1.5 %和 2. 0%共6個水平的生物氮素替代魚粉，觀察隨著生物氮素配比在配方中的變化對大觀霉 素產量的影響，最后確定當生物氮素添加量為1.5 %時，大觀霉素產量最高，達到8854U/ mL，即得優化組方三。
[0028] 進一步優選的：組方四的優化方法如下：參照配方2和配方3的過程中花生餅粉 和生物氮素各自對大觀霉素的影響，用組合培養基進行發酵，大觀霉素產量達9273U/mL， 即得優化組方四。
[0029] 進一步優選的：所述培養基的發酵菌株為鏈霉菌，所述鏈霉菌為經過紫外和氯化 鋰復合誘變的鏈霉菌突變株DC15-01。
[0030] 實驗菌種為壯觀鏈霉菌（Streptomyces spectabilis)DC15_01，其保藏號 CGMCC N0. 6221，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為北京市朝陽 區北辰西路1號院3號，保藏日期為2012年06月14日。
[0031] (一）確定常規培養基的最適實施例1 :在常規培養基（口服葡萄糖1. 0-2. 0%、 玉米淀粉4. 0-6. 0 %、魚粉0. 0-2. 0 %、酵母粉0. 5-1. 5 %、磷酸二氫鉀0. 05-0. 25 %、氯化鉀 0.01-0. 2%、硫酸銨 0? 1-1.0%、巴比妥 0.01-0. 05%、碳酸鈣 0? 1-1.0%，pH6. 5-7.0)的基 礎上，選擇葡萄糖和玉米淀粉為碳源，魚粉和酵母粉為氮源，以磷酸二氫鉀為無機鹽，通過 響應面優化實驗，觀察大觀霉素的產量，進行常規培養基配方選擇。
[0032] 發酵條件為：750mL三角瓶中裝液量80mL，接種量10%，在轉速220r/min，溫度為 28 °C的恒溫搖床中培養103h，測定大觀霉素的含量。
[0033] 響應面優化實驗完成后，確定常規的培養基實施例1各組分最適配比為：口服葡 萄糖1. 5 %、玉米淀粉5. 0 %、魚粉2. 0 %、酵母粉1. 2 %、磷酸二氫鉀0. 05 %、氯化鉀0. 2 %、 硫酸銨0. 5%、巴比妥0. 05%、碳酸鈣1. 0%，其余為水，pH6. 5-7. 0。
[0034] 用實施例1進行發酵，大觀霉素產量為8040U/mL。
[0035] (二）確定花生餅粉培養基的最適實施例2 :在實施例1的基礎上，以花生餅粉 部分替代魚粉，確定花生餅粉的最適添加量，分別以〇. 1 %、〇. 3 %、0. 5 %、1. 0 %、1. 5 %和 2. 0%共6個水平的花生餅粉替代魚粉，觀察隨著花生餅粉配比在配方中的變化對大觀霉 素產量的影響，最后確定當花生餅粉添加量為1.0 %時，大觀霉素產量最高，達到8625U/ mL〇
[0036] 因此，實施例2各組分的配比為：口服葡萄糖1. 5%、玉米淀粉5. 0%、魚粉1. 0%、 花生餅粉1. 0 %、酵母粉1. 2 %、磷酸二氫鉀0. 05 %、氯化鉀0. 2 %、硫酸銨0. 5 %、巴比妥 0? 05%、碳酸鈣 1. 0%，其余為水，pH6. 5-7. 0。
[0037] (三）確定生物氮素培養基的最適實施例3 :在實施例1的基礎上，以生物氮素 部分替代魚粉，確定生物氮素的最適添加量，分別以〇. l%、〇. 3%、0. 5%、1. 0%、1. 5%和 2. 0%共6個水平的生物氮素替代魚粉，觀察隨著生物氮素配比在配方中的變化對大觀霉 素產量的影響，最后確定當生物氮素添加量為1.5 %時，大觀霉素產量最高，達到8854U/ mL〇
