一種從動物膽中提取膽紅素的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種從動物膽中提取膽紅素的方法，屬于生物制藥領域。
【背景技術】
[0002]膽紅素是膽色素的一種，為體內的血紅蛋白分解代謝后的還原產物，膽汁的膽紅素含70-80%的二葡萄糖醛酸酯，20-30%的單葡萄糖醛酸酯及微量的膽紅素與葡萄糖或木糖的結合物。膽紅素制品為淡橙色或深紅色的單斜晶體，干燥固體較穩定，其氯仿溶液置暗處也較穩定，在堿液中或遇三價鐵離子極不穩定，很快被氧化為膽綠素，而與甘氨酸、丙氨酸或組氨酸結合，加血清蛋白，維生素丙或乙二胺四乙酸二酸鈉，可使其穩定。膽紅素不溶于水，溶于苯，氯仿，氯苯，二硫化碳及堿液中，微溶于乙醇和乙醚。
[0003]膽紅素有鎮靜、鎮驚、解熱、降壓、促進紅血球新生，對乙型腦炎病毒和W256癌細胞有抑制作用是制作人工牛黃的重要原料，人工牛黃屬于貴重藥品，有去驚痛、寒熱、中風失音、除熱等功效。目前，生產膽紅素的方法主要有萃取法和鈣鹽法，萃取法是利用膽紅素溶于氯仿而不溶于水的特性將膽紅素從膽汁中萃取而得，收率為萬分之2左右。該方法也需用氯仿，不利于人體健康，而且膽紅素的收率也較低，成本較高。鈣鹽法是將豬膽汁水解后加入氫氧化鈣使膽紅素和鈣反應得到鈣鹽沉淀，沉淀加水并加入鹽酸至PH值為1.5，然后加入乙醇得到粗膽紅素沉淀，加入氯仿將粗膽紅素溶解，過濾，濾液蒸發得到符合藥典要求的膽紅素。其收率為萬分之1.5左右，該方法需要用氯仿溶解膽紅素，不利于人體健康，而且在提取膽紅素過程中，酸解取得的膽紅素，長時間和酸接觸，使其發生酸催化異構化，而造成較大的損失，因此膽紅素的收率較低，成本較高。
【發明內容】
[0004]本發明所要解決的技術問題:針對鈣鹽法生產膽紅素需要用氯仿溶解膽紅素，不利于人體健康，而且在提取膽紅素過程中，酸解取得的膽紅素，長時間和酸接觸，使其發生酸催化異構化，導致膽紅素的收率較低，成本較高的弊端，提供了一種從動物膽中提取膽紅素的方法，該方法將動物膽經氯化鈉溶液浸泡切塊，尿酸浸泡加入碘化銀混合擠壓得汁液，進行微生物酶解厭氧發酵后，加入硫酸鋅溶液，用氫氧化鈉和鹽酸溶液進行調節PH值，攪拌降溫，靜置沉淀過濾，收集過濾物和過濾液，再將所得過濾液用半透膜過濾得過濾物，將所得過濾物混合，用無水乙醇進行洗滌，干燥至室溫而得。該方法生產膽紅素的收率高，成本低。
[0005]為解決上述技術問題，本發明采用如下所述的技術方案是:
(1)取4?5kg動物膽放入容器中，使用質量濃度為70?80%的氯化鈉溶液浸泡5?7天，溫度保持為30?35°C，用氮氣將容器內的空氣排出，然后將其取出，放入切肉機中切割成塊；
(2)將上述切割成塊的動物膽放入容器中，向其中加入質量分數為0.6?1.2%的尿酸溶液浸泡動物膽，再加入800?900g碘化銀，攪拌均勻，再將容器置于光照強度為8000?lOOOOlux的環境下10?15min，然后緩慢升溫至2?4°C，升溫速率為2°C /min ；
(3)待上述升溫結束后，將容器中的混合物放入擠壓機中進行擠壓，收集擠壓出的汁液，將所得的汁液放入發酵罐中，向其中分別加入汁液體積2?3倍的水、100?200g葡萄糖、300?500g牛肉膏、80?110g80?90目廢棄蘑菇培養基、120?140g脂肪酶和200?230g木瓜蛋白酶，攪拌均勾密封發酵10?15天，發酵前4?6天，每隔12?14h將容器打開進行翻攪一次；
