一種化合物及其在帕金森疾病方面的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于帕金森治療藥物技術領域，具體涉及一種化合物及其在帕金森疾病方 面的應用。
【背景技術】
[0002] 運動失調是帕金森病（ParkinsonDisease,PD)的重要癥狀，表現為動作遲緩，肌 肉僵直和靜止性震顫，主要病理表征為紋狀體和黑質多巴胺神經元的大量丟失以及丘腦底 核（Subthalamicnucleus,STN)的異常活化。基于以上兩點，目前對于帕金森病的治療主 要分為以L-dopa為代表的藥物治療和以病灶切除為主的外科手術治療。這兩種治療方法 都不能治愈帕金森病，長時程給予L-dopa等藥物會帶來耐受和"異動癥"等嚴重的副作用， 而手術切除STN或其下游一些病理性核團則有不可逆轉的缺點。
[0003] 近年來，深部腦刺激（Deep-brainStimulation,DBS)逐漸成為常用的治療帕金森 病癥狀的神經外科手段。國內外很多醫院已應用DBS治療神經疾病，取得了很好的療效，并 開始研究其治病的機理。相比于損毀手術，DBS具有對腦組織非破壞性影響、參數可調及副 作用可控等優點。根據美敦力公司統計，截止到2013年，全世界已有超過100, 000病人通過 接受DBS病情得到改善，病人術后無副作用的生存時間最長可達到15年。雖然在臨床上， 高頻高強依賴的DBS可以在起搏器打開的瞬間發揮緩解帕金森病癥狀的顯著作用，但是其 發揮作用的分子機制卻依然不清楚。已有的報道均無法解釋DBS刺激靶點以及刺激參數的 特異性。可以接受DBS手術的病人必須滿足嚴格的身體和病情條件，精細、復雜、耗時的手 術過程及操作的不可逆性均限制DBS的應用，此外，DBS手術費用昂貴。因此，找到可以代 替DBS手術，同時達到相似甚至優于DBS療效的新藥是臨床上治療帕金森等疾病的迫切需 要，具有巨大的社會效益。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種化合物及其在帕金森疾病方面的應用，具體技術方案 如下：
[0005] -種化合物，所述化合物的名稱為2_(3_氯苯并[b]噻吩-2-甲酰胺基）噻 唑-4-甲酸乙酯（JK60)，結構式為
[0006] 進一步地，上述2-(3-氯苯并[b]噻吩-2-甲酰胺基）噻唑-4-甲酸乙酯在快速 糾正嚙齒類動物帕金森病導致的運動失調中的應用。
[0007] 本發明還提供另一種化合物，所述化合物的名稱為N-4-甲氨基-環己 烷基_3_ (4-哌啶基）-節胺-2_3_氯苯并[b]噻吩-2-甲酰胺（SAG)，結構式為
[0008] 進一步地，上述N-4-甲氨基-環己烷基-3-(4-哌啶基）_芐胺-2-3-氯苯并[b] 噻吩-2-甲酰胺在快速糾正嚙齒類動物帕金森病導致的運動失調中的應用。
[0009] 進一步地，所述帕金森病導致的運動失調為單側打轉。
[0010] 進一步地，上述化合物在制備用于治療、預防或改善帕金森病導致的運動失調的 藥物中的應用。
[0011] 本發明的有益效果為：通過給予上述小分子化合物SAG或JK60,有望替代DBS手 術，并達到和DBS類似甚至更優的快速糾正嚙齒類動物帕金森疾病導致的單側打轉的治療 效果。
【附圖說明】
[0012] 圖1為給予單側帕金森小鼠模型DBS(10HZ、100Hz)流程圖。
[0013] 圖2為單側STN-DBS對阿撲嗎啡誘導的帕金森小鼠打轉的影響示意圖。
[0014] 圖3為單側STN-DBS對阿撲嗎啡誘導的帕金森大鼠打轉的影響示意圖。
[0015] 圖4為側腦室給予單側帕金森小鼠模型ACSF、SAG流程圖。
[0016] 圖5為側腦室提前注射SAG、ACSF對阿撲嗎啡誘導的帕金森小鼠打轉的影響對比 圖。
[0017] 圖6為側腦室給予單側帕金森大鼠模型ACSF、SAG流程圖。
[0018] 圖7為側腦室提前注射SAG、ACSF對阿撲嗎啡誘導的帕金森大鼠打轉的影響對比 圖。
[0019] 圖8為側腦室給予單側帕金森小鼠模型ACSF、JK60流程圖。
[0020] 圖9為側腦室提前注射JK60、ACSF對阿撲嗎啡誘導的帕金森小鼠打轉的影響對比 圖。
[0021] 圖10為小分子化合物SAG和JK60的劑量反應曲線圖。
【具體實施方式】
[0022] 下面通過實施例結合附圖對本發明給予進一步的說明，它們不應被用來解釋或限 制本發明的范圍。
