節能低溫提取肝素鈉工藝的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物醫藥領域，特別是指一種節能低溫提取肝素鈉工藝。
【背景技術】
[0002]肝素是一種廣泛存在于哺乳動物組織中的黏多糖，主要存在與肥大細胞中，具有抗凝血作用，被廣泛用于手術和腦血栓、心肌梗死等的治療。肝素的分子量大約3000-37500，對商品肝素的研宄提示至少有21種分子個體。肝素鈉是肝素的鈉鹽。肝素鈉作為天然抗凝血物質受到世界各國的重視。也是我國主要的出口藥物之一。隨著研宄的深入，人們發現肝素鈉不但有抗凝、抗血栓形成和調節血脂的作用，還具有抗炎、抗過敏、抗病毒、抗癌等功能。目前，肝素鈉主要是從豬、羊小腸黏膜和牛肺、盹腸衣鹽水等中提取。研宄顯示肝素鈉是在豬小腸粘膜中含量最高。肝素鈉粗品是我國的傳統出口產品，在國際上占有重要的地位。
[0003]但是傳統的制作工藝中，需要先升溫至50-55度，保溫2小時，再加入3_4%氯化鈉，升溫到85-95度，才能將由于保溫時間短、酶解不徹底的問題克服，每提取I千克所需燃料520kg-580kg煤，所以需耗大量能源，且燃煤對環境的污染更大。
【發明內容】
[0004]本發明提出一種節能低溫提取肝素鈉工藝，能夠在酶解徹底的情況下節約大量能源。
[0005]本發明的技術方案是這樣實現的:一種節能低溫提取肝素鈉工藝，其特征包括以下步驟:
[0006]步驟a.腸粘膜的制備:在豬小腸內灌入清水，用腸衣機擠壓出小腸粘膜至粘膜池；
[0007]步驟b.腸衣泡把:將腸衣繞把形成腸衣把，接著將腸衣把放入浸泡液中第一次浸泡4-5小時，取出瀝干，使用腸衣專用鹽對腸衣把腌制處理，之后，將腸衣把放入浸泡液中二次浸泡6-8小時，第一次浸泡的浸泡液為飽和氯化鈉溶液，二次浸泡的浸泡液為鹽度15° -18°的氯化鈉溶液；第一次浸泡及二次浸泡時，每1000L浸泡液均浸泡160±5把腸衣把，收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作為下一次提取時腸衣把第一次浸泡的浸泡液；
[0008]步驟c.酶解:將豬小腸粘膜漿液加入酶解罐，豬小腸粘膜漿液為豬小腸粘膜:水=1:2.5-4的重量比的混合物，向酶解罐中加入步驟b收集的第一次浸泡的浸出液調節酶解罐中料液的鹽度至5±0.5°，控制料液的PH在8.5±0.5 ;接著按每1000L料液加1.2±0.4kg的酶量向酶解罐內加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在50-55°C，鹽度4.2±0.2。，PH 8-9，保持8-12小時；最后升溫至60_65°C，保溫50_70min得酶解液，過濾去殘澄;
[0009]步驟d.吸附:將上述過濾液打入吸附罐中，攪拌，待溫度降到58°C_60°C時加入強堿性離子交換樹脂吸附，攪拌6-10小時，吸附后放出廢液，收集過濾樹脂；
[0010]步驟e.洗脫:將收集的樹脂反復沖洗后倒入洗脫器中，加入質量分數為5% -7%的鹽水溫度保持在50°C -55°C，攪拌30-40分鐘；隨后將廢液倒掉，加入質量分數為20%的氯化鈉溶，溫度保持在50°C -55°C，攪拌3-4小時后，收集洗脫液；重復洗脫兩次，將兩次收集的洗脫液合并待用；
[0011]步驟f.將兩次收集的洗脫液過濾移入沉淀罐中，邊攪拌邊加入質量分數為80% -85%的乙醇，調PH值至7-8，攪勻密封沉淀12小時，虹吸上層清液用于回收乙醇，收集沉淀物待用；
[0012]步驟g.脫水干燥:將上述沉淀物濾干脫水，放入烘箱干燥后即得肝素鈉粗品。
[0013]作為優選，所述酶解中粘膜與2709堿性蛋白酶的重量比為1000: I。
[0014]作為優選，所述吸附中樹脂的添加量按每根豬小腸加入20-30克樹脂的比例添加。
