC〇3水溶液調節抑至中性，減壓回收溶劑，殘余物中加入50ml二氯甲焼，分液后 水層用二氯甲焼萃取（30mlX3)，合并有機層，無水硫酸鋼干燥，過濾，濾液減壓濃縮至干， 殘余物用硅膠柱層析（石油離：丙麗=6 : 1)純化得1.26g(75%)化合物5,為黃色粉末。 ESI-MS(m/e)393[M+Hr。
[0030] 實施例6制備化巧-3-己醜基-6-居甲基-4,6, 7,12-四氨-4-氧化巧隙巧，3-a] 哇嗦化）
[0031] 在100ml的圓底燒瓶中加入1.06g(2. 7mmol)化合物巧），加入20ml甲醇攬拌 溶解，再加入745mg(5.4mol/L)碳酸鐘粉末，室溫反應8小時，有固體生成。TLC監測原 料斑點消失，過濾，濾餅用甲醇洗，得到黃色粉末338mg，即目標化合物化）。濾液減壓濃 縮至干，加入丙麗溶解，過濾除鹽，濾液用硅膠柱層析（二氯甲焼：甲醇=40 : 1)純化 得 709mg(85% )化合物 6,為黃色粉末。Mp;210-2irC;[0]。25 = -42. 7(c= 0. 10,甲 醇）；IR(邸r) ;3321，2974, 2922,1655,1551，1429,1364,1327,974,831，743cm1 ;ESI-MS(m/ e)307[M-H] ;1H-醒R(300MHz，DMS0-de) :5/ppm= 11.83(s，lH)，8. 10(d，J= 7.8Hz, 1H)，7. 65(d，J= 7. 8Hz，lH)，7. 45(d，J= 8.lHz，lH)，7. 28(t，J= 7. 8Hz，lH)，7.ll(t， J= 7. 8Hz，IH)，6.82 (d，J= 7. 8Hz，IH) ,5.40-5. 46 (m，lH)，5.18 (t，J= 6.0Hz，IH)， 3. 54-3. 60(m，lH)，3. 28-3. 41(m，2H)，3.ll(dd，J= 6. 9Hz，J= 17.lHz，lH)，2. 59(s，lH); "C-醒R(75MHz，DMSO-de) ;S/ppm= 196. 62,160. 68,142. 75,142.