一種pk細胞培養基的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物醫藥領域，尤其涉及一種無血清培養基。
【背景技術】
[0002] PK(豬腎）細胞培養基是指不需要添加血清就可以維持細胞在體外長時間生長和 繁殖的合成培養基，由多種氨基酸、維生素、微量元素以及無機化合物組成，為動物細胞提 供最優化的生長環境。PK細胞培養基生產屬于生物醫藥行業的基礎產品。隨著生物制藥和 生物醫療行業技術的更新換代，細胞培養技術也在不斷進化，血清用量逐漸減少直至停止 使用血清培養動物細胞。生產企業需要不斷創新技術，開發高質量PK細胞培養基產品滿足 下游客戶需求。如今市場上PK細胞培養基用料較復雜，成本較高。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的在于提供一種PK細胞培養基，以解決上述技術問題。
[0004] 本發明所解決的技術問題可以采用以下技術方案來實現：
[0005] -種PK細胞培養基，其特征在于，以終濃度計，配方包括：4_羥乙基哌嗪乙磺酸 3000mg/L~4000mg/L、氣化納 6000mg/L~7000mg/L、D-(+)-葡萄糖 3000mg/L~4000mg/ L、碳酸氫鈉1000mg/L~2000mg/L、還原型谷胱甘肽0? 01mg/L~10mg/L、梓檬酸鐵銨 0? 001mg/L~10mg/L和尿啼啶 0? 01mg/L-10mg/L。
[0006] 本發明在配方中加入了所述4-羥乙基哌嗪乙磺酸和所述碳酸氫鈉充當緩沖劑能 夠維持培養基內PH值的恒定。所述4-羥乙基哌嗪乙磺酸為緩沖劑，所述D- (+)-葡萄糖在 培養基中起到還原劑的作用。所述氯化鈉的作用為維持培養基內的滲透壓。本發明優化了 傳統一種PK細胞培養基的配方，節約了成產成本，更適宜動物細胞的生長，提高細胞培養 的效率。本發明適用于VER0,PK15,MAC145細胞，適用性強。
[0007] 所述配方包括所述4-羥乙基哌嗪乙磺酸3500mg/L~3600mg/L、所述氯化鈉 6900mg/L~7000mg/L、所述D_(+)_ 葡萄糖 3100mg/L~3200mg/L、所述碳酸氫鈉1000 mg/ L~1300mg/L、還原型谷胱甘肽0? 01mg/L~lmg/L、梓檬酸鐵銨0? 01mg/L~lmg/L和尿啼 啶0? 01mg/L-lmg/L;所述配方中還包括：葉酸2mg/L~3mg/L、煙酰胺2mg/L~3mg/L、甘氨 酸 10mg/L~20mg/L、氯化鎂 20mg/L~30mg/L、氯化|丐 100mg/L~200mg/L和核黃素 0? 2mg/ L~0? 5mg/L〇
[0008] 本發明通過在配方中加入葉酸和核黃素能促進細胞的分裂和再生。煙酰胺可促進 生物氧化過程和組織新陳代謝。
[0009] 所述配方中還包括硫酸銅五水合物0? 001mg/L~0? 002mg/L、生物素0? 003mg/L~ 0? 004mg/L、亞油酸0? 04mg/L~0? 05mg/L、硝酸鐵九水合物0?lmg/L~0? 2mg/L和硫辛酸 0.lmg/L~0. 2mg/L。所述生物素促進脂肪和蛋白質正常代謝。
[0010] 所述配方中還包括氯化鉀300mg/L~400mg/L、胸苷0? 3mg/L~0? 4mg/L、硫酸亞 鐵七水合物0. 4mg/L~0. 5mg/L、硫酸鋅七水合物0. 4mg/L~0. 5mg/L、維生素B12為0. 6mg/ L~0. 7mg/L和鹽酸吡咳醇2mg/L~3mg/L。所述胸苷在培養基中充當藥物中間體，所述維 生素B12起到促進細胞再生的作用，所述鹽酸吡哆醇刺激白細胞的生長，是形成血紅蛋白 所需要的物質。
[0011] 所述配方中還包括鹽酸硫胺2mg/L~3mg/L、泛酸媽2mg/L~3mg/L、L-丙氨酸 4mg/L~5mg/L、L-天冬氨酸6mg/L~7mg/L、L-谷氨酸7mg/L~8mg/L和L-天冬酰胺一 水合物7mg/L~8mg/L。泛酸鈣和L-谷氨酸在培養基中參與蛋白質、脂肪和糖類的新城代 謝，促進氧化過程；L-丙氨酸為培養基提供養分。
[0012] 所述配方中還包括氯化膽堿8mg/L~9mg/L、L-色氨酸9mg/L~10mg/L、內消旋肌 醇 12mg/L~13mg/L、L-甲硫氨酸 17mg/L~18mg/L、L-脯氨酸 17mg/L~18mg/L和L-半 胱氨酸鹽酸鹽一水合物17mg/L~18mg/L。L-脯氨酸促進蛋白質的合成。
