動物融合重組型干擾素的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明關于一種動物融合重組型千擾素,特別是關于一種具有抗動物病毒活性的 融合重組型干擾素。
【背景技術】
[0002] 千擾素最早是在1957年由英國學者AlickIsaacs和JeanLindenraann在進行流 感病毒試驗中所發現，當細胞遭受病毒感染后位即制造一種細胞激素，誘發鄰近細胞產 生抗病毒蛋白，干擾病毒的復制。該細胞激素隨后被命名為〒擾素（Interferon,IFN)。干 擾素的抗病毒作用，主要是由第一型千擾素（IFNa/|3)所負責。干擾素除了具有抗病毒 作用外,還具有抗腫瘤、促進細胞分化和免疫調節等功用。
[0003] 目前市面上的干擾素刺劑j為針對人類所開發設計肩如：用來治療人類B型與 C型肝炎等病毒性疾病以及卡波西氏瘤（Kaposi'ssarcoma,KS)、黑色素神瘤（malignant meIanoma)等腫瘤疾病上的干'擾素。
[0004] 至于經濟動物方面，以干擾素治療病毒性疾病的情形并不普遍。若無有效的疫苗 來預防某一動物病毒，當畜群受該病毒感染時，只能使用支持性療法處理，但效果往往不 彰，而造成畜牧業重大損失；因此，動物干擾素的開發，對動物保健產業而言說是刻不容 緩且極為重要的事。
【發明內容】
[0005] 本發明于第一部份中提供一種動物融合重組型干擾素。由于干擾素屬于小分子蛋 白質，在體內半衰期短（約2-8小時）且不穩定，因此本發明所提供的動物融合重組型千擾 素是將動物干擾素蛋白與半衰期較長的動物免疫球蛋白IgG…Fc片段融合，而形成較穩定 的動物融合重組型干擾素。于一較佳實施例中^該動物干擾素蛋白以及該動物免疫球蛋白 IgG-Fc片段是以由甘氨酸（Glycine,G)及絲氨酸（Serine,S)組成的連接子（linker)所連 接起來的。
[0006] 于一實施例中，該干擾素蛋白為豬干擾素a，該豬干擾素a系與如SEQID Nos: 2、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45 及 47 所示之氨基酸序列其中至 少一者具有至少80%序列同源性，較佳者,具有85%序列同源性,更佳者,具有90%序列同 源性，甚至是91 %、92 %、93 %、94 %、95 %、96 %、97 %、98 %、99 %序列同源性。于一較佳實 施例中，該豬干擾素a選自于由如SEQIDNos:2、17、19、21、23,25、27、29、3i、33、35、37、 39、41、43、45及47所示之氨基酸序列所組成之群組中至少一者。
[0007] 于一實施例中，該動物免疫球蛋白IgG-Fc片段為豬免疫球蛋白IgG-Fc片段，該豬 免疫球蛋白IgG-Fcjt段與如SEQID免8:4、49、51、53及55所示之氨基酸序列其中至少 一者具.句主少80%序列同源性，較佳者，具有85%,)予列同源性,史.彳蟲者，具.句90%,丨予列同源 性,甚至是91 %、92 %、93 %、94%、95 %、96 %、97 %、98 %、99 %序列同源性。于一較佳實施 例中，該豬免疫球蛋白IgG-Fc片段選自于由如SEQID?^:4、49、51、53及55所示之氨基 酸序列所組成之群組中至少一者。
[0008] 于一實施例中，該連接子系與如SEQIDN〇:6所示之氨基酸序列具有至少80% 序列同源性，較佳者，具有85%序列同源性，更佳者，具有90%序列同源性，甚至是91 %、 92 %、93 %、94 %、95 %、96 %、97 %、98 %、99 %序列同源性。于一較佳實施例中，該連接子具 有如SEQIDNo:6所示之氨基酸序列。
[0009] 于一實施例4v該動物融合重組型干擾素系與如SEQIDNos:8、57、59、61、63、65、 67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、109、111、 113、115、117、119、121、123、125、127、129、131'133、135、137、139、141、143、145、147、149、 15i、！53、155、i57、159、i6U163、i65、167、169U7iJ_73、175、177、：l79J_81、183、185、：l87、 189、191、193、195、197、199、201、203、205、207、209、211、213、215、217、219、221 及 223 所示 之氨基酸序列其中之一具有至少80%序列同源性；較佳者，具有85%序列同源性，更佳者， 具有90 %序列同源性，甚至是91 %、92 %、93 %、94 %、95 %、96 %、97 %、98 %、99 %序列同 源性。