抗N3pGlu淀粉樣蛋白BETA肽抗體及其用圖
【專利說明】抗N3pGIu淀粉樣蛋白BETA肽抗體及其用途
[0001] 本申請是申請日為2011年8月9日的中國專利申請201180039876. 1 "抗N3pGlu 淀粉樣蛋白BETA肽抗體及其用途"的分案申請。
技術領域
[0002] 本發明涉及能選擇性結合N3pGlu淀粉樣蛋白Beta肽的抗體以及它們在淀粉樣蛋 白Beta(AP，也稱為Abeta)肽相關疾病的治療中的用途。
【背景技術】
[0003] 循環形式的AP肽是由前體蛋白即淀粉樣蛋白前體蛋白（APP)裂解而產生的 38-43個氨基酸（大部分為38、40或42個氨基酸）組成。AP從可溶性形式向具有高片 層含量的不溶性形式的轉化以及這些不溶性形式作為神經炎性斑塊和腦血管斑塊在腦部 沉積，已證明與各種疾病和病況相關，包括阿爾茨海默病（Alzheimer'sdisease) (AD)、唐 氏綜合癥（Down'sSyndrome)和腦淀粉樣蛋白血管病（CAA)。
[0004] 斑塊中存在的沉積物主要由A0肽的不均勻混合物組成。N3pGluA0，也稱為 N3pE或A0p3 42，是僅見于斑塊的A0肽截短形式。N3pGluA0缺乏A0N-端的頭2個氨 基酸殘基并具有源自第3個氨基酸位置的谷氨酸的焦谷氨酸。盡管N3pGluA0肽是腦 中沉積的A0的少量成分，但研究已經證明N3pGluA0肽具有侵襲性聚集（aggressive aggregation)性質并在沉積級聯早期積累。
[0005] 盡管先前已經描述了靶向N3pGluAP肽的多克隆抗體和單克隆抗體（US 7，122,374和冊2〇1〇/〇〇9987)，但仍然需要高親和力抗吧口61114 0單克隆抗體，以在體內 結合靶標（即斑塊結合）并隨之降低斑塊水平。另外，假如氨基-端和羧基-端的抗A0 抗體導致腦淀粉樣蛋白血管病（CAA)相關的微出血增加，就需要不會導致微出血增加的抗 N3pGluAP抗體，即使慢性治療導致沉積斑塊明顯減少。
【發明內容】
[0006] 本發明范圍之內的抗體是具有多種所需性質的治療上有用的N3pGluA0肽拮抗 劑。本發明的抗體以高親和力結合人N3pGluA0肽并表現出劑量依賴性體內斑塊減少，而 不增加腦淀粉樣蛋白血管病（CAA)相關的微出血。
【具體實施方式】
[0007] 本發明提供人工程化抗N3pGluAP抗體或其抗原-結合片段，其25°C時對于人 N3pGluAP肽的Kd小于1x109M。在一個優選的實施方案中，本發明提供人工程化抗 N3pGluAf3抗體或其抗原-結合片段，其25°C時對于人N3pGluAf3肽的Kd小于9x10:° M。在另一個優選的實施方案中，本發明提供人工程化抗N3pGluAP抗體或其抗原-結合片 段，其25°C時對于人N3pGluAf3肽的Kd小于7x10:°M。在另一個優選的實施方案中，本 發明提供人工程化抗N3pGluAP抗體或其抗原-結合片段，其25°C時對于人N3pGluA0 肽的Kd介于9x10wM和1x10wM之間。在另一個優選的實施方案中，本發明提供抗N3pGluAf3抗體或其抗原-結合片段，其25°C時對于人N3pGluAf3肽的Kd介于9x1〇10 M和1x10 10M之間。
[0008] 本發明還提供人工程化抗N3pGluAP抗體或其抗原-結合片段，其25°C時對于 人N3pGluA0肽的Kd小于1x10 9M，或小于9x10wM，或小于7x10wM，或介于9x 10wM和1x10wM之間，并能在體內減少斑塊。在再一個優選的實施方案中，本發明提 供人工程化抗N3pGluAP抗體或其抗原-結合片段，其25°C時對于人N3pGluAP肽的Kd 小于1x10 9M，或小于9x10wM，或小于7x10wM，或介于9x10wM和1x10 10M 之間，并能在體內減少斑塊，而不增加CAA相關的微出血。
[0009] 本發明也提供人工程化抗N3pGluA0抗體或其抗原-結合片段，其包含LCVR和 HCVR，其中LCDR1 是KSXASLLYSRXJTYLN(SEQIDNO: 51)，LCDR2 是AVSKLX4S(SEQID NO: 52)，LCDR3 是VQGTHYPFT(SEQIDNO: 5)，HCDR1 是GYX5FTX6YYIN(SEQIDNO: 53)， HCDR2 是WINPGSGNTKYNEKFKG(SEQIDNO: 8)，HCDR3 是EGX7TVY(SEQIDNO: 54)，其中Xi 是S或T，乂2是Q或R，X3是G或S，X4是D或G，X5是D或T，X6是R或D，X7是I、T、E或V。
