三種高山鼠尾草屬植物中丹參酮類組分的前處理方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物化學(xué)及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及三種高山鼠尾草屬植物中丹參酮類組分的前處理方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鼠尾草屬L.)是唇形科最大屬，青臧尚原上主要分布二種鼠尾草種，粘毛鼠尾草roborowskii)、甘西鼠尾草(przewalskii Maxim.)及康定鼠尾草i Salvia prattii)?，F(xiàn)代研宄表明鼠尾草屬植物中的化學(xué)成分與丹參較為接近，其中具有較好生物活性的特征性成分(二萜醌類化合物)。目前，從鼠尾草屬植物中分離鑒定出的化學(xué)成分主要包括酚酸類及二萜醌類，其中丹參酮類化合物可用來增加冠狀血管流量，用于治療冠心病、心肌梗塞等。
[0003]目前，已報(bào)道從鼠尾草屬植物中分離出二萜醌類化合物包括丹參酮1、丹參酮IIA、丹參酮1&、隱丹參酮、去甲丹參酮、羥基丹參酮、二氫丹參酮、丹參醛、丹參酸甲酯、紫丹參甲素、紫丹參乙素、丹參新醌甲、丹參新醌乙、甘西鼠尾新酮、1，2-二氫丹參新醌、丹參內(nèi)酯等(陳萬生，賈鑫明，張衛(wèi)東，等.甘西鼠尾草根化學(xué)成分研宄.藥學(xué)學(xué)報(bào)，2003，38(5):354-357);從粘毛鼠尾草全草中分離得到丹參酮1、丹參酮IIAJ#、丹參酮、亞甲基丹參醌等(國家中藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草[M].第七冊(cè).上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999:190)，研宄報(bào)道主要集中于對(duì)甘西鼠尾草及粘毛鼠尾草通過柱色譜、結(jié)晶等復(fù)雜手段對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行研宄，而有關(guān)三種高山鼠尾草屬植物中丹參酮類組分前處理方法的研宄未見文獻(xiàn)報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種工藝簡單、易規(guī)?；瘜?shí)施、重復(fù)性較好、質(zhì)量穩(wěn)定可控的三種高山鼠尾草屬植物中丹參酮類組分的前處理方法。
[0005]為解決上述問題，本發(fā)明所述的三種高山鼠尾草屬植物中丹參酮類組分的前處理方法，包括以下步驟:
⑴提取:將粘毛鼠尾草、甘西鼠尾草或康定鼠尾草中的一種全草陰干、粉碎，得到粉碎后的鼠尾草植物，該粉碎后的鼠尾草植物中按Ikg:4~8L的料液比加入體積分?jǐn)?shù)為70%~95%的乙醇溶液或體積分?jǐn)?shù)為80%~100%的甲醇溶液，在60°C ~95°C提取1~3次后過濾，每次1~3h，合并得到濾液；所述濾液經(jīng)減壓干燥至膏狀，即得深紅色提取物；
⑵樹脂柱色譜富集:所述深紅色提取物中加入其質(zhì)量的10~20倍的體積分?jǐn)?shù)為30~50%的甲醇溶液溶解，并經(jīng)樹脂柱進(jìn)行分離后，分別以水溶液、體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇溶液、體積分?jǐn)?shù)為70°/『80%的甲醇溶液按2~5倍的柱體積進(jìn)行梯度洗脫，收集70°/『80%甲醇洗脫物；所述70°/『80%甲醇洗脫物經(jīng)減壓干燥即得丹參酮類組分粗品；
⑶硅膠柱色譜除雜:
所述丹參酮類組分粗品經(jīng)硅膠柱色譜分離后，用氯仿-甲醇-水的混合溶劑按3~5倍的柱體積進(jìn)行洗脫，并按每份500 mL收集餾分，采用薄層色譜檢測(cè)收集Rf值為0.7-0.9的餾分，該餾分經(jīng)減壓干燥后即得紅色粉末狀的丹參酮類組分。
[0006]所述步驟(I)、所述步驟⑵和所述步驟⑶中的減壓干燥條件均是指真空度為0.06-0.09 MPa,溫度為 50-70 °C。
[0007]所述步驟⑵中樹脂柱是指HP20SS型樹脂柱或MCI型樹脂柱。
[0008]所述步驟⑶中的娃膠柱的尺寸為30 mm ~80 mmX60 mm~100 mm。
[0009]所述步驟⑶中的氯仿-甲醇-水的混合溶劑是指氯仿、甲醇及水按9:1:0.1-8:2:
0.2的體積比混合而成。
[0010]所述步驟⑶中的薄層色譜檢測(cè)的條件是指展開劑為氯仿、甲醇及水按9:1:0.1的體積比混合而成的混合溶劑，顯色劑為體積濃度10%的濃硫酸乙醇溶液。
[0011]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):
1、本發(fā)明采用醇提，可直接將三種高山鼠尾草屬植物中水溶性生物大分子成分保留在原料中；同時(shí)，溶劑可重復(fù)回收利用。
[0012]2、本發(fā)明采用樹脂柱富集，可有效富集樣品種丹參酮類化合物，工藝簡單，易于實(shí)施；同時(shí)，樹脂柱可以再生循環(huán)使用且樹脂價(jià)格低廉。
[0013]3、本發(fā)明采用硅膠柱除雜，可直接將三種高山鼠尾草屬植物中極性成分與丹參酮類成分分開，同時(shí)除去部分強(qiáng)極性雜質(zhì)。
[0014]4、本發(fā)明原料要求不高，一般市場(chǎng)上或野生原材料即可，易于批量備料。
[0015]5、本發(fā)明回收率高、重復(fù)性較好、質(zhì)量穩(wěn)定可控，所得到的三種高山鼠尾草屬植物丹參酮類組分經(jīng)二維制備色譜進(jìn)一步分離純化及NMR碳譜、氫譜分析，依次判定主要含有丹參酮1、丹參酮IIa、隱丹參酮及其他丹參酮類化合物。
【附圖說明】
[0016]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0017]圖1為本發(fā)明丹參酮類組分的HPLC分析圖譜(254nm)。
【具體實(shí)施方式】
[0018]實(shí)施例1三種高山鼠尾草屬植物中丹參酮類組分的前處理方法，包括以下步驟: ⑴提取:將1.0 Kg粘毛鼠尾草全草陰干、粉碎，得到粉碎后的鼠尾草植物，該粉碎后的鼠尾草植物中按Ikg:4L的料液比加入體積分?jǐn)?shù)為75%的乙醇溶液，在60°C提取3次后過濾，每次3 h，合并得到濾液；濾液經(jīng)減壓干燥至膏狀，即得深紅色提取物。
[0019]其中:減壓干燥條件是指真空度為0.06 MPa，溫度為70 °C。
[0020]⑵樹脂柱色譜富集:深紅色提取物中加入其質(zhì)量的20倍的體積分?jǐn)?shù)為30%的甲醇溶液溶解，并經(jīng)樹脂柱進(jìn)行分離后，分別以水溶液、體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇溶液、體積分?jǐn)?shù)為70%的甲醇溶液按5倍的柱體積進(jìn)行梯度洗脫，收集70%甲醇洗脫物；70%甲醇洗脫物經(jīng)減壓干燥即得丹參酮類組分粗品226.3 go
[0021]其中:樹脂柱是指MCI型樹脂柱。
[0022]減壓干燥的條件是指真空度為0.06 MPa,溫度為70 V。
[0023]⑶硅膠柱色譜除雜: 丹參酮類組分粗品經(jīng)硅膠柱色譜分離后，用氯仿-甲醇-水的混合溶劑按5倍的柱體積進(jìn)行洗脫，并按每份500 mL收集餾分，采用薄層色譜檢測(cè)收集Rf值為0.7-0.9的餾分，該餾分經(jīng)減壓干燥后即得紅色粉末狀的丹參酮類組分162.3 g (圖1)。
[0024]其中:減壓干燥的條件是指真空度為0.06 MPa,溫度為70 V。
