一種核桃經酶解制備的多肽原料及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物醫藥技術領域，特別涉及一種核桃經酶解制備的多肽原料及其應 用。
【背景技術】
[0002] 引起記憶退化的原因有三種：老化引起的記憶退化，壓力等引起的記憶衰退，先天 性或者機械損傷引起的記憶損傷。現如今，社會壓力越來越大，人們的記憶衰退日顯突出， 使得更多的科研工作者將目光投向對記憶的改善方面。
[0003] 現階段研究中多數學者將改善記憶放在中草藥中活性物質的提取和研究，該法涉 及工藝復雜和有機試劑的殘留，容易引入安全問題。另一個研究熱點就是卵磷脂和多不飽 和脂肪酸深海魚油等等，這些物質原料來源困難，成本昂貴，限制其工業化生產和推廣。近 年來，人們對健康食品的需求更加迫切，使得科研工作者將目光投向于具有生理功能的食 源性蛋白肽，如奧地利依比威大藥廠以豬腦為原料，結合酸水解和酶水解制備得到85%氨 基酸和15%短肽的混合物一一腦活素，將其用于臨床治療老年癡呆癥中，具有明顯的治療 效果。但是腦活素是一種注射藥物，價格昂貴且使用不方便，使其不適用于普通人群對記憶 改善的需求。因此，目前亟待解決的是尋求一種，安全，普遍，高效易于制備的改善記憶肽。
[0004] 生物活性肽是蛋白質中20種天然氨基酸以不同組成和排列方式構成的線性或環 形肽類的總稱，是源于蛋白質的功能性化合物。生命活動中的細胞分化、神經激素遞質調 節、免疫調節等都與生物活性肽有一定的相關性。如今，對生物活性肽的研究已經涉及了非 常廣泛的方面，例如抗氧化肽，抗菌肽，免疫肽、降血壓肽等。目前生物活性肽的制備方法主 要是蛋白質水解法，分為化學水解和生物酶水解，生物酶解法因具有生產條件溫和，水解過 程可控，肽得率高以及安全的優勢，逐漸取代了傳統的化學法，成為制備生物活性肽的常用 方法。
[0005] 核桃（Juglans regia L)又名胡桃、弟桃，屬胡桃科胡桃屬植物，是一種營養價值 和經濟價值都很高的珍貴果木。作為一種經濟樹種，核桃在我國的栽培歷史悠久，分布比較 廣泛，尤其是在云南、四川、新疆等西南和西北地區種植較多。核桃也是一種高能食品，每 100克核桃可提供631kcal能量，其蛋白質和脂類占整個核桃仁重量84%以上，其中脂類占 60%左右。核桃蛋白由四種蛋白質構成，分別為清蛋白，球蛋白，醇溶蛋白和谷蛋白，分別占 核桃蛋白總量的6. 81%，17. 57%，5. 33%和70. 11%。研究表明，植物蛋白不僅資源豐富， 價格低廉，與動物蛋白相比，氨基酸組成更加平衡，必需氨基酸含量較高，且不含膽固醇。在 核桃中含有18種氨基酸，其中有8種必需氨基酸，精氨酸和谷氨酸含量都相當高，是一種 優質的蛋白資源。此外，在所有補腦食品中，核桃自古以來就是"健腦益智"的最佳補品，但 人們一直利用的是核桃油，那核桃蛋白也是否擁有益智的作用？有研究表明核桃蛋白也是 一種制備改善記憶的優質蛋白原料，可以增強大腦活動，增強記憶力，對青少年用腦過度、 中老年記憶衰退的防治具有很好的效果。但由于柏中含有大量的纖維素，且在提取油脂的 過程中，造成一定的蛋白質變性，極大增加了利用核桃蛋白制備改善記憶肽的工藝難度。
[0006] 因此，以核桃柏為原料，高效提取核桃中的蛋白質，再進行改善記憶肽的提取和制 備，具有較大的經濟和社會意義。
【發明內容】
[0007] 有鑒于此，本發明提供一種核桃經酶解制備的多肽原料及其應用。本發明制得的 具有改善記憶功效的核桃蛋白肽可以用于制備改善記憶保健品及藥物。可單獨使用或與其 他具有改善記憶作用的中草藥復配按照常規制劑工藝制成保健食品。
[0008] 為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：
[0009] 本發明提供了一種多肽，其由如下步驟制備獲得：
[0010] 步驟1 :取核桃與水混合后研磨，經第一酸堿調節劑調整pH值至8. 0~9. 0,攪 拌、離心，過濾收集濾液；取所述濾液與水解酶混合后酶解，經第二酸堿調節劑調整pH值至 4. 0~4. 2,攪拌、離心，過濾收集濾渣，經醇沉、水洗，獲得核桃蛋白；
