一種豬血提取血漿蛋白粉的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物活性物質的分離提取技術領域，特別是涉及一種豬血提取血漿蛋白粉的方法。
【背景技術】
[0002]豬血是一種優質蛋白質，營養學家稱其為液體肉。豬血中含有人體所需要的幾乎全部的營養成分:蛋白質、氨基酸、維生素、糖和鈉、鉀、鐵、鈣等人體不可缺少的微量元素。其中蛋白質18.9%、非蛋白有機體1.2%、礦物質0.9%、水分79%，另外，其氨基酸組成平衡，含人體所需的8種必需氨基酸的總量高于人乳和全蛋，特別是賴氨酸的含量高達9%，符合聯合國糧農組織、世界衛生組織(FA0/WH0)專家組推薦模式。
[0003]我國是豬血資源大國，但在豬血資源開發利用上卻落后于不少發達國家，由于經簡單加工的豬血蛋白不易被消化吸收且顏色較深、血腥味較重適口性差，所以很久以來，許多豬血作為廢棄物倒進地溝，既造成巨大浪費，又污染環境。
[0004]國外對動物血的開發始于上世紀初，初期主要用于飼料工業。隨著高新技術的發展，國內外許多研究部門尤其注重用生化技術加工豬血用于食品、制藥等方面的研究。目前血液產品在保健品行業已經形成了一定的規模，產業化前景良好。近年來，我國豬血深度開發也取得了重要進展，豬血作為一個營養寶庫，已經得到極其廣泛的研究，所提出的加工生產工藝流程不下幾十種。從直接食用豬血豆腐，到酶解豬血粉，復合氨基酸粉的生產，已經取得了長足的進展，但是仍然不能滿足人類的需要。存在的問題是大多數工藝還不完善，如有的工藝能耗大耗時長、有的工藝只能生產單一產品、有的工藝得率低、有的工藝使用大量有機溶劑，存在環保缺陷等。而本發明方法克服了上述缺點，發明了零排放的利用豬血同時生產凝血酶和豬血水解蛋白的綠色方法。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供一種豬血提取血漿蛋白粉的方法，解決上述現有技術中的一個或者是多個。
[0006]本發明提供一種豬血提取血漿蛋白粉的方法，包括如下步驟:
[0007]I)制備抗凝豬血:取檢疫合格的新鮮豬血放入第一容器中，該容器中已事先加入了 1.0%的檸檬酸鈉、1.0%的乙二胺四乙酸二鈉、1.0%乙二胺四乙酸二鉀、0.6%六偏磷酸鈉和0.8%焦磷酸鈉組成的抗凝劑，充分攪拌均勻，在7?8°C下，罐藏42h ；
[0008]2)血漿、血球分離:在7?8°C下，罐藏42h后，抗凝豬血上層為無色透明液體為血漿，下層深紅色粘稠液體為血球，用虹吸法將上層血漿吸到第二容器中；余下的血球經轉速為2500r/min離心后，將上層血漿合并到第二容器中低溫冷凍備用，血球則冷凍貯藏至第三容器中過夜待用；
[0009]3)血漿沉淀收集凝血酶原:第二容器中的血漿解凍后，濾除上層漂浮的白色絮狀物后，用0.9%生理鹽水稀釋，低溫靜置過夜，收集沉淀即得凝血酶原；
[0010]4)凝血粗酶液制備:將收集的凝血酶原沉淀溶解于pH值為7.0的磷酸緩沖液中，用1.0% CaCl2溶液激活凝血酶原，過濾收集濾液即得凝血酶粗酶液；
[0011]5)凝血酶精品制備:將凝血酶粗酶液用孔徑為1.2nm的納濾膜處理，濃縮后原體積的1/25-1/30收集截留液，進一步將截留液噴霧干燥，即得血漿蛋白粉；
[0012]6)血球破壁、溶血:向第三容器中加入血球體積的適量生理鹽水，使液體中蛋白質含量為20%，升溫至60°C，進行超聲波處理12min ;