[0025]娃膠柱的尺寸為30 mmX60 mm。
[0026]氯仿-甲醇-水的混合溶劑是指氯仿、甲醇及水按9:1:0.1的體積比(mL/mL)混合而成。
[0027]薄層色譜檢測(cè)的條件是指展開劑為氯仿、甲醇及水按9:1:0.1的體積比(mL/mL)混合而成的混合溶劑，顯色劑為體積濃度10%的濃硫酸乙醇溶液。
[0028]實(shí)施例2三種高山鼠尾草屬植物中丹參酮類組分的前處理方法，包括以下步驟: ⑴提取:將5.0 Kg粘毛鼠尾草全草陰干、粉碎，得到粉碎后的鼠尾草植物，該粉碎后的鼠尾草植物中按Ikg:8L的料液比加入體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液，在95°C提取I次后過濾，每次I h，合并得到濾液；濾液經(jīng)減壓干燥至膏狀，即得深紅色提取物。
[0029]其中:減壓干燥條件是指真空度為0.09 MPa,溫度為50 V。
[0030]⑵樹脂柱色譜富集:深紅色提取物中加入其質(zhì)量的10倍的體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇溶液溶解，并經(jīng)樹脂柱進(jìn)行分離后，分別以水溶液、體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇溶液、體積分?jǐn)?shù)為80%的甲醇溶液按2倍的柱體積進(jìn)行梯度洗脫，收集80%甲醇洗脫物；80%甲醇洗脫物經(jīng)減壓干燥即得丹參酮類組分粗品1028.2 go
[0031]其中:樹脂柱是指MCI型樹脂柱。
[0032]減壓干燥的條件是指真空度為0.09 MPa,溫度為50 V。
[0033]⑶硅膠柱色譜除雜:
丹參酮類組分粗品經(jīng)硅膠柱色譜分離后，用氯仿-甲醇-水的混合溶劑按3倍的柱體積進(jìn)行洗脫，并按每份500 mL收集餾分，采用薄層色譜檢測(cè)收集Rf值為0.7-0.9的餾分，該餾分經(jīng)減壓干燥后即得紅色粉末狀的丹參酮類組分759.6 go
[0034]其中:減壓干燥的條件是指真空度為0.09 MPa,溫度為50 V。
[0035]娃膠柱的尺寸為80 mmX 100 mm。
[0036]氯仿-甲醇-水的混合溶劑是指氯仿、甲醇及水按8:2:0.2的體積比(mL/mL)混合而成。
[0037]薄層色譜檢測(cè)的條件是指展開劑為氯仿、甲醇及水按9:1:0.1的體積比(mL/mL)混合而成的混合溶劑，顯色劑為體積濃度10%的濃硫酸乙醇溶液。
[0038]實(shí)施例3三種高山鼠尾草屬植物中丹參酮類組分的前處理方法，包括以下步驟: ⑴提取:將2.0 Kg康定鼠尾草全草陰干、粉碎，得到粉碎后的鼠尾草植物，該粉碎后的鼠尾草植物中按Ikg:6L的料液比加入體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液，在80°C提取2次后過濾，每次2 h，合并得到濾液；濾液經(jīng)減壓干燥至膏狀，即得深紅色提取物。
[0039]其中:減壓干燥條件是指真空度為0.08 MPa,溫度為60 V。
[0040]⑵樹脂柱色譜富集:深紅色提取物中加入其質(zhì)量的15倍的體積分?jǐn)?shù)為40%的甲醇溶液溶解，并經(jīng)樹脂柱進(jìn)行分離后，分別以水溶液、體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇溶液、體積分?jǐn)?shù)為75%的甲醇溶液按3倍的柱體積進(jìn)行梯度洗脫，收集75%甲醇洗脫物；75%甲醇洗脫物經(jīng)減壓干燥即得丹參酮類組分粗品435.6 go
[0041]其中:樹脂柱是指HP20SS型樹脂柱。
[0042]減壓干燥的條件是指真空度為0.08 MPa,溫度為60 V。
[0043]⑶硅膠柱色譜除雜:
丹參酮類組分粗品經(jīng)硅膠柱色