[0011] 步驟2 :取步驟1制備獲得的所述核桃蛋白與水混合，經Alcalase 2. 4L蛋白酶和 復合蛋白酶在50-55 °C的條件下酶解至水解度8-12%，滅酶，離心，過濾收集濾液，獲得核 桃蛋白酶解液；
[0012] 步驟3 :取步驟2制備獲得的所述核桃蛋白酶解液過篩，經lOOOODa的超濾膜過 濾后收集透過液；將所述透過液再經l〇〇〇Da的超濾膜過濾，收集截留液，獲得分子量在 1000-lOOOODa 的核桃肽。
[0013] 在本發明的一些具體實施方案中，所述核桃可以為可以為核桃植物果實或核桃植 物果實獲得的核桃柏。
[0014] 在本發明的一些具體實施方案中，多肽的制備方法步驟1中水解酶包括a-淀粉 酶和/或纖維素酶。
[0015] 在本發明的一些具體實施方案中，以步驟1制備獲得的所述核桃蛋白的質量為 計算基準，Alcalase 2. 4L蛋白酶的加入量為2000-3000U/g蛋白，復合蛋白酶的加入量為 1200-2500U/g 蛋白。
[0016] 在本發明的一些具體實施方案中，多肽的制備方法步驟1中所述a-淀粉酶的添 加量為核桃蛋白質量的1 %~2% (w/w)，所述纖維素酶的添加量為核桃質量的0. 5%~ 1.0% (w/w) 〇
[0017] 在本發明的一些具體實施方案中，多肽的制備方法步驟1中所述酶解的條件為在 50-55°C 下攪拌 120-180min。
[0018] 在本發明的一些具體實施方案中，多肽的制備方法步驟1中所述醇沉采用的醇為 體積濃度為45-60 %的乙醇水溶液。
[0019] 在本發明的一些具體實施方案中，多肽的制備方法步驟1中加入第一酸堿調節劑 之后所述攪拌、離心具體為在40-5CTC下攪拌60_90min，然后在3500r/min下離心10min。
[0020] 在本發明的一些具體實施方案中，多肽的制備方法步驟1中加入第而酸堿調節劑 之后所述攪拌、離心具體為攪拌30_60min，然后在3500r/min下離心10min。
[0021] 在本發明的一些具體實施方案中，多肽的制備方法步驟1中所述第一酸堿調節劑 為NaOH溶液，所述第二酸堿調節劑為HC1溶液。
[0022] 優選的，第一酸堿調節劑為lmol/L的NaOH溶液。
[0023] 優選的，第二酸堿調節劑為lmol/L的HC1溶液。
[0024] 在本發明的一些具體實施方案中，步驟2中所述滅酶具體為在100°C加熱15min滅 酶。
[0025] 在本發明的一些具體實施方案中，多肽的制備方法步驟1中水的加入量為核桃質 量的10~15倍；步驟2中水的加入量為核桃蛋白質量的7~10倍；步驟3所述收集截留 液后還包括真空濃縮至固形物30-40 %、噴霧干燥的步驟。
[0026] 本發明還提供了所述多肽在制備預防和/或治療記憶退化的藥物、食品和/或保 健品中的應用。
[0027] 在本發明的一些具體實施方案中，多肽的應用中所述藥物、食品和/或保健品的 劑型為口服液、膠囊劑、片劑、粉劑或顆粒劑。
[0028] 本發明相對于現有技術具有如下的優點及效果：
[0029] (1)本發明采用堿溶酸沉技術結合生物酶解技術，降解堿溶物中的多糖，一方面釋 放多糖結合的蛋白質，另一方面降低體系中的黏度，提高酸沉蛋白的提取率；利用乙醇溶液 清洗酸沉蛋白，可達到除油脫色的效果，且可對蛋白質進行適度變性，有利于后期酶解的進 行。
[0030] (2)本發明采用多酶協同水解，富集對記憶有改善作用的絲氨酸，賴氨酸等氨基 酸，提高成品多肽原料中的目標氨基酸含量，加之核桃蛋白中谷氨酸含量較高，可起到穩定 大腦內谷氨酸含量的作用。
[0031] (3)本發明采用兩級超濾膜分離核桃蛋白酶解產物，一方面可以高效分離肽，富集 分子量在l〇〇〇-l〇〇〇〇Da之間的肽，同時也達到了濃縮目標肽的目的，簡化了生產工藝的流 程。
[0032] (4)本發明工藝操作簡單、生產成本低、沒有任何污染、蛋白回收率高，所得改善記 憶肽的記憶改善活性強，可廣泛應用于食品領域中。
【附圖說明】
[0033] 為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現 有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。