一種溶磷多環芳烴降解菌的分離培養基及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于環境修復技術領域，涉及一種溶磷多環芳烴降解菌的分離培養基及其 制備方法。
【背景技術】
[0002] 多環芳徑（Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs)是指分子中含有兩個以 上苯環的碳氫化合物。由于人類在石化工業生產和日常生活中煤炭和石化產品的大量開采 使用，含油泥砂中的多環芳烴污染物擴散到環境中，造成了多環芳烴對生態環境的污染。并 且多環芳烴難以自然降解，引起了多個國家和地區的注意，成為重點防控的優先控制污染 物之一。目前，采用微生物治理具有成本低、效果好、無二次污染等優點，因此成為各國污染 物防控研宄的重點。在含油泥砂和土壤等環境中的多環芳烴的微生物治理實踐中，往往需 要添加多環芳烴降解菌，此外還需要加入磷肥等肥料促進多環芳烴降解菌的治理效果。然 而，由于磷肥移動性差，利用率低，不僅造成磷資源的浪費還提高了含多環芳烴污染物的處 理成本。因此，亟需解決多環芳烴微生物降解過程中磷肥使用量大、利用率低導致的成本過 高的問題。
[0003] 目前，國內外在含油泥砂和土壤等環境中多環芳烴污染物生物治理過程中采用緩 釋磷肥的技術。但是該技術并沒有在根本上解決該問題。采用溶磷多環芳烴降解菌是解決 此難題的有效策略。溶磷多環芳烴降解菌在降解多環芳烴污染物的同時，可以通過向環境 中分泌有機酸等途徑溶解環境中的固定態磷，使之變為生物可利用態的磷，從而減少磷肥 使用率，降低含油泥砂等污染物處理成本。目前，國內外僅能通過溶磷菌培養基預培養，然 后將富集的菌液轉入多環芳烴培養基進行二次培養的方式獲取溶磷多環芳烴降解菌。該方 法操作復雜，獲取溶磷多環芳烴降解菌濃度低，效果差。國內外至今仍沒有針對溶磷多環芳 烴降解菌的高效分離培養方法。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的是克服現有技術的不足，針對目前含油泥砂和土壤等環境多環芳烴 微生物降解過程中磷肥使用量大、利用率低導致的成本過高的問題，提供一種溶磷多環芳 烴降解菌的分離培養基及其制備方法。
[0005] 為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：一種溶磷多環芳烴降解菌的 分離培養基，培養基包括包被物、不溶性含磷化合物、NH4N03、NaCl、MgS04、CaCl 2、FeCl#bX， 包被物、不溶性含磷化合物、NH4N03、NaCl、MgSO4、CaCl 2、FeCl3和水的質量配比的比例為：0. 01-0. 2:0. 1-2:0. 5-2:0. 5-2:0. 1-0. 5:0. 01-0. 05:0. 02-0. 1:1000。
[0006] 所述包被物、不溶性含磷化合物、NH4N03、NaCl、MgS0 4、CaCl2、FeCl3和水的質量配 比的比例為：〇· 1:1:1:1:0. 2:0. 02:0. 05:1000。
[0007] 所述包被物為海藻酸鈉、聚丙烯酰胺中的一種或兩種。
[0008] 所述不溶性含磷化合物為磷酸鈣、磷酸鐵、磷酸鋁中的一種或幾種。
[0009] 上述的溶磷多環芳烴降解菌的分離培養基的制備方法，包括以下步驟：
[0010] (1)將滅菌后的不溶性含磷化合物用包被物包被，制備得到包被的不溶性含磷化 合物；。
[0011] (2)將 NH4N03、NaCl、MgS04、CaCl2、FeCl 3和水于 120-121°c滅菌 20-25 分鐘，按照 0· 01-0. 2:0. 1-2:0. 5-2:0. 5-2:0. 1-0. 5:0. 01-0. 05:0. 02-0. 1:1000 的質量比將包被的不 溶性含磷化合物、NH4N03、NaCl、MgS04、CaCl 2、FeCl3和水混合。
[0012] 本發明以石油微生物學為理論依據，綜合環境微生物學和環境工程學的相關理論 知識，針對目前含油泥砂多環芳烴微生物降解過程中磷肥使用量大利用率低導致的成本過 高的問題，設計開發溶磷多環芳烴降解菌的分離培養基。通過實驗驗證，本發明提供的溶磷 多環芳烴降解菌的分離培養基可快速分離培養溶磷多環芳烴降解菌。此外，由于采用的不 溶性含磷化合物經過包被，培養過程中不易懸浮，培養液澄清透明，易于觀察溶磷多環芳烴 降解菌的濃度變化。
【具體實施方式】
[0013] 下面結合【具體實施方式】對本發明作進一步詳細說明：
[0014] 本發明的溶磷多環芳烴降解菌的分離培養基，培養基包括包被物、不溶性含磷化 合物、NH4N03、NaCl、MgS04、CaCl2、FeCl 3和水，包被物、不溶性含磷化合物、NH4N03、NaCl、 MgS04、CaCl2、FeCl3和水的質量配比的比例為：0· 01-0. 2:0. 1-2:0. 5-2:0. 5-2:0. 1-0. 5:0. 0 1-0. 05:0. 02-0.1 :1000 o
[0015] 所述包被物、不溶性含磷化合物、NH4N03、NaCl、MgS0 4、CaCl2、FeCl3和水的質量配 比的比例為：〇· 1:1:1:1:0. 2:0. 02:0. 05:1000。
[0016] 所述包被物為海藻酸鈉、聚丙烯酰胺中的一種或兩種。
[0017] 所述不溶性含磷化合物為磷酸鈣、磷酸鐵、磷酸鋁中的一種或幾種。
[0018] 上述的溶磷多環芳烴降解菌的分離培養基的制備方法，包括以下步驟：
[0019] (1)將滅菌后的不溶性含磷化合物用包被物包被，制備得到包被的不溶性含磷化 合物；。
[0020] (2)將 NH4N03、NaCl、MgS04、CaCl2、FeCl 3和水于 120-121°C滅菌 20-25 分鐘，按照 0· 01-0. 2:0. 1-2:0. 5-2:0. 5-2:0. 1-0. 5:0. 01-0. 05:0. 02-0. 1:1000 的質量比將包被的不 溶性含磷化合物、NH4N03、NaCl、MgS04、CaCl 2、FeCl3和水混合。
[0021] 將多環芳烴污染的含油泥砂、土壤接入該培養基，適宜溫度下搖床培養，通過目視 觀察溶磷多環芳烴降解菌的濃度變化，判斷溶磷多環芳烴降解菌的生長。
[0022] 以下通過具體實施例闡述本發明，目的在于幫助本領域的技術人員能夠更好地理 解本發明的精神實質，但不作為對本發明實施范圍的進行任何限定。
[0023] 實施例1
[0024] 將磷酸鈣、磷酸鐵、磷酸鋁用海藻酸鈉和聚丙烯酰胺試劑分別滅菌。將磷酸鈣和海 藻酸鈉充分混合，滴入氯化鈣溶液中，形成小球