一種嘧啶類新化合物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種具有抑制腫瘤細胞生長的嘧啶類新化合物，具有較好的水溶性， 較陽性對照藥具有安全性和有效性的優勢，可以制備成注射液用于治療腫瘤。
【背景技術】
[0002] 腫瘤是危害人類健康的嚴重疾病，腫瘤的防治工作一直是醫藥研宄領域的重點。 目前，由于工業發展中帶來的環境污染等問題，人類的生存環境質量不斷下降，造成腫瘤疾 病的發病率與致死率不斷上升。放療、化療是目前治療腫瘤的主要手段。但化療、放療在抑 制了癌細胞發育的同時也抑制了正常細胞的發育，降低了機體免疫力，導致新的并發癥。治 療腫瘤疾病的特效藥并不能令人滿意，目前臨床所用細胞毒性藥物選擇性不高，導致對正 常細胞的惡性殺傷，限制了其應用。因此，尋找新的、無創傷、無細胞毒作用的抗腫瘤藥物成 為國際醫藥領域的重要方向。
[0003] 本發明涉及一種新化合物，經過體外、體內抗腫瘤實驗證明具有較好的活性，經過 溶解性試驗證明具有較好的水溶性，安全性和有效性均優于陽性對照藥。
【發明內容】
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[0005] 本發明提供了一種抗腫瘤化合物，是一種新的化合物及其鹽，具體為下式所示式 Ia和Ib化合物或其藥學上可接受的鹽：
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[0007] 合成路線：
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[0009] 實施例1、化合物Ia和Ib的合成
[0010] 如合成路線所示：
[0011] ⑴、化合物4的合成：
[0012] 將原料2(111.(^，1.0111〇1)、硫酸鉀（17.48,0.1111〇1)和無水氯化鋰（4.28,0.1111〇1) 加入到200.0 mL苯甲醚中，控溫120~125°C，再將3,4_二苯甲酰醛-2-脫氧-2, 2-二 氟-D-呋喃核糖-1-甲磺酸酯（548. 0g，I. 2mol)和400.0 mL苯甲醚的混合液滴加至反應 瓶中，攪拌反應4h，反應畢，控溫60°C以上，慢慢加入300.0 mL乙酸乙酯，滴加220.0 mL濃 鹽酸，有大量白色固體析出，攪拌30min。過濾，濾餅再加至1000.0 mL水中，攪拌下用碳 酸氫鈉調節pH到8. 0~8. 5,然后過濾，濾餅用適量的水洗滌，濾干，真空烘箱干燥，干燥 溫度保持在65~70°C，真空度保持在0. 08~0.1 mPa，干燥6h以上，得到405. 2g化合物 4(3α/3β = 1/7. 1)，為白色固體，收率 85.7%〇 HNMR(400Hz，DMSO) :7.98-7.96(m，4H)， 7· 48-7. 46 (m，2H)，7· 38-7. 36 (m，4H)，7· 30 (d，5 = 5. 6Hz，1H)，6· 39 (s，1H)，4· 95-4. 92 (m， 1H)，4· 85-4. 83 (m，1H)，4· 50 (d，J = 5. 6Hz，1H)，4· 25-4. 22 (m，2H) ;MS (m/z) :472. 5。
[0013] (2)、化合物5的合成：
[0014] 室溫攪拌下，將化合物4(330. 0g，0.70mol)溶于700.0 mL甲醇中，滴加濃氨水 (100. 0mL，28%，15. Omol/L)，攪拌反應3h以上。反應結束后，加水700.0 mL，減壓濃縮溶液 至原來體積的1/2即可除去其中的甲醇，加入乙酸乙酯500.0 mL，充分攪拌30min。靜置分 層，分出有機層。水層再加入乙酸乙酯200.0 mL萃取，分出有機層，合并有機層，加入活性 炭脫色，過濾。濾液減壓濃縮，得殘留固體。殘留固體用200.0 mL異丙醇攪拌溶解，慢慢滴 加濃鹽酸調pH至3. 5~3. 7,溫度控制在70~75°C攪拌30min，冷卻至室溫，攪拌析晶3h 以上。過濾得白色固體，用真空烘箱干燥，溫度保持在45~50°C，真空度保持在0.08~ 0.1 mPa，干燥6h以上，得到153. 8克白色固體，為化合物5,收率82. 7%。HNMR(400Hz， DMSO) :7. 30(d，J = 5. 6Hz，1H)，6· 39(s，1H)，5· 76(d，J = 5. 6Hz，1H)，4· 12-4. 10(m，1H)， 3· 92-3. 90 (m，1H)，3· 79-3. 76 (m，2H)，2· 00 (s，2H) ;MS (m/z) :264. 2。
[0015] (3)、化合物la的合成：