[0023] 本發明以損毀單側紋狀體及黑質多巴胺神經元的大小鼠為帕金森病實驗模型。 在此模型上，損傷側STN-DBS可抑制阿撲嗎啡引起的單側打轉行為，側腦室注射化合物 SAG(Smoothenedagonist)，也顯著抑制阿撲嗎啡誘發的大小鼠運動失調。側腦室注射JK60 也可以部分減少阿撲嗎啡誘發的小鼠單側打轉行為。
[0024] 實施例1 2-(3-氯苯并[b]噻吩-2-甲酰胺基）噻唑-4-甲酸乙酯（JK60)的制 備
[0025] 將3-氯苯并[b]噻吩-2-甲酸（200mg,0.94mmol)溶于無水二氯甲燒（10ml)，室 溫下分別加入DMF(0. 02ml)和草酰氯（0. 4ml)。反應混合物在室溫下攪拌2小時，減壓濃縮 得到3-氯苯并[b]噻吩-2-甲酰氯。
[0026] 將2-氨基噻唑-4-甲酸乙酯（130mg,0?75mmol)溶于無水二氯甲燒（3ml)，加入 三乙胺（0. 52ml)。在0°C下，將3-氯苯并[b]噻吩-2-甲酰氯的無水二氯甲烷溶液（5ml) 滴加到反應液中。滴加結束后，反應混合物在40°C攪拌過夜。反應液冷卻至室溫，將飽和碳 酸氫鈉水溶液加入到反應體系中，用二氯甲烷萃取（10mlX3)。合并后的有機相，用飽和食 鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，旋干。粗品經過硅膠柱層析（洗脫劑：乙酸乙酯：石油醚=0~ 50% )后，得到黃色固體（55mg，收率20% )。
[0027] LC-MS(ESI) :m/z(M+l)367. 0。4M1R(400MHz，DMS0)S13.24(s，1H)，8.25-8.1 2 (m, 2H), 8.02-7. 95 (m,J= 6. 2, 2. 9Hz, 1H),7. 7 1 - 7. 59 (m,J= 6. 5, 3. 1Hz, 2H)，4.31(q,J=7. 1Hz, 2H)，1. 31(t,J=7. 1Hz, 3H)〇
[0028] 實施例2生物學實驗
[0029] 1.立體定位：6_羥多巴胺（6-0HDA)損毀左側紋狀體，制備大小鼠帕金森病模型
[0030] 1)選擇鼠齡8周以上、體重25g左右健康雄性C57/BL6小鼠，以及鼠齡10周以上、 體重200-250g的健康雄性SD大鼠，用于制備帕金森病模型；
[0031] 2)大小鼠提前半小時腹腔注射選擇性去甲腎上腺素再攝取的抑制劑地昔帕明 (4mg/ml，溶于生理鹽水，25mg/kg)，以達到后續6-0HDA特異性傷害多巴胺能神經元的目 的；
[0032] 3)大鼠用水合氯醛（7%，500以/10(^)，小鼠用戊巴比妥鈉（0.7%，1(^1/^)腹 腔注射麻醉；
[0033] 4)將麻醉后的大小鼠固定于立體定向儀上，頭部正中切口，剝離骨膜，止血。參照 成年大小鼠大腦圖譜，準確定位左側紋狀體坐標（門齒與耳桿平行，大鼠：兩個位點分步注 射，位點1:前囪前〇? 5mm，左旁開2. 5mm，顱骨表面下5. 0mm，位點2:前囪前1.0mm，左旁開 4. 5mm，顏骨表面下6. 0mm;小鼠：前肉前0? 4mm，左旁開1. 8mm，顏骨表面下3. 5mm)，用牙科 鉆在顱骨頂鉆孔。
[0034] 5)微量注射器吸6-0HDA溶液（0. 02%維生素C，大鼠20yg/y1，兩位點各2y1， 小鼠2yg/y1，2y1)，速度為0? 1y1/min，注射前、后各留針靜置5min，退出，縫合皮膚。
[0035] 2.行為檢測：阿撲嗎啡誘導的帕金森大小鼠運動失調
[0036] 模型建立1-2周后，按大鼠2mg/kg，小鼠0.5mg/kg腹腔注射阿撲嗎啡，以誘發運動 失調（向未損傷側旋轉），旋轉過程發生在直徑40cm，高25cm的透明圓筒內。通過(XD記 錄旋轉開始時間及旋轉穩定后20分鐘（大鼠）或13分鐘（小鼠）內旋轉次數，平均旋轉 次數在4rpm/min以上的動物為成功帕金森大小鼠運動失調模型，可對其進行后續實驗及 數據統計。
[0037] 3.DBS瞬時刺激
[0038] 建模成功后的帕金森大小鼠再次開顱，于左側（損毀側）丘腦底核處埋植刺激電 極。坐標為門齒與耳桿平行，大鼠為前囪后3. 8mm，左旁開2. 4mm，顏骨表面下8. 2mm;小鼠 為前囪前2. 0mm，左旁開1. 5mm，顏骨表面下4. 25mm。刺激電極通過導線連接隔離器，通過刺 激器Master8給予特定頻率的刺激，刺激強度通過隔離器控制。對小鼠的刺激方法為：在 100-500yA電流強度下（刺激強度的確定以不引起動物不規則運動為標準），低頻（10Hz) 持續刺激3minl0s，高頻（100Hz)持續刺激3minls。對大鼠的刺激方法為：在100-500yA 電流強度下（刺激強度的確定以不引起動物不規