[0038] 因此，實施例3各組分的配比為：口服葡萄糖1. 5%、玉米淀粉5. 0%、魚粉0. 5%、 生物氮素1. 5%、酵母粉1. 2%、磷酸二氫鉀0. 05%、氯化鉀0. 2%、硫酸銨0. 5%、巴比妥 0? 05%、碳酸鈣 1. 0%，其余為水，pH6. 5-7. 0。
[0039] (四）確定在實施例1中同時添加花生餅粉和生物氮素培養基的最適實施例4 : 參照實施例2和實施例3的過程中花生餅粉和生物氮素各自對大觀霉素產量的影響，設計 L9(3 4)正交實驗表，4個影響因素分別為：花生餅粉（因素A)、生物氮素（因素B)、酵母粉 (因素C)、魚粉（因素D)，它們的添加水平分別如表1所示。
[0040] 表1四因素三水平L9 (34)正交實驗表 [0041 ]
[0042] 從實驗結果可知，用AJADi組合培養基進行發酵，大觀霉素產量達9273U/mL，產 量最高，因此實施例4的最佳組分配比為：口服葡萄糖1. 5%、玉米淀粉5. 0%、花生餅粉 1. 5 %、生物氮素1. 0 %、酵母粉1 %、磷酸二氫鉀0. 05 %、氯化鉀0. 2 %、硫酸銨0. 5 %、巴比 妥0? 05%、碳酸鈣1. 0%，其余為水，pH6. 5-7. 0。
[0043] 目前常規大觀霉素的產量與本發明實施例1-4的數據對比如下標所示：
[0044]
[0045] 本發明提供的發酵培養基，大大提高了以鏈霉菌作為發酵菌株生產大觀霉素的能 力，對于大觀霉素產量的提高效果明顯，適用于大規模穩定、高效的發酵生產大觀霉素。
【主權項】
1. 一種用于提高大觀霉素產量的發酵培養基，其特征在于：該發酵培養基由下述重 量％數的物質配比而成：口服葡萄糖1. 0-3. 0%、玉米淀粉3. 0-6. 0%、魚粉0. 0-2. 0%、酵 母粉0. 5-2. 0 %、花生餅粉0-2. 0 %、生物氮素0-2. 0 %、磷酸二氫鉀0. 05-0. 25 %、氯化鉀 0. 01-0. 2%、硫酸銨0. 1-1. 0%、巴比妥0. 01-0. 05%、碳酸鈣0. 1-1. 0%，其余為水，pH值 6. 5-7. 0〇2. 根據權利要求1所述的一種用于提高大觀霉素產量的發酵培養基，其特征在于：該 發酵培養基的優化組方一由下述重量％數的物質配比而成：口服葡萄糖1. 5%、玉米淀粉 5. 0 %、魚粉2. 0 %、酵母粉1. 2 %、磷酸二氫鉀0. 05 %、氯化鉀0. 2 %、硫酸銨0. 5 %、巴比妥 0? 05%、碳酸鈣L 0%，其余為水，pH值6. 5-7. 0。3. 根據權利要求1所述的一種用于提高大觀霉素產量的發酵培養基，其特征在于：該 發酵培養基的優化組方二由下述重量％數的物質配比而成：口服葡萄糖1. 5%、玉米淀粉 5. 0%、魚粉I. 0%、花生餅粉I. 0%、酵母粉1. 2%、磷酸二氫鉀0. 05%、氯化鉀0. 2%、硫酸 銨0? 5%、巴比妥0? 05%、碳酸鈣L 0%，其余為水，pH值6. 5-7. 0。4. 根據權利要求1所述的一種用于提高大觀霉素產量的發酵培養基，其特征在于：該 發酵培養基的優化組方三由下述重量％數的物質配比而成：口服葡萄糖1. 5%、玉米淀粉 5. 0 %、魚粉0. 5 %、生物氮素1. 5 %、酵母粉1. 2 %、磷酸二氫鉀0. 05 %、氯化鉀0. 2 %、硫酸 銨0? 5%、巴比妥0? 05%、碳酸鈣L 0%，其余為水，pH值6. 5-7. 0。5. 根據權利要求1所述的一種用于提高大觀霉素產量的發酵培養基，其特征在于：該 發酵培養基的優化組方四由下述重量％數的物質配比而成：口服葡萄糖1. 5%、玉米淀粉 5. 0%、花生餅粉1. 5%、生物氮素I. 0%、酵母粉1 %、磷酸二氫鉀0. 05%、氯化鉀0. 2%、硫 酸銨0? 5%、巴比妥0? 