一種酶提取紫錐菊多糖的方法
【專利說明】
[0001]
技術領域
[0002] 本發明涉及多糖提取領域，特別涉及一種酶提取紫錐菊多糖的方法。
[0003]
【背景技術】
[0004]紫錐菊（Echinacea)是聞名世界的免疫藥草，原產地位于北美和加拿大南部。其 為一種松果菊屬植物，該屬植物共有8個種和數個變種，目前作為藥物開發的主要有3個 品種：紫松果菊（Echinaceapurpurea，即通常所說的紫錐菊），狹葉紫錐菊（Echinacea augustifolia)和白色紫錐菊（Echinacenpallida)。研究表明紫錐菊含有多種活性成分， 咖啡酸衍生物類、多糖和糖蛋白、烷酰胺類、生物堿類、多炔類、黃酮類、揮發油、留醇等，其 活性成分已成為當前研究熱點。
[0005] 紫錐菊因具有顯著的免疫增強活性，而被稱為"天然抗生素"。在人類多種保健產 品及復方產品中都有應用。而相對紫錐菊中其他有效成分，紫錐菊多糖的研究相對較少， 研究較多的菊苣酸為主的活性成分提取過程復雜，所獲得的活性成分產品原料量少且成本 高，雖然已有關于紫錐菊提取多糖的免疫活性研究的報道，但對其從藥材到活性成分提取 的系統深入研究尤其是酶法處理提取多糖的系統研究至今未見報道，純化方法也鮮有研 究。
[0006]
【發明內容】
[0007] 為了解決紫錐菊多糖提取時間過長，以及提取率低的問題，同時還能得到較好活 性成分，本發明提供了一種酶提取紫錐菊多糖的方法。
[0008] 為了達到上述目的，本發明提供了一種酶提取紫錐菊多糖的方法，其中，提取方法 包括以下步驟： ① 藥材預處理：將紫錐菊地上部分粉碎過40-60目篩；加入脫脂溶劑，脫脂后，將脫脂 溶劑于20-80°C條件下揮干，處理后的藥材備用； ② 提取：稱取①處理得到的藥材適量，加入藥材15-25倍量的水，調pH為2-4,預熱至 40°C_60°C后，加入藥材0. 04-0. 06倍量的酶制劑，酶解時間50min-70min，80°C-100°C滅酶 10-20min，在 80°C-100°C繼續攪拌保溫l_2h; ③ 濃縮：離心，將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量I:0. 9-1. 5的濃縮液； ④ 醇沉：向濃縮液中加入3-4倍的無水乙醇，0-4°C條件下靜置24-48小時； ⑤ 洗滌：將④得到的醇沉液抽濾，得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌； ⑥ 干燥：將沉淀物用1-2倍量的水復溶，在140°C_160°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊 多糖。
[0009] 其中，所述脫脂溶劑為石油醚。
[0010] 其中，所述脫脂溶劑為石油醚、1，2-環氧丙烷、乙醚的混合，其質量份數比為： 1-2:0. 05-0. 1:0. 02-0. 08〇
[0011] 其中，所述酶制劑為果膠酶。
[0012] 其中，所述酶制劑為纖維素酶、果膠酶、蝸牛酶、植酸酶的混合，其質量份數比為： 0. 5-1:1-2:0. 1-0. 5 ：0. 05-0. 1〇
[0013] 其中，所述紫錐菊藥材來源于紫錐菊屬植物紫錐菊，取自盛花期到花后期的地上 部分。
[0014] 本發明的有益效果是：本制備方法，具有反應條件溫和、提取時間短、提取率高等 優點，并且重現性高，穩定，制備得到的紫錐菊多糖溶解性較好，外觀均一、水溶性好，并且 獲得較好的活性組分，具有較好的免疫活性。
[0015] 說明書附圖
[0016] 圖IEPPSI分子量測定譜圖； 圖2EPPSII分子量測定譜圖； 圖3EPPSIII分子量測定譜圖； 圖 4EPPSI、EPPSII、EPPSIIIXRD圖； 圖5EPPSI紅外譜圖； 圖6EPPSII紅外譜圖； 圖7EPPSIII紅外譜圖； 圖 8EPPSI的 13CNMR譜圖； 圖 9EPPSI的 13CNMR譜圖； 圖10不同濃度EPPS、EPPSI、EPPSII及EPPSIII對RAW264. 7細胞的影響； 圖11不同濃度EPPS、EPPSI、EPPSII及EPPSIII對RAW264. 7外觀形態的影響。
【具體實施方式】
[0017] 實施例1 提取方法包括以下步驟： ① 藥材預處理：將紫錐菊地上部分粉碎過60目篩；加入脫脂溶劑，脫脂后，將石油醚于 60°C條件下揮干，處理后的藥材備用； ② 提取：稱取①處理得到的藥材l〇〇g，加入1500g水，調pH為3,預熱至50°C后，加入 藥材5g果膠酶，酶解時間60min，80°C滅酶lOmin，在80°C繼續攪拌保溫l_h; ③ 濃縮：離心，將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量1 9的濃縮液； ④ 醇沉：向濃縮液中加入3倍的無水乙醇，4°C條件下靜置24小時； ⑤ 洗滌：將④得到的醇沉液抽濾，得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌； ⑥ 干燥：將沉淀物用1倍量的水復溶，在140°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊多糖。
