皂角刺中黃烷酮骨架類化合物的提取方法及化合物的應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于天然產物提取技術領域，主要涉及一種皂角刺中黃烷酮骨架類化合物 的提取方法及化合物的應用。
【背景技術】
[0002] 皂角刺是豆科植物皂莢的干燥棘刺。傳統中醫認為皂角刺性溫，味辛，歸肝、胃經， 有消腫托毒、排膿、殺蟲之功效，常用于癰疽瘡毒初起或膿成不潰之癥以及皮癬、麻風等。不 僅如此，臨床數據已證明皂角刺具有抗癌功效，是我國中醫治療肺癌、食管癌、肝癌、胃癌和 宮頸癌等多種癌癥的常用藥之一。作用機理研宄，據文獻報道，皂角刺的乙醇提取物可以通 過抑制C0X-2表達，調節細胞周期蛋白及其激酶，p27,p53,ERK，p38MAP激酶和JNK信號靶 點等途徑，有效抑制胃癌、食管癌和肺癌等多種腫瘤細胞生長并誘導其凋亡，且對正常細胞 的毒性較小。植物化學研宄發現，皂角刺的化學成分主要有皂苷類、黃酮類、酚酸類、氨基酸 等成分。其中，部分皂苷類和黃酮類成分已被報道具有不同程度的體內外抗癌活性。盡管 如此，尚未有皂角刺中黃烷酮類成分抗腫瘤化合物的詳細報道。
【發明內容】
[0003] 本發明的目的是提供皂角刺中黃烷酮骨架類化合物的提取方法以及化合物的應 用，該方法提取分離的黃烷酮骨架類化合物具有良好的抗肝癌細胞活性，為進一步提升皂 角刺的藥用價值提供了新的科學依據，且該方法能夠使黃烷酮類化合物因得到較高的富集 盡可能多的被提取出來。
[0004] 本發明采用的技術方案是：皂角刺中黃烷酮骨架類化合物的提取方法，包括以下 步驟： 步驟一、取皂角刺原材料，室溫下陰干，粉碎，得到皂角刺粉末，備用；然后將皂角刺 粉末用85-95%乙醇進行兩次熱回流，合并每次回流所得的提取液，并置于室溫下沉淀 40-48h，過濾，減壓濃縮，得到皂角刺乙醇浸膏，備用； 步驟二、向步驟一得到的乙醇浸膏中加入其體積10-12倍的水，攪拌至浸膏溶解完全， 得到水溶液，備用；然后將水溶液依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚浸膏、乙酸乙酯 浸膏，備用； 步驟三、將步驟二得到的乙酸乙酯浸膏溶解，加硅膠拌樣，揮干溶劑，得到分離樣品， 備用；然后將重量比為1:10的乙酸乙酯和硅膠混合拌樣，裝柱，將分離樣品上柱之后依次 用體積比為10:1、8:2、6: 4、1:1、4:6和2:8的石油醚-乙酸乙酯進行洗脫，通過TLC點板分 析，得到餾分1-15,備用； 步驟四、將步驟三得到的餾分7再次進行硅膠柱色譜法分離，分別采用體積比為8:2、 4:2、1:1和2:4的環己烷-丙酮溶液梯度洗脫，得到餾分701、702、703、704和705,備用； 將餾分701在室溫下靜置，有沉淀析出，過濾，將得到的固體重結晶得到化合物1 ; 將餾分704運用Waters高效液相色譜法在示差檢測器條件下等度洗脫，得到化合物2 和化合物3 ; 將餾分705運用Waters高效液相色譜法在示差檢測器條件下等度洗脫，得到化合物 4 ； 步驟五、將步驟三得到的餾分9再次進行硅膠柱色譜法分離，依次用體積比為10:1、 8:2、6:4、1:1和4: 6的環己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑進行梯度洗脫，收集以體積比為 6:4的環己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經靜置后有黃色固體析出，然后過濾純化 后得到化合物5 ;收集以體積比為4:6的環己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經靜置 后有深黃色固體析出，然后過濾純化后得到化合物6 ; 這六個黃烷酮骨架的化合物分別被鑒定和命名為： 化合物1為5, 7, 3' -三羥基-4' -甲氧基-3a-羥-二氫黃烷酮醇； 化合物2為5, 7, 3'，4' -四羥基二氫黃烷酮醇； 化合物3為7, 5'，3' -三羥基-3〇t-二氫黃烷酮醇； 化合物4為5, 7，2'，4'-四羥基-3a_羥-二氫黃烷酮醇； 化合物5為5-甲氧基-3'，4'，7' -三羥基-二氫黃烷酮醇； 化合物6為5, 3'，4' -三甲氧基-7-羥基-二氫黃酮醇。
[0005] 以上得到的六種化合物的結構式分別為：
[0006] 進一步優化，步驟四所述餾分704等度洗脫的洗脫劑為體積比為40:60的水-甲 醇溶液。
[0007] 進一步優化，步驟四所述餾分705等度洗脫的洗脫劑為體積比為20:80的水-甲 醇溶液。
[0008] 本發明的有益效果 本發明提供的方法從皂角刺中提取分離的黃烷酮骨架類化合物，經藥效學實驗證明， 具有良好的抗肝癌細胞（HepG2)活性，為進一步提升皂角刺的藥用價值提供了新的科學依 據，并且具有重要的科學理論價值和開發應用前景。本發明的提取分離方法是在活性指導 下的有效分離，尤其適合天然微量化合物的追蹤獲取。另外本發明采用90%的乙醇溶液熱 回流提取，能夠使黃烷酮類骨架化合物高度富集后盡可能多的被提取出來，并使單體化合 物充分富集后微量的黃烷酮類單體化合物很容易獲得。本發明已經分離的黃烷酮類化合物 多具有特異性的抗肝癌細胞（HepG2)腫瘤殺傷活力，可能對皂角刺的選擇性抗癌效果起到 至關重要的物質基礎作用。
