一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于水產品精深加工技術領域，尤其涉及一種提高純度與提取率，去除苦腥味、提高口感、利于人體吸收的金槍魚魚骨膠原蛋白源砸螯合膠原肽的制備方法。
【背景技術】
[0002]金槍魚(Tunas)又叫鮪魚、吞拿魚，屬鱸形目鯖科，作為一種深海魚類，金槍魚不僅肉味鮮美，而且營養價值非常高，富含蛋白質，不飽和脂肪酸和維生素，以純天然，營養價值高而享譽國際市場。金槍魚的主要加工種類有藍鰭金槍魚，長鰭金槍魚，黃鰭金槍魚和大眼金槍魚。浙江省是我國金槍魚加工中心，擁有全國最大的金槍魚加工基地，金槍魚除了鮮銷夕卜，其加工產品的附加值非常高，一般經過冷凍處理用于制作壽司及罐裝食品。金槍魚在加工過程中占總重量25-30%的魚骨多數加工成魚骨粉或者作為廢棄物丟掉，浪費了寶貴的漁業資源。
[0003]膠原肽以其在醫藥、保健品、食品和化妝品等應用上的獨特功效被越來越多的消費者所青睞，使其成為食品行業和保健品行業、日化行業所競相關注的焦點。砸有抗癌作用、抗氧化作用，能夠增強人體免疫力，科學界研究發現，血砸水平的高低與癌的發生息息相關。大量的調查資料說明，一個地區食物和土壤中砸含量的高低與癌癥的發病率有直接關系，例如:此地區的食物和土壤中的砸含量高，癌癥的發病率和死亡率就低，反之，這個地區的癌癥發病率和死亡率就高，事實說明砸與癌癥的發生有著密切關系。同時科學界也認識到砸具有預防癌癥作用，是人體微量元素的“防癌之王”。
【發明內容】
[0004]本發明的目的在于為了解決金槍魚在加工過程中占總重量25-30%的魚骨多數加工成魚骨粉或者作為廢棄物丟掉，浪費了寶貴的漁業資源的缺陷而提供一種提高純度與提取率，去除苦腥味、提高口感、利于人體吸收的金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法。
[0005]為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案:
一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:
a)清理金槍魚魚骨上面的魚肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的顆粒，將魚骨顆粒浸入浸泡液中，溫度45-55°C，浸泡時間3-6h，撈出瀝干后超微粉粹至粒徑5-10 μ m的魚骨粉末，-10°C下保存備用；
b)將步驟a)得到的魚骨粉末加入至l-3mol/L的乙酸溶液中，并加熱至55_65°C，超聲震蕩3-5h，13000-15000r/min離心15min后取上清液，加入添加劑，靜置2_4h后15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在_20°C下保存10_12h，得到魚骨膠原蛋白；
c)向步驟c)得到的魚骨膠原蛋白中加入去離子水，調節PH至1.3-2.3，加入復合酶A，酶解反應l_2h后滅酶活，然后調節pH至7.5-8.5，加入復合酶B，酶解反應5_6h，得到酶解產物；
d)將步驟c)得到的酶解產物采用2200Da超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于2200Da部分，得到超濾酶解液；玻璃吸附柱中裝填質量比為4:3的活性炭與納米銀，超濾酶解液以100-120mL/min的流速進行循環層析，層析次數5_15次，然后以12000_15000r/min離心2-4min，收集上清液，噴霧干燥得到金槍魚魚骨膠原蛋白肽。
[0006]在本技術方案中，本發明以金槍魚魚骨為原材料，原料來源廣，工藝步驟簡單，克服了膠原蛋白傳統工藝缺點產品的生產周期長、酶解液除雜不徹底、成品具有苦腥味、口感差、產品分子量分布廣，不利于人體吸收的缺點，本發明的制備方法生產周期短，得率高，產品純度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人體吸收。
[0007]作為優選，步驟a)中浸泡液由以下重量份的原料組成:橘子皮45-50份、山楂20-25份、胡蘿卜14-26份、野菊花1-5份、茶葉30-40份、殼聚糖15-18份、海藻酸鈉12-15份與水200-350份，魚骨顆粒與浸泡液的質量比為1:10。在本技術方案中，浸泡液主要是為了去除苦腥味。