05%、碳酸鈣L 0%，其余為水，pH值6. 5-7. 0。6. 根據權利要求2所述的一種用于提高大觀霉素產量的發酵培養基的優化方 法，其特征在于組方一的優化方法如下：在常規培養基，口服葡萄糖1.0-2. 0%、玉米 淀粉4. 0-6. 0 %、魚粉0? 0-2. 0 %、酵母粉0? 5-1. 5 %、磷酸二氫鉀0? 05-0. 25 %、氯化 鉀0. 01-0. 2%、硫酸銨0. 1-1. 0%、巴比妥0. 01-0. 05%、碳酸鈣0. 1-1. 0%，其余為水， pH6. 5-7. 0的基礎上，選擇葡萄糖和玉米淀粉為碳源，魚粉和酵母粉為氮源，以磷酸二氫鉀 為無機鹽，通過響應面優化實驗，發酵條件為：750mL三角瓶中裝液量80mL，接種量10%，在 轉速220r/min，溫度為28°C的恒溫搖床中培養103h，測定大觀霉素的含量，達到8040U/mL， 即得優化組方一。7. 根據權利要求3所述的一種用于提高大觀霉素產量的發酵培養基的優化方法，其特 征在于組方二的優化方法如下：在優化組方一的基礎上，以花生餅粉部分替代魚粉，確定花 生餅粉的最適添加量，分別以〇. l%、〇. 3%、0. 5%、1. 0%、1. 5%和2. 0%共6個水平的花生 餅粉替代魚粉，觀察隨著花生餅粉配比在配方中的變化對大觀霉素產量的影響，最后確定 當花生餅粉添加量為1. 0%時，大觀霉素產量最高，達到8625U/mL，即得優化組方二。8. 根據權利要求4所述的一種用于提高大觀霉素產量的發酵培養基的優化方法，其特 征在于組方三的優化方法如下：在優化組方一的基礎上，以生物氮素部分替代魚粉，確定生 物氮素的最適添加量，分別以〇. l%、〇. 3%、0. 5%、1. 0%、1. 5%和2. 0%共6個水平的生物 氮素替代魚粉，觀察隨著生物氮素配比在配方中的變化對大觀霉素產量的影響，最后確定 當生物氮素添加量為1. 5%時，大觀霉素產量最高，達到8854U/mL，即得優化組方三。9. 根據權利要求5所述的一種用于提高大觀霉素產量的發酵培養基的優化方法，其特 征在于組方四的優化方法如下：參照配方2和配方3的過程中花生餅粉和生物氮素各自對 大觀霉素的影響，用組合培養基進行發酵，大觀霉素產量達9273U/mL，即得優化組方四。10. 根據權利要求1所述的一種用于提高大觀霉素產量的發酵培養基，其特征在于：所 述培養基的發酵菌株為鏈霉菌，所述鏈霉菌為經過紫外和氯化鋰復合誘變的鏈霉菌突變株 DC15-01。
【專利摘要】本發明公開了一種用于提高大觀霉素產量的發酵培養基及其優化方法，涉及生物制藥領域。該發酵培養基由下述重量％數的物質配比而成：口服葡萄糖1.0-3.0％、玉米淀粉3.0-6.0％、魚粉0.0-2.0％、酵母粉0.5-2.0％、花生餅粉0-2.0％、生物氮素0-2.0％、磷酸二氫鉀0.05-0.25％、氯化鉀0.01-0.2％、硫酸銨0.1-1.0％、巴比妥0.01-0.05％、碳酸鈣0.1-1.0％，其余為水，pH值6.5-7.0。本發明所產生的有益效果在于：本發明提供的發酵培養基，大大提高了以鏈霉菌作為發酵菌株生產大觀霉素的能力，對于大觀霉素產量的提高效果明顯，適用于大規模穩定、高效的發酵生產大觀霉素。CGMCC NO.622120120614
【IPC分類】C12R1/465, C12P17/18
【公開號】CN105063121
【申請號】CN201510028116
【發明人】魏偉
【申請人】河北圣雪大成制藥有限責任公司
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2015年1月20日