(4)待上述發酵結束后，取發酵液放入容器中，向其中加入發酵液體積5?10%的質量濃度為30?40%硫辛酸溶液，再使用質量濃度為60?70%的氫氧化鈉調節pH為10?11，加熱至80?90°C，攪拌10?15min，然后趁熱使用質量濃度為80%的鹽酸溶液調節pH為6.5?7.0，攪拌均勻，快速降溫至20?25°C，靜置直至無沉淀產生，過濾，收集過濾物；
(5)將上述所得的過濾液使用半透膜進行過濾，得過濾物，將所得的過濾物與上述所得的過濾物合并，再使用溫度為25?30°C的無水乙醇對過濾物進行洗滌3?5次，然后將其放入烘箱中10?15min，溫度控制為60?70°C，待干燥后取出冷卻至室溫，即可得到膽紅素。
[0006]本發明與其他方法相比，有益技術效果是:
(1)該方法生產膽紅素過程中無需用氯仿等有毒溶劑，所得產品安全性能高，對人體健康無危害；
(2)提取的膽紅素收率高，可達萬分之3.5以上，膽紅素收率高出其他方法萬分之
2.0?萬分之2.5，降低了膽紅素的生產成本。
【具體實施方式】
[0007]首先取4?5kg動物膽放入容器中，使用質量濃度為70?80%的氯化鈉溶液浸泡5?7天，溫度保持為30?35 °C，用氮氣將容器內的空氣排出，然后將其取出，放入切肉機中切割成塊；然后將上述切割成塊的動物膽放入容器中，向其中加入質量分數為0.6?1.2%的尿酸溶液浸泡動物膽，再加入800?900g碘化銀，攪拌均勻，再將容器置于光照強度為8000?lOOOOlux的環境下10?15min，然后緩慢升溫至2?4°C，升溫速率為2°C /min;待上述升溫結束后，將容器中的混合物放入擠壓機中進行擠壓，收集擠壓出的汁液，將所得的汁液放入發酵罐中，向其中分別加入汁液體積2?3倍的水、100?200g葡萄糖、300?500g牛肉膏、80?110g80?90目廢棄蘑菇培養基、120?140g脂肪酶和200?230g木瓜蛋白酶，攪拌均勾密封發酵10?15天，發酵前4?6天，每隔12?14h將容器打開進行翻攪一次；待上述發酵結束后，取發酵液放入容器中，向其中加入發酵液體積5?10%的質量濃度為30?40%硫辛酸溶液，再使用質量濃度為60?70%的氫氧化鈉調節pH為10?11，加熱至80?90°C，攪拌10?15min，然后趁熱使用質量濃度為80%的鹽酸溶液調節pH為6.5?7.0，攪拌均勻，快速降溫至20?25°C，靜置直至無沉淀產生，過濾，收集過濾物；最后將上述所得的過濾液使用半透膜進行過濾，得過濾物，將所得的過濾物與上述所得的過濾物合并，再使用溫度為25?30°C的無水乙醇對過濾物進行洗滌3?5次，然后將其放入烘箱中10?15min，溫度控制為60?70°C，待干燥后取出冷卻至室溫，即可得到膽紅素。
[0008]實例I 首先取4kg動物膽放入容器中，使用質量濃度為70 %的氯化鈉溶液浸泡5天，溫度保持為30°C，用氮氣將容器內的空氣排出，然后將其取出，放入切肉機中切割成塊；然后將上述切割成塊的動物膽放入容器中，向其中加入質量分數為0.6%的尿酸溶液浸泡動物膽，再加入SOOg碘化銀，攪拌均勻，再將容器置于光照強度為SOOOlux的環境下lOmin，然后緩慢升溫至2°C，升溫速率為2 V /min ;待上述升溫結束后，將容器中的混合物放入擠壓機中進行擠壓，收集擠壓出的汁液，將所得的汁液放入發酵罐中，向其中分別加入汁液體積2倍的水、10g葡萄糖、300g牛肉膏、80g80目廢棄蘑菇培養基、120g脂肪酶和200g木瓜蛋白酶，攪拌均勻密封發酵10天，發酵前4天，每隔12h將容器打開進行翻攪一次；待上述發酵結束后，取發酵液放入容器中