[0016] 準確量取120.0 mL吡啶加入到1.0 L的帶有溫度計的三口圓底燒瓶中，冷卻至 〇_5°C，緩慢滴加92. 0克三氯氧磷，滴加的過程中控制溫度不超過10°C，滴加完畢后攪拌反 應1小時。將化合物5(131. 5g，0. 50mol)溶于150.0 mL吡啶中，然后緩慢滴加到上述反應 液中，2小時內滴加完畢，自然升溫至室溫，攪拌反應過夜。反應結束后，加入500.0 mL蒸餾 水，慢慢滴加濃鹽酸調pH至3. 0~4. 0,充分攪拌30min，抽濾，濾餅用蒸餾水洗絳，真空烘 干燥，溫度保持在45~50°C，真空度保持在0. 08~0.1 mPa，干燥6h以上，得到化合物1的 粗品，用乙醇重結晶后得到103. 2克化合物la，收率66. 6%。HNMR(400Hz，DMSO) :7. 30 (d， J = 5. 6Hz，1H)，6· 39(s，1H)，5· 76(d，J = 5. 6Hz，1H)，4· 12-4. 10(m，1H)，3· 92-3. 90(m，1H)， 3.79-3.76(m，2H)，2.00(s，2H) ;MS(m/z) :310.2。
[0017] (4)、化合物lb的合成：
[0018] 準確稱取50. 0克化合物la溶于150.0 mL乙醇中，然后將13. 6克碳酸氫鈉溶于 50.0 mL蒸餾水中，緩慢滴加到上述反應液中，1小時內滴加完畢，攪拌反應2小時。反應結 束后，減壓蒸餾除去溶劑得到固體，加入50.0 mL蒸餾水復溶，攪拌下，慢慢滴加丙酮直至有 沉淀析出，將反應液冷卻至-l〇°C，再滴加50.0 mL丙酮，充分攪拌1小時，抽濾，濾餅用丙酮 洗滌，真空烘干燥，溫度保持在45~50°C，真空度保持在0. 08~0.1 mPa，干燥2h以上，得到 40. 6 克化合物 lb，收率 72. 6%。HNMR(400Hz，DMS0) :7. 30(d，J = 5. 6Hz，1H)，6. 39(s，1H)， 5· 76 (d，J = 5. 6Hz，1H)，4· 12-4. 10 (m，1H)，3· 92-3. 90 (m，1H)，3· 79-3. 76 (m，2H)，2· 00 (s， 2H) ;MS(m/z) :348.2。
[0019] 實施例2、化合物lb的抑瘤作用比較
[0020] 建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型，模型建立后20只裸鼠隨機分成四組，每組5 只，分別給予：對照組（A組）：生理鹽水腹腔注射；(B組）：鹽酸吉西他濱（GEM)50mg/kg*d 腹腔注射，每周2次；（C組）：1b化合物50mg/kg · d，每周2次。給藥后定期觀察裸鼠的行 為及對外界刺激的反應，檢測各組裸鼠體重及皮下移植瘤體積的變化，并繪制生長曲線；28 天后處死裸鼠，測量各組腫瘤重量，計算抑瘤率，RT-PCR檢測瘤組織VEGF、Bcl-2及Bax的 mRNA表達水平，免疫組化及免疫印跡法（Westen Blot)檢測瘤組織VEGF和Caspase-3的蛋 白表達水平。CD34標記血管內皮細胞測定腫瘤的血管密度（MVD)。結果20只裸鼠實驗期 間無一只死亡，成瘤率100%。
[0021] (1)對照組、GEM組、Ib組的移植瘤體積分別為（I. 256±0. 128) cm3、 (0.898±0.142)cm3、（0.442±(X117)cm3，瘤體重量分別為（L412±0.138)g、 (0. 864±0. 112)g、（0. 512±0. 091)g，GEM組、Ib組移植瘤體積及瘤體重量較對照組 減小，其中Ib組作用最顯著，對照組、GEM組、Ib組的抑瘤率分別為：（28. 3±3. 2) %、 (48. 8±4· 2) %、（63. 7±6· 0) %。
[0022] (2) RT-PCR 顯示 GEM 組、Ib 組 VEGF mRNA 及 Bcl-2mRNA 表達下調，Bax mRNA 表達 上調，Ib組與對照和GEM組比較均有統計學意義（P0.0 5)。
[0023] (3)免疫組化及免疫印跡法（Westen Blot)顯示GEM組、Ib組VEGF蛋白表達下調， 而Caspase-3蛋白表達上調，⑶34標記血管內皮細胞測定腫瘤的血管密度（MVD)顯示GEM 組、Ib組腫瘤的血管密度（MVD)減少，Ib組與GEM組比較均有統計學意義（P0.0 5)。
[0024] 結論：SZ1501及鹽酸吉西他濱（GEM)均具有明顯的抗腫瘤作用，Ib相對于鹽酸吉 西他濱組可達到更好的作用，抑瘤作用更加明顯，可應用于胰腺癌的聯合化療。實施例3化 合物Ib的小鼠急性毒性試驗
[0025] NIH小鼠40只，19-21g，雌雄各半，隨機均衡分為兩組：給藥組與輔料對照組。給藥 組NIH小鼠尾靜脈注射給予Ib水溶液（80mg/4ml，經過預實驗后選擇的劑量），給藥容積： 0. 2ml/次/IOg體重，一日兩次，兩次給藥時間間隔為6小時，即一日給藥劑量為：800mg/ kg，輔料對照組給予等量的空白輔料（0. 1 %碳酸鈉溶液），觀察記錄給藥后小鼠急性毒性 反應及累積死亡數。