[0013] 所述配方中還包括L-絲氨酸26mg/L~27mg/L、L-胱氨酸二鹽酸鹽31mg/L~ 32mg/L、一水合組氨酸鹽酸鹽31mg/L~32mg/L、L-苯丙氨酸35mg/L~36mg/L、硫酸鎂 48mg/L~49mg/L和L-繳氨酸52mg/L~53mg/L。所述硫酸鎂促進培養基中糖和蛋白質的 代謝。
[0014] 所述配方中還包括L-蘇氨酸53mg/L~54mg/L、L-異亮氨酸54mg/L~55mg/L、 丙酮酸鈉55mg/L~56mg/L、L_酪氨酸二鈉鹽二水合物55mg/L~56mg/L、L_亮氨酸59mg/ L~60mg/L、磷酸二氫鈉一水合物62mg/L~63mg/L和磷酸氫二鈉71mg/L~72mg/L。所述 磷酸氫二鈉在培養基中起到中和劑的作用。
[0015] 所述配方中還包括L-賴氨酸鹽酸鹽91mg/L~92mg/L、L-鹽酸精氨酸147mg/L~ 148mg/L、L-谷氨酰胺 360mg/L~370mg/L、碘化鉀 0? 000001mg/L~0? 001mg/L、氯化亞錫 0? 000001mg/L~0? 001mg/L和硝酸銀0? 000001mg/L~0? 001mg/L。所述碘化鉀在培養基 中起到穩定劑的作用，穩定培養基中的化學平衡，所述氯化亞錫在培養基中起到還原劑的 作用。
[0016] 所述配方中還包括溴化鉀0? 000001mg/L~0? 001mg/L、二氧化鍺0? 00001mg/L~ 0? 01mg/L、硫酸鎳 0? 00001mg/L~0? 01mg/L、氯化鉻 0? 00001mg/L~0? 01mg/L、氯化錳 0? 00001mg/L~0? 01mg/L和氯化銣0? 00001mg/L~0? 01mg/L。所述二氧化鍺、所述硫酸鎳 和所述氯化鉻在培養基中起到催化劑的作用。
[0017] 所述配方中還包括偏釩酸鈉0. 00001mg/L~0. 01mg/L、三氯化鋁0.OOOOlmg/ L~0? 01mg/L、氟化鈉 0? 0001mg/L~0?lmg/L、氯化錦 0? 0001mg/L~0?lmg/L、氯化鈷 0? 0001mg/L~0?lmg/L和氯氧化錯0? 0001mg/L~0?lmg/L。所述偏f凡酸鈉、三氯化錯、氯 化鈷和氯氧化鋯在培養基中起到催化劑的作用。
[0018] 所述配方中余量為蒸餾水。
[0019] 作為一種優選方案，一種PK細胞培養基的配方如下：
[0020]
[0033] 其中，D-(+)-葡萄糖別名為D-無水葡萄糖、D-葡糖、a-D-葡萄糖、D-(+)-葡萄 糖（無水）、右旋糖。
【具體實施方式】
[0034] 為了使本發明實現的技術手段、創作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面進 一步闡述本發明。
[0035] 一種PK細胞培養基，以終濃度計，配方包括：4_羥乙基哌嗪乙磺酸3000mg/L~ 4000mg/L、氯化鈉 6000mg/L~7000mg/L、D_(+)_ 葡萄糖 3000mg/L~4000mg/L、碳酸氫 鈉1000mg/L~2000mg/L、還原型谷胱甘肽0? 01mg/L~10mg/L、梓檬酸鐵銨0? 001mg/L~ 10mg/L和尿啼啶0. 01mg/L-10mg/L。本發明在配方中加入了 4-輕乙基哌嗪乙磺酸和碳酸氫 鈉充當緩沖劑能夠維持培養基內PH值的恒定。4-羥乙基哌嗪乙磺酸為緩沖劑，D-(+)_葡 萄糖在培養基中起到還原劑的作用。氯化鈉的作用為維持培養基內的滲透壓。本發明優 化了傳統一種PK細胞培養基的配方，節約了成產成本，更適宜動物細胞的生長，提高細胞 培養的效率。本發明適用于VER0，PK15，MAC145細胞，適用性強。配方包括4-羥乙基哌嗪 乙橫酸 3500mg/L~3600mg/L、氣化納 6900mg/L~7000mg/L、D_(+)_ 葡萄糖 3100mg/L~ 3200mg/L、碳酸氫鈉1000mg/L~1300mg/L、還原型谷胱甘肽0? 01mg/L~lmg/L、梓檬酸鐵 銨0? 01mg/L~lmg/L和尿啼啶0? 01mg/L-lmg/L;配方中還包括：葉酸2mg/L~3mg/L、煙酰 胺 2mg/L~3mg/L、甘氨酸 10mg/L~20mg/L、氯化鎂 20mg/L~30mg/L、氯化|丐 100mg/L~ 200mg/L和核黃素 0? 2mg/L~0? 5mg/L。
[0036] 配方中還包括硫酸銅五水合物0? 001mg/L~0? 002mg/L、生物素0? 003