[0008]作為優選，步驟b)中添加劑由以下重量份的原料組成:食鹽3-5份、果糖5-7份、富砸酵母3-10份、天冬酰胺10-15份、蛋氨酸12-15份，添加劑的加入量為魚骨粉末質量的4-6倍，魚骨粉末與乙酸溶液的料液比為Ig:40mLo在本技術方案中，砸有抗癌作用、抗氧化作用，能夠增強人體免疫力，科學界研究發現，血砸水平的高低與癌的發生息息相關。大量的調查資料說明，一個地區食物和土壤中砸含量的高低與癌癥的發病率有直接關系，例如:此地區的食物和土壤中的砸含量高，癌癥的發病率和死亡率就低，反之，這個地區的癌癥發病率和死亡率就高，事實說明砸與癌癥的發生有著密切關系。同時科學界也認識到砸具有預防癌癥作用，是人體微量元素的“防癌之王”。
[0009]作為優選，步驟d)中活性炭的粒度為400目、比表面積1450 m2。
[0010]作為優選，循環層析時在外部施加磁場，磁場的強度為0.2-1.8T。
[0011]作為優選，步驟c)中復合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質量比為1:1.2，復合酶B為風味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物，質量比為2.7:1，復合酶A的加入量為金槍魚漿料重量的0.2-0.7%，復合酶B的加入量為第一次得到的上清液質量的0.5-0.9%。
[0012]作為優選，浸泡液制備時，先將水加熱至65°C，加入橘子皮、山楂、胡蘿卜、野菊花與茶葉，繼續加熱至水沸騰5次后降溫到45-55°C，然后加入殼聚糖與海藻酸鈉而制得。
[0013]作為優選，步驟b)中超聲波功率為55_65kw。
[0014]本發明的有益效果是:本發明的制備方法生產周期短，得率高，產品純度高，去除了苦腥味，口感好，并利于人體吸收；為補砸保健食品與藥物開發提供了一種技術支持，同時也為金槍魚魚骨的高值化利用提供了一條新思路。
【具體實施方式】
[0015]以下結合具體實施例，對本發明作進一步的解釋:
若未特指，其工藝為現有工藝；本發明所用原料均可從市場購得。
[0016]富砸酵母購自武漢能仁醫藥化工有限公司；胰蛋白酶，胃蛋白酶購自國藥集團化學試劑有限公司；風味蛋白酶、菠蘿蛋白酶購自廣西南寧龐博生物工程有限公司。
[0017]實施例1
一種金槍魚魚骨膠原蛋白肽的制備方法，所述制備方法包括以下步驟:
a)清理金槍魚魚骨上面的魚肉及污物后清洗、干燥，粗粉碎至2-3cm的顆粒，將魚骨顆粒浸入浸泡液中，溫度45°C，浸泡時間3h，撈出瀝干后超微粉粹至粒徑5-10 μπι的魚骨粉末，-10°C下保存備用；其中，浸泡液由以下重量份的原料組成:橘子皮45份、山楂20份、胡蘿卜14份、野菊花I份、茶葉30份、殼聚糖15份、海藻酸鈉12份與水200份，魚骨顆粒與浸泡液的質量比為1:10 ;浸泡液制備時，先將水加熱至65°C，加入橘子皮、山楂、胡蘿卜、野菊花與茶葉，繼續加熱至水沸騰5次后降溫到45°C，然后加入殼聚糖與海藻酸鈉而制得；
b)將步驟a)得到的魚骨粉末加入至lmol/L的乙酸溶液中，并加熱至55°C，超聲震蕩3h，13000r/min離心15min后取上清液，加入添加劑，靜置2h后15000r/min離心15min得到沉淀物，沉淀物干燥后在-20°C下保存10h，得到魚骨膠原蛋白；其中，添加劑由以下重量份的原料組成:食鹽3份、果糖5份、富砸酵母3份、天冬酰胺10份、蛋氨酸12份，添加劑的加入量為魚骨粉末質量的4倍，魚骨粉末與乙酸溶液的料液比為Ig:40mL ;超聲波功率為55kw ；
c)向步驟c)得到的魚骨膠原蛋白中加入去離子水，調節pH至1.3，加入復合酶A，酶解反應Ih后滅酶活，然后調節pH至7.5，加入復合酶B，酶解反應5h，得到酶解產物；其中，復合酶A為胃蛋白酶與胰蛋白酶的混合物，質量比為1:1.2，復合酶B為風味蛋白酶與菠蘿蛋白酶的混合物，質量比為2.7:1，復合酶A的加入量為金槍魚漿料重量的0.2%，復合酶B的加入量為第一次得到的上清液質量的0.5% ;
d)將步驟c)得到的酶解產物采用2200Da超濾膜進行超濾處理，收集分子量小于2200Da部分，得到超濾酶解液；玻璃吸附柱中裝填質量比為4:3的活性炭與納米銀，超濾酶解液以100mL/min的流速進行循環層析，層析次數5次，然后以12000r/min離心2min，收集上清液，噴霧干燥得到金槍魚魚骨膠原蛋白肽。其中，活性炭的粒度為400目、比表面積1450 m2 ;循環層析時在外部施加磁場，磁場的強度為0.2T。金槍魚魚骨膠原蛋白肽的得率92%，純度 75%。
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