[0018] 實施例2 提取方法包括以下步驟： ①藥材預處理：將紫錐菊地上部分粉碎過40目篩；加入石油醚，脫脂后，將石油醚于 60°C條件下揮干，處理后的藥材備用； ② 提取：稱取①處理得到的藥材l〇〇g，加入1500g水，調pH為2,預熱至40°C后，加入 藥材4g果膠酶，酶解時間50min，80°C滅酶lOmin，在80°C繼續攪拌保溫Ih; ③ 濃縮：離心，將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量1 9的濃縮液； ④ 醇沉：向濃縮液中加入3倍的無水乙醇，(TC條件下靜置24小時； ⑤ 洗滌：將④得到的醇沉液抽濾，得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌； ⑥ 干燥：將沉淀物用1倍量的水復溶，在140°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊多糖。
[0019] 實施例3 提取方法包括以下步驟： ① 藥材預處理：將紫錐菊地上部分粉碎過60目篩；加入石油醚脫脂溶劑，脫脂后，將石 油醚于60°C條件下揮干，處理后的藥材備用； ② 提取：稱取①處理得到的藥材l〇〇g，加入2500g水，調pH為4,預熱至60°C后，加入 藥材6g果膠酶，酶解時間70min，100°C滅酶20min，在100°C繼續攪拌保溫2h; ③ 濃縮：離心，將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量I:1. 5的濃縮液； ④ 醇沉：向濃縮液中加入4倍的無水乙醇，4°C條件下靜置48小時； ⑤ 洗滌：將④得到的醇沉液抽濾，得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌； ⑥ 干燥：將沉淀物用2倍量的水復溶，在160°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊多糖。
[0020] 實施例4 提取方法包括以下步驟： ① 藥材預處理：將紫錐菊地上部分粉碎過60目篩；加入脫脂溶劑，脫脂后，將脫脂溶劑 于60°C條件下揮干，處理后的藥材備用； ② 提取：稱取①處理得到的藥材l〇〇g，加入1500g水，調pH為3,預熱至60°C后，加入 藥材5g酶制劑，酶解時間60min，80°C滅酶10min，在80°C繼續攪拌保溫Ih; ③ 濃縮：離心，將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量1 :1的濃縮液； ④ 醇沉：向濃縮液中加入3倍的無水乙醇，4°C條件下靜置24小時； ⑤ 洗滌：將④得到的醇沉液抽濾，得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌； ⑥ 干燥：將沉淀物用2倍量的水復溶，在150°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊多糖。
[0021] 其中，所述脫脂溶劑為石油醚、1，2-環氧丙烷、乙醚的混合，其質量份數比為： 1-2:0. 05-0. 1:0. 02-0. 08〇
[0022] 其中，酶制劑為I. 19g纖維素酶、2. 38g果膠酶、I. 19g蝸牛酶、0. 24g植酸酶的混 合。
[0023] 實施例5 提取方法包括以下步驟： ① 藥材預處理：將紫錐菊地上部分粉碎過60目篩；加入脫脂溶劑，脫脂后，將脫脂溶劑 于60°C條件下揮干，處理后的藥材備用； ② 提取：稱取①處理得到的藥材l〇〇g，加入1500g水，調pH為3,預熱至60°C后，加入 藥材5g酶制劑，酶解時間60min，80°C滅酶10min，在80°C繼續攪拌保溫Ih; ③ 濃縮：離心，將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量1 :1的濃縮液； ④ 醇沉：向濃縮液中加入3倍的無水乙醇，4°C條件下靜置24小時； ⑤ 洗滌：將④得到的醇沉液抽濾，得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌； ⑥干燥：將沉淀物用2倍量的水復溶，在150°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊多糖。
[0024] 其中，脫脂溶劑為石油醚、1，2_環氧丙烷、乙醚的混合，其質量份數比為： 1:0. 05:0. 02。
[0025] 其中，酶制劑為I. 52g纖維素酶、3. 03g果膠酶、0. 3g蝸牛酶、0. 15g植酸酶的混合。
[0026] 實施例6 提取方法包括以下步驟： ① 藥材預處理：將紫錐菊地上部分粉碎過60目篩；加入脫脂溶劑，脫脂后，將脫脂溶劑 于60°C條件下揮干，處理后的藥材備用； ② 提取：稱取①處理得到的藥材l〇〇g，加入1500g水，調pH為3,預熱至60°C后，加入 藥材5g酶制劑，酶解時間60min，80°C滅酶lOmin，在80°C繼續攪拌保溫Ih; ③ 濃縮：離心，將上清液旋蒸減壓濃縮至生藥量1 :1的濃縮液； ④ 醇沉：向濃縮液中加入3倍的無水乙醇，4°C條件下靜置24小時； ⑤ 洗滌：將④得到的醇沉液抽濾，得到的沉淀物依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌； ⑥ 干燥：將沉淀物用2倍量的水復溶，在150°C的條件下噴霧干燥得到紫錐菊多糖。
[0027] 其中，所述脫脂溶劑為石油醚、1，2-環氧丙烷、乙醚的混合，其質量份數比為：2: 0? 1: 0? 08〇
[0028] 其中，酶制劑為I. 39g纖維素酶、2. 78g果膠酶、0. 7g蝸牛酶、0. 13g植酸酶的混合。
[0029