【具體實施方式】
[0009] 皂角刺中黃烷酮骨架類化合物的提取方法，包括以下步驟： 步驟一、取皂角刺原材料，室溫下陰干，粉碎，得到皂角刺粉末，備用；然后將皂角刺 粉末用85-95%乙醇進行兩次熱回流，合并每次回流所得的提取液，并置于室溫下沉淀 40_48h，過濾，減壓濃縮，得到皂角刺乙醇浸膏，備用； 步驟二、向步驟一得到的乙醇浸膏中加入其體積10-12倍的水，攪拌至浸膏溶解完全， 得到水溶液，備用；然后將水溶液分別用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚浸膏、乙酸乙酯 浸膏，備用； 步驟三、將步驟二得到的乙酸乙酯浸膏溶解，加硅膠拌樣，揮干溶劑，得到分離樣品， 備用；然后將重量比為1:10的乙酸乙酯和硅膠混合拌樣，裝柱，將分離樣品上柱之后依次 用體積比為10:1、8:2、6: 4、1:1、4:6和2:8的石油醚-乙酸乙酯進行洗脫，通過TLC點板分 析，得到餾分1-15,備用； 步驟四、將步驟三得到的餾分7再次進行硅膠柱色譜法分離，分別采用體積比為8:2、 4:2、1:1和2:4的環己烷-丙酮溶液梯度洗脫，得到餾分701、702、703、704和705,備用； 將餾分701在室溫下靜置，有沉淀析出，過濾，將得到的固體重結晶得到化合物1; 將餾分704運用Waters高效液相色譜法在示差檢測器條件下等度洗脫，洗脫劑為體積 比為40:60的水-甲醇溶液，流速8ml/min，色譜柱為250*20mmODS-AC18,柱溫20°C， 得到化合物2和化合物3 ; 將餾分705運用Waters高效液相色譜法在示差檢測器條件下等度洗脫，洗脫劑為體積 比為20:80的水-甲醇溶液，流速8ml/min，色譜柱為250*20mmODS-AC18,柱溫20°C， 得到化合物4; 步驟五、將步驟三得到的餾分9再次進行硅膠柱色譜法分離，依次用體積比為10:1、 8:2、6:4、1:1和4: 6的環己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑進行梯度洗脫，收集以體積比為 6:4的環己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經靜置后有黃色固體析出，然后過濾純化 后得到化合物5 ;收集以體積比為4:6的環己烷-乙酸乙酯溶液為洗脫劑的餾分段，經靜置 后有深黃色固體析出，然后過濾純化后得到化合物6; 這六個黃烷酮骨架類化合物分別被鑒定和命名為： 化合物1為5, 7, 3' -三羥基-4' -甲氧基-3〇t-二氫黃烷酮醇； 化合物2為5, 7, 3'，4' -四羥基二氫黃烷酮醇； 化合物3為7, 5'，3' -三羥基-3〇t_二氫黃烷酮醇； 化合物4為5, 7，2'，4' -四羥基-3〇t_二氫黃烷酮醇； 化合物5為5-甲氧基-3'，4'，7' -三羥基-二氫黃烷酮醇； 化合物6為5, 3'，4' -三甲氧基-7-羥基-二氫黃酮醇。
[0010] 以上得到的六個化合物的結構式分別為：
[0011] 以上得到的六個化合物的波普分析數據分別為：
實施例I: 皂角刺中黃烷酮骨架類化合物的提取方法，包括以下步驟： 步驟一、取皂角刺原材料，室溫下陰干，粉碎，得到皂角刺粉末，備用；然后將皂角刺粉 末用85%乙醇進行兩次熱回流，合并每次回流所得的提取液，并置于室溫下沉淀40h，過濾， 減壓濃縮，得到皂角刺乙醇浸膏，備用； 步驟二、向步驟一得到的乙醇浸膏中加入其體積10倍的水，攪拌至浸膏溶解完全，得 到水溶液，備用；然后將水溶液分別用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸 膏，備用； 步驟三、將步驟二得到的乙酸乙酯浸膏溶解，加硅膠拌樣，揮干溶劑，得到分離樣品， 備用；然后將重量比為1:10的乙酸乙酯和硅膠混合拌樣，裝柱，將分離樣品上柱之后依次 用體積比為10:1、8:2、6: 4、1:1、4:6和2:8的石油醚-乙酸乙酯進行洗脫，通過TLC點板分 析，得到餾分1-15,備用； 步驟四、將步驟三得到的餾分7再次進行硅膠柱色譜法分離，分別采用體積比為8:2、 4:2、1:1和2:4的環己烷-丙酮溶液梯度洗脫，得到餾分701、702、703、704和705,備用； 將餾分701在室溫下靜置，有沉淀析出，過濾，將得到的固體重結晶得到化合物1 ; 將餾分704運用Waters高效液相色譜法在示差檢測器條件下等度洗脫，洗脫劑為體積 比為40:60的水-甲醇溶液，流速8ml/min，色譜柱為250*20mmODS-AC18,柱溫20°C， 得到化合物2和化合物3 ; 將餾分705運用Waters高效液