于一較佳實施倒中，該動物融合重組型干擾素系選自于由如SEQIDNos:8、57、59、 61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、95、97、99、101、103、105、107、 109、111、113、115、117、119、121、123、125、127、129、131、133、135、137、139、141、143、145、 147a49、15i、153、155a57、159、161、i63、165、167、169、i71、173、175、177、i79、181、183、 185、187,189、19i,193、195,197、199,20i、203,205、207,209、21i,2〗_3、215,2〗_7、219,22i及 223所示之氨基酸序列所組成之群組。
[0010] 本發明于第二部分中提供一種編碼上述動物融合重組型干擾素的多核昔酸。本發 明所提供之動物融合重組型干擾素是藉由基因轉殖技術而得。首先將編碼動物干擾素蛋白 的DNA序列，以及編碼動物免疫球蛋白IgG-Fc荇段的DNA序列選殖到表現載體系統中，形 成含有編碼動物融合重組型干擾素之DNA序列的質體，再將該質體轉殖到表現系統札經 誘導蛋白質表現后而得到動物融合重組型干擾素。
[0011] 于一較佳實施例中，除了將編碼動物干擾素蛋白的DNA序列以及編碼動物免疫球 蛋白IgG-Fc片段的MA序列選殖到表現載體系統中，并將編碼南甘氨酸及絲氨酸組成的連 接子（linker)的DNA序列選殖到該表現載體糸統屮，以連接該編碼動物十擾系；蚩白的MA 序列以及編碼動物免疫球蛋白IgG-Fc片段的DNA序列。
[0012] 于一實施例中，該編碼動物干'擾素蛋白的DNA序列系與如SEQIDNos: 1、16、18、 20、22、24、26,28、30、32、34、36、38、40、42,44 及 46 所示之DM序列其中至少一者具有至 少80 %序列同源性，較佳者，具有85 %序列同源性，更佳者，具有90 %序列同源性,甚至是 91 %、92 %、93 %、94 %、95 %、96 %、97 %、98 %、99 %序列同源性。于一較佳實施例中，該編 碼動物干擾素蛋白的DNA序列系選自于由如SEQIDNos:i、16、18、20、22、24、26、28、30、32、 34、36、38、40、42、44及46所示之DNA序列所組成之群組中至少一者。
[0013]于一實施例中，該編碼動物免疫球蛋白IgG-Fc片段的DNA序列與如SEQI!) N〇S:3、48、50、52及54所示之DNA序列其中至少一者具有至少80%序列同源性，較佳者， 具有85 %序列同源性，更佳者，具有90 %序列同源性，甚至是91 %、92 %、93 %、94 %、95 %、 96%、97%、98%、99%序列同源性。于一較佳實施例中，該編碼動物免疫球蛋白IgG-Fc片 段的DNA序列選自于由如SEQIDNos:3、48、50、52及54所示之DNA序列所組成之群組中 至少一者。
[00H] 于一實施倒中^?該編碼由甘氨酸及絲氨酸組成的連接子（linker)的DNA序列與如 SEQIDMo:5所示之DNA序列具有至少80%序列同源性，較佳者，具有85%序列同源性，更 佳者，具有 90 %序列同源性，甚至是 91 %、92 %、93 %、94%、95 %、96 %、97 %、98 %、99 % 序 列同源性。于一較佳實施例中，該編碼由甘氨酸及絲氨酸組成的連接子的DNA序列系具有 如SEQIDNo: 5所示之DNA序列。
[0015] 于一實施例4v該編碼動物融合重組型干擾素的DNA序列與如SEQ:丨DNos: 7、56、 58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、 106、108、110、112、114、116、118、120、122、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、 144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、+166、168、170、172、+174、176、178、180、 182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、 220及222所示之DNA序列具有至少80%序列同源性，較佳者，具有85%序列同源性，更 佳者，具有 90 % 序列同源性，甚至是 91 %、92 %、93 %、94%、95 %、96 %、97 %、98 %、99 % 序 列同源性。于一較佳實施倒中，該編碼動物融合重組型千擾素的DNA序列具有如SEQID Nos:7、56、58、60、62、6