[0010] 本發明提供人工程化抗N3pGluA0抗體或其抗原-結合片段，其包含輕鏈可變 區（LCVR)和重鏈可變區（HCVR)，其中所述LCVR包含IXDR1、IXDR2、IXDR3多肽，HCVR包含 HCDR1、HCDR2、HCDR3 多肽，其選自： a) LCDR1 是KSSQSLLYSRGKTYLN(SEQIDNO: 3)，LCDR2 是AVSKLDS(SEQIDN0: 4)， LCDR3 是VQGTHYPFT(SEQIDNO: 5)，HCDR1 是GYDFTRYYIN(SEQIDNO: 6)，HCDR2 是 WINPGSGNTKYNEKFKG(SEQIDNO: 8)，HCDR3 是EGITVY(SEQIDNO: 9); b) LCDR1 是KSSQSLLYSRGKTYLN(SEQIDNO: 3)，LCDR2 是AVSKLDS(SEQIDNO: 4)， LCDR3 是VQGTHYPFT(SEQIDNO: 5)，HCDR1 是GYTFTRYYIN(SEQIDNO: 7)，HCDR2 是 WINPGSGNTKYNEKFKG(SEQIDNO: 8)，HCDR3 是EGITVY(SEQIDNO: 10); c) LCDR1 是KSSQSLLYSRGKTYLN(SEQIDNO: 3)，LCDR2 是AVSKLDS(SEQIDNO: 4)， LCDR3 是VQGTHYPFT(SEQIDNO: 5)，HCDR1 是GYTFTDYYIN(SEQIDNO: 40)，HCDR2 是 WINPGSGNTKYNEKFKG(SEQIDNO: 8)，HCDR3 是EGETVY(SEQIDNO: 41); d) LCDR1 是KSSQSLLYSRGKTYLN(SEQIDNO: 3)，LCDR2是AVSKLGS(SEQIDNO: 35)， LCDR3 是VQGTHYPFT(SEQIDNO: 5)，HCDR1 是GYTFTRYYIN(SEQIDNO: 7)，HCDR2 是 WINPGSGNTKYNEKFKG(SEQIDNO: 8)，HCDR3 是EGITVY(SEQIDNO: 10);和 e) LCDR1 是KSTRSLLYSRSKTYLN(SEQIDNO: 45)，LCDR2是AVSKLDS(SEQIDNO: 4)， LCDR3 是VQGTHYPFT(SEQIDNO: 5)，HCDR1 是GYTFTDYYIN(SEQIDNO: 40)，HCDR2 是 WINPGSGNTKYNEKFKG(SEQIDNO: 8)，HCDR3 是EGVTVY(SEQIDNO: 46)。
[0011] 在一個實施方案中，本發明提供人工程化抗N3pGluA0抗體或其抗原-結合片 段，其包含LCVR和HCVR，其中LCDR1 是SEQIDNO: 3，LCDR2 是SEQIDNO: 4，LCDR3 是 SEQIDNO: 5,HCDR1 是SEQIDNO: 6,HCDR2 是SEQIDNO: 8,HCDR3 是SEQIDNO: 9。 在一個實施方案中，本發明提供人工程化抗N3pGluAP抗體或其抗原-結合片段，其包含 LCVR和HCVR，其中LCDR1 是SEQIDN0: 3,LCDR2 是SEQIDN0: 4,LCDR3 是SEQIDN0: 5，HCDR1 是SEQIDNO: 7，HCDR2 是SEQIDNO: 8，HCDR3 是SEQIDNO: 10。在一個優選的 實施方案中，本發明提供人工程化抗N3pGluA0抗體或其抗原-結合片段，其包含LCVR和 HCVR，其中LCDR1 是SEQIDNO: 3，LCDR2 是SEQIDNO: 4，LCDR3 是SEQIDNO: 5，HCDR1 是SEQIDNO: 40，HCDR2 是SEQIDNO: 8，HCDR3 是SEQIDNO: 41。在一個優選的實施方 案中，本發明提供人工程化抗N3pGluA0抗體或其抗原-結合片段，其包含LCVR和HCVR， 其中LCDR1 是SEQIDNO: 3,LCDR2 是SEQIDNO: 35,LCDR3 是SEQIDNO: 5,HCDR1 是 SEQIDNO: 7,HCDR2 是SEQIDNO: 8,HCDR3 是SEQIDNO: 10。在一個優選的實施方案 中，本發明提供人工程化抗N3pGluA0抗體或其抗原-結合片段，其包含LCVR和HCVR，其 中LCDR1 是SEQIDNO: 45，LCDR2 是SEQIDNO: 4，LCDR3 是SEQIDNO: 5，HCDR1 是SEQ IDNO: 40，HCDR2 是SEQIDNO: 8，HCDR3 是SEQIDNO: 46。
[0012] 在另一個實施方案中，本發明提供人工程化抗N3pGluA0抗體或其抗原-結合片 段，其包含輕鏈可變區（LCVR)和重鏈可變區（HCVR)，其中所述LCVR和HCVR是選自以下的 多肽： a. SEQIDN0: 11 的 LCVR和 SEQIDN0: 12 的HCVR; b. SEQIDNO: 11 的 LCVR和 SEQIDNO: 13 的HCVR; c. SEQIDNO: 11 的 LCVR和 SEQIDNO: 42 的HCVR; d. SEQIDNO: 36 的 LCVR和 SEQIDNO: 37 的HCVR;和 e. SEQIDNO: 47 的 LCVR和 SEQIDNO: 48 的HCVR〇
[0013] 在一個實施方案中，本發明提供抗N3pGluA0單克隆抗體或其抗原-結合片段， 其包含SEQIDN0: 11的LCVR和SEQIDN0: 12的HCVR。在一個實施方案中，本發明提供 抗N3pGluAf3單克隆抗體或