[0015]作為優選，所述步驟e中樹脂與加入的質量分數為5% -7%鹽水的重量比為I: 1.1-1.3，樹脂與加入的質量分數為20%鹽水的重量比為1: 1.2;收集完洗脫液后，再接著加入質量分數為20%的鹽水，溫度保持在50°C -55°C，攪拌30-40分鐘后，收集洗脫液做高濃度鹽水循環使用。
[0016]作為優選，所述步驟f沉淀脫鹽中攪拌加入預冷過的乙醇；沉淀脫鹽中洗脫液與乙醇的體積比為1: 1.8-2.2。
[0017]作為優選，所述步驟g的脫水干燥中烘箱的溫度為80°C -90°C，干燥時間為6-8小時。
[0018]與現有技術相比，本發明的優點在于:通過適長保溫時間8-10小時，因蛋白酶在50-55度溫度中酶活力最強，酶不易失活，酶解更徹底，保溫后只需升溫到60-65度，這樣就更節約燃料。
【具體實施方式】
[0019]下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。
[0020]實施例1:
[0021]在豬小腸內灌入清水，用腸衣機擠壓出小腸粘膜至粘膜池；將腸衣繞把形成腸衣把，接著將腸衣把放入浸泡液中第一次浸泡4小時，取出瀝干，使用腸衣專用鹽對腸衣把腌制處理，之后，將腸衣把放入浸泡液中二次浸泡8小時，第一次浸泡的浸泡液為飽和氯化鈉溶液，二次浸泡的浸泡液為鹽度15°的氯化鈉溶液；第一次浸泡及二次浸泡時，每1000L浸泡液浸泡155把腸衣把，收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作為下一次提取時腸衣把第一次浸泡的浸泡液；將豬小腸粘膜漿液加入酶解罐，豬小腸粘膜漿液為豬小腸粘膜:水=1:2.5的重量比的混合物，向酶解罐中加入收集的第一次浸泡的浸出液調節酶解罐中料液的鹽度至4.5°，控制料液的PH在8 ;接著按每1000L料液加0.8kg的酶量向酶解罐內加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在50°C，鹽度4°，PH為8保持12小時；最后升溫至60°C，保溫70min得酶解液，過濾去殘渣；將上述過濾液打入吸附罐中，攪拌，待溫度降到58°C時加入強堿性離子交換樹脂吸附，攪拌10小時，吸附后放出廢液，收集過濾樹脂；將收集的樹脂反復沖洗后倒入洗脫器中，加入質量分數為5%的鹽水溫度保持在55°C，攪拌30分鐘；隨后將廢液倒掉，加入質量分數為20%的氯化鈉溶，溫度保持在55°C，攪拌3小時后，收集洗脫液；重復洗脫兩次，將兩次收集的洗脫液合并待用；將兩次收集的洗脫液過濾移入沉淀罐中，邊攪拌邊加入質量分數為80 %的乙醇，調PH值至7，攪勻密封沉淀12小時，虹吸上層清液用于回收乙醇，收集沉淀物待用；將上述沉淀物濾干脫水，放入烘箱干燥后即得肝素鈉粗品。經測算，每提取I千克肝素鈉粗品所需燃煤350kg。
[0022]實施例2:
[0023]在豬小腸內灌入清水，用腸衣機擠壓出小腸粘膜至粘膜池；將腸衣繞把形成腸衣把，接著將腸衣把放入浸泡液中第一次浸泡4.5小時，取出瀝干，使用腸衣專用鹽對腸衣把腌制處理，之后，將腸衣把放入浸泡液中二次浸泡7小時，第一次浸泡的浸泡液為飽和氯化鈉溶液，二次浸泡的浸泡液為鹽度16°的氯化鈉溶液；第一次浸泡及二次浸泡時，每1000L浸泡液均浸泡160把腸衣把，收集第一次浸泡的浸出液待用，收集二次浸泡后的浸出液作為下一次提取時腸衣把第一次浸泡的浸泡液；將豬小腸粘膜漿液加入酶解罐，豬小腸粘膜漿液為豬小腸粘膜:水=1:3的重量比的混合物，向酶解罐中加入收集的第一次浸泡的浸出液調節酶解罐中料液的鹽度至5°，控制料液的PH在8.5 ;接著按每1000L料液加1.2kg的酶量向酶解罐內加入2709堿性蛋白酶，控制料液溫度在53°C，鹽度4.2°，PH為8.5保持10小時；最后升溫至63°C，