一種從枇杷葉中分離純化熊果酸的方法
【技術領域】
[0001 ] 本發明涉及一種從枇杷葉中分離純化熊果酸的方法，屬于植物提取技術領域。
【背景技術】
[0002]枇杷葉系薔薇科植物枇杷的葉子，性微寒，味苦辛，止咳平喘，清肺和胃，降氣化痰，花、果、核等部位富含熊果酸酸、齊墩果酸、苦杏仁苷、皂苷、黃酮、水溶性多糖和有機酸等活性成分。目前，枇杷是以鮮果供應為主，尚未進行其它部位的深度開發和綜合利用。
[0003]枇杷葉中的熊果酸是一種存在于天然植物中的一種三萜類化合物，具有鎮靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗潰瘍、降低血糖等多種生物學效應，熊果酸還具有明顯的抗氧化功能，已引起國際社會的普遍關注。經科學研究及臨床應用證明，熊果酸具有保肝及抗肝炎作用、抗腫瘤作用、抗氧化作用、抗菌、抗炎及抗病毒作用、降血脂、抗動脈粥樣硬化、降低血糖的作用、對艾滋病病毒的抑制作用、抗糖尿病、抗潰瘍作用、鎮靜及安定作用、增強免疫功能作用。臨床證明發現熊果酸具有抗致癌、抗促癌、誘導F9畸胎瘤細胞分化和抗血管生成作用。研究發現:熊果酸能明顯抑制HL-60細胞增殖，可誘導其凋亡；能使小鼠的巨噬細胞吞噬功能顯著提高。體內試驗證明，熊果酸可以明顯增強機體免疫功能。說明熊果酸的抗腫瘤作用廣泛，極有可能成為低毒有效的新型抗癌藥物，但是目前對于熊果酸的提取一般采用溶劑提取法，但是該方法具有提取流程長、耗時多、提取物雜質含量高，提取效率低的問題，同時由于采用大量的溶劑，還存在殘留問題及其環境污染等問題。
[0004]在枇杷產區，枇杷葉、花、核這些具有較高附加值的部分基本上被浪費掉，沒有得到應有的應用。通常在不影響枇杷果生產的前提下，全國可年采收枇杷葉干品5萬噸。因此，對枇杷葉進行深度開發利用，有利于促進枇杷產業的可持續健康發展，對綜合利用枇杷資源，提高枇杷的經濟價值，開發新產品，具有十分重要的社會效益和經濟價值。
【發明內容】
[0005]本發明主要解決的技術問題:針對目前枇杷葉中的熊果酸在提取過程中不但提取流程長、耗時多、提取物雜質含量高，提取效率比較低，而且采用大量的溶劑，還存在殘留問題及其環境污染的問題，提供了一種從枇杷葉中分離純化熊果酸的方法。該方法首先將超細碳酸鈣粉末與親水性有機物固載在凹凸棒土上，然后通過不斷洗滌去除其它雜質，最后采用超臨界CO2萃取熊果酸從溶液中吸附提取出來，使得提取出來的熊果酸提取率非常高，幾乎接近純化，達到高濃度目的。
[0006]為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案是:
(1)取50?70g新鮮的枇杷葉子洗凈，去除灰塵和渣質，將水分瀝干后在35?55°C下干燥；
(2)將干燥后的枇杷葉放入粉碎機中，粉碎成80?100目的粉末；
(3)取60?70g粒徑為I?3mm的超細碳酸鈣粉末與180?210mL乙酸混合均勻，順時針攪拌，至粘稠狀為止； (4)將上述所得的粘稠狀物質用氣槍均勻噴灑在粒徑為3?5mm的凹凸棒土上，并調至溫度為110?130°C，使其高溫烘干后完全固載在上面；
(5)將上述固載粘稠狀物質的凹凸棒土顆粒浸漬在質量濃度為0.8mol/L的鹽酸100?130mL中，待其發生反應，直至反應至無氣泡后，得親水性有機物凹凸棒土顆粒；
(6)取上述得到的親水性有機物凹凸棒土顆粒80?100g、步驟(2)中粉碎的枇杷葉粉末40?50g、放入1500mL三角燒瓶中，分別插上溫度計、回流管和攪拌器，并加入水800?100mL,回流 5 ?6h ;