[0013]7)血球蛋白分段酶解:用4.0moI/L NaOH調節pH值至8.0，將溫度升至40-45°C，加入適量沙雷肽酶，保溫2小時后，再升溫至50°C，保溫3小時；調節pH值至9.0，加入適量復合蛋白酶，保溫4小時使血球蛋白充分水解；
[0014]8)豬血水解蛋白制備:酶解結束后，冷卻至常溫，用0.20um的濾膜過濾除菌即可制成液體豬血水解蛋白，進一步將該液體噴霧干燥后制成血球蛋白粉。
[0015]本發明的有益效果是:該方法制得的豬血水解蛋白中氨基酸含量占蛋白質的90%以上，易于吸收利用，且充分利用了原料，一次投料可以生產兩種高附加值產品。整個生產過程避免使用毒性大的有機溶劑，克服了產品單一、溶劑殘留等缺陷，降低了生產成本。
[0016]在一些實施方式中，在步驟6)中，超聲波處理的條件為超聲波功率250W。
[0017]在一些實施方式中，在步驟7)中，所述復合蛋白酶由胰蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶按一定比例混合而成。
【具體實施方式】
[0018]本發明提供一種豬血提取血漿蛋白粉的方法，下面結合實施例，對本發明作詳細介紹:
[0019]實施例1
[0020]本實施例中，復合蛋白酶由胰蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶按一定比例混合而成。具體步驟為:
[0021]I)制備抗凝豬血:取檢疫合格的新鮮豬血放入第一容器中，該容器中已事先加入了 1.0%的檸檬酸鈉、1.0%的乙二胺四乙酸二鈉、1.0%乙二胺四乙酸二鉀、0.6%六偏磷酸鈉和0.8%焦磷酸鈉組成的抗凝劑，充分攪拌均勻，在7°C下，罐藏42h ;
[0022]2)血漿、血球分離:在7°C下，罐藏42h后，抗凝豬血上層為無色透明液體為血漿，下層深紅色粘稠液體為血球，用虹吸法將上層血漿吸到第二容器中；余下的血球經轉速為2500r/min離心后，將上層血漿合并到第二容器中低溫冷凍備用，血球則冷凍貯藏至第三容器中過夜待用；
[0023]3)血漿沉淀收集凝血酶原:第二容器中的血漿解凍后，濾除上層漂浮的白色絮狀物后，用0.9%生理鹽水稀釋，低溫靜置過夜，收集沉淀即得凝血酶原；4)凝血粗酶液制備:將收集的凝血酶原沉淀溶解于PH值為7.0的磷酸緩沖液中，用1.0% CaCl2溶液激活凝血酶原，過濾收集濾液即得凝血酶粗酶液；
[0024]5)凝血酶精品制備:將凝血酶粗酶液用孔徑為1.2nm的納濾膜處理，濃縮后原體積的1/30收集截留液，進一步將截留液噴霧干燥，即得血漿蛋白粉；
[0025]6)血球破壁、溶血:向第三容器中加入血球體積的適量生理鹽水，使液體中蛋白質含量為20%，升溫至60 °C，進行功率為250W的超聲波處理12min ；
[0026]7)血球蛋白分段酶解:用4.0mol/L NaOH調節pH值至8.0，將溫度升至40°C，加入適量沙雷肽酶，保溫2小時后，再升溫至50°C，保溫3小時；調節pH值至9.0，加入適量復合蛋白酶，保溫4小時使血球蛋白充分水解；
[0027]8)豬血水解蛋白制備:酶解結束后，冷卻至常溫，用0.20um的濾膜過濾除菌即可制成液體豬血水解蛋白，進一步將該液體噴霧干燥后制成血球蛋白粉。
[0028]實施例2
[0029]本實施例中，復合蛋白酶由胰蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶按一定比例混合而成。具體步驟為:
[0030]I)制備抗凝豬血:取檢疫合格的新鮮豬血放入第一容器中，該容器中已事先加入了 1.0%的檸檬酸鈉、1.0%的乙二胺四乙酸二鈉、1.0%乙二胺