(7)將回流后的溶液通過石油醚洗滌5?1min得混合溶液，待洗滌完成后，將其混合溶液中加入0.8mol/L的氫氧化鈉溶液，混合攪拌8?1min后加入去離子水洗滌至無色后，在95?100°C下進行烘干2?3h得到白色粉末；
(8)將烘干的白色粉末采用無水乙醇加熱溶解并反復洗滌，并對其過濾，得到濾液后將其置于5?100°C下進行烘干2?3h后打開三角燒瓶，取出凹凸棒土顆粒，將其浸入質量濃度為98%甲醇中，加入檸檬酸，調節pH為1.5?3.5，緩慢攪拌產生沉淀，繼續保持攪拌狀態，直至無沉淀物生成時停止，靜置20?30min ；
(9)將得到的沉淀物用去離子水沖洗后，進行超臨界CO2萃取40?50min，萃取溫度為62?68°C，萃取壓力為12?14MPa，即可得到純度為99.99%的熊果酸。
[0007]本發明的有益效果:
(1)乙酸的溶解性能好，對于枇杷葉細胞穿透能力強，更加容易滲透到枇杷葉內部組織結構中，大大提高了枇杷葉中熊果酸的提取率，使得提取率達到99.99%以上；
(2)縮短了提取流程，節約了85%以上提取時間，提取物無雜質，接近純化效果。
【具體實施方式】
[0008](I)取50?70g新鮮的枇杷葉子洗凈，去除灰塵和渣質，將水分瀝干后在35?55 °C下干燥；
(2)將干燥后的枇杷葉放入粉碎機中，粉碎成80?100目的粉末；
(3)取60?70g粒徑為I?3mm的超細碳酸鈣粉末與180?210mL乙酸混合均勻，順時針攪拌，至粘稠狀為止；
(4)將上述所得的粘稠狀物質用氣槍均勻噴灑在粒徑為3?5mm的凹凸棒土上，并調至溫度為110?130°C，使其高溫烘干后完全固載在上面；
(5)將上述固載粘稠狀物質的凹凸棒土顆粒浸漬在質量濃度為0.8mol/L的鹽酸100?130mL中，待其發生反應，直至反應至無氣泡后，得親水性有機物凹凸棒土顆粒；
(6)取上述得到的親水性有機物凹凸棒土顆粒80?100g、步驟(2)中粉碎的枇杷葉粉末40?50g、放入1500mL三角燒瓶中，分別插上溫度計、回流管和攪拌器，并加入水800?100mL,回流 5 ?6h ;
(7)將回流后的溶液通過石油醚洗滌5?1min得混合溶液，待洗滌完成后，將其混合溶液中加入0.8mol/L的氫氧化鈉溶液，混合攪拌8?1min后加入去離子水洗滌至無色后，在95?100°C下進行烘干2?3h得到白色粉末；
(8)將烘干的白色粉末采用無水乙醇加熱溶解并反復洗滌，并對其過濾，得到濾液后將其置于5?100°C下進行烘干2?3h后打開三角燒瓶，取出凹凸棒土顆粒，將其浸入質量濃度為98%甲醇中，加入檸檬酸，調節pH為1.5?3.5，緩慢攪拌產生沉淀，繼續保持攪拌狀態，直至無沉淀物生成時停止，靜置20?30min ；
(9)將得到的沉淀物用去離子水沖洗后，進行超臨界CO2萃取40?50min，萃取溫度為62?68°C，萃取壓力為12?14MPa，即可得到純度為99.99%的熊果酸。
[0009]取50g新鮮的枇杷葉子洗凈，去除灰塵和渣質，將水分瀝干后在35 °C下干燥；將干燥后的枇杷葉放入粉碎機中，粉碎成80目的粉末；取60g粒徑為Imm的超細碳酸鈣粉末與ISOmL乙酸混合均勻，順時針攪拌，至粘稠狀為止；將上述所得的粘稠狀物質用氣槍均勻噴灑在粒徑為3mm的凹凸棒土上，并調至溫度為110°C，使其高溫烘干后完全固載在上面；將上述固載粘稠狀物質的凹凸棒土顆粒浸漬在質量濃度為0.8mol/L的鹽酸10mL中，待其發生反應，直至反應至無氣泡后，得親水性有