沉淀，水洗沉淀2次，再次4500rpm離心1min離心收集沉淀；
[0042](3)向步驟(2)所述沉淀中加入去離子水配制成以g/mL計濃度為20% (w/v)的溶液，向所述溶液中加入蝸牛酶進行酶解，酶解條件為:溫度40°C、添加量0.01%、時間3h ；然后在80°C下處理lOmin，進行滅酶活處理，得到酶解液；
[0043](4)將所述酶解液進行200MPa微射流均質處理3次，4500rpm離心1min得到沉淀；
[0044](5)向步驟(4)所述沉淀中加入離子液體1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽，配制成以g/mL計濃度為0.5% (w/v)的溶液，充分攪拌，使葡聚糖三螺旋結構之間的強氫鍵斷裂，葡聚糖分子進行重排自組裝，得到葡聚糖-離子液體混合溶液；
[0045](6)對步驟(5)所述混合溶液進行8000rpm高速分散處理8min ；
[0046](7)向步驟(6)所述溶液中加入三倍體積乙醇進行沉淀，4500rpm離心1min收集沉淀，并用乙醇進行反復洗滌以脫除沉淀中殘留的離子液體，并進行70°C烘干處理，以脫除乙醇；
[0047](8)向步驟(7)所述沉淀中加入去離子水，配制成以g/mL計濃度為1% (w/v)的溶液，充分攪拌均勻，然后經4500rpm離心20min得到上清液；
[0048](9)對步驟(8)所述上清液進行噴霧干燥處理，即得最終酵母β -D-葡聚糖樣品。
[0049]本實施例得到的酵母β -D-葡聚糖為白色松軟的粉狀固形物，得率為8.2% (以原料計)，純度為93.6%，溶解度為88.6 %。
[0050]實施例2
[0051](I)將釀酒酵母細胞壁加入去離子水，攪拌得到懸浮液，離心洗滌至上清澄清，收集沉淀；
[0052](2)向步驟(I)所述沉淀中加入去離子水，配制成以g/mL計濃度為25% (w/v)的溶液，于95°C的條件下恒溫水浴振蕩器中抽提4h，5000rpm離心5min收集沉淀，水洗沉淀2次，再次5000rpm離心5min離心收集沉淀；
[0053](3)向步驟⑵所述沉淀中加入去離子水配制成以g/mL計濃度為15% (w/v)的溶液，向所述溶液中加入中性蛋白酶進行酶解，酶解條件為:溫度45°C、添加量0.05%、時間Ih ;然后在80°C下處理lOmin，進行滅酶活處理，得到酶解液；
[0054](4)將所述酶解液進行150MPa微射流均質處理5次，5000rpm離心5min得到沉淀；
[0055](5)向步驟(4)所述沉淀中加入離子液體1-烯丙基-3-甲基咪唑氯鹽，配制成以g/mL計濃度為2.0% (w/v)的溶液，充分攪拌，使葡聚糖三螺旋結構之間的強氫鍵斷裂，葡聚糖分子進行重排自組裝，得到葡聚糖-離子液體混合溶液；
[0056](6)對步驟(5)所述混合溶液進行1000rpm高速分散處理5min ；
[0057](7)向步驟(6)所述溶液中加入三倍體積乙醇進行沉淀，5000rpm離心5min收集沉淀，并用乙醇進行反復洗滌以脫除沉淀中殘留的離子液體，并進行70°C烘干處理，以脫除乙醇；
[0058](8)向步驟(7)所述沉淀中加入去離子水，配制成以g/mL計濃度為0.5% (w/v)的溶液，充分攪拌均勻，然后經4500rpm離心20min得到上清液；
[0059](9)對步驟(8)所述上清液進行噴霧干燥處理，即得最終酵母β -D-葡聚糖樣品。
[0060]本實施例得到的酵母β -D-葡聚糖為白色松軟的粉狀固形物，得率為8.7% (以原料計)，純度為92.7%，溶解度為87.6%。
[0061]盡管本發明已進行了一定程度的描述，明顯地，在不脫離本發明的精神和范圍的條件下，可進行各個條件的適當變化。可以理解，本發明不限于所述實施方案，而歸于權利要求的范圍，其包括所述每個因素的等同替換。
【主權項】
1.一種利用分子組裝增溶技術制備酵母β -D-葡聚糖的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟: (1)對酵母細胞壁的酶解液進行在70?200MPa下的微射流處理，然后離心得到沉淀； (2)將步驟(I)得到的沉淀用離子液體重懸后進行分散處理得到溶液；其中，所述離子液體為1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽或1-烯丙基-3-甲基咪唑氯鹽； (3)將步驟(2)得到的溶液離心后加入乙醇，離心收集沉淀； (4)將步驟(3)得到的沉淀以水重懸，然后離心取上清液； 優選地，所述方法還包括(5)將步驟(4)得到的上清液進行噴霧干燥處理，得到酵母β-D-葡聚糖粉末。2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述酵母細胞壁的酶解液是通過包括如下步驟的方法制備的: a.將酵母細胞壁與水，優選為去離子水混合得到懸浮液，然后離心收集沉淀； b.將步驟a得到的沉淀以水，優選為去離子水重懸，加熱浸提，然后離心收集沉淀； c.將步驟b得到的沉淀用水，優選為去離子水重懸，加入蝸牛酶或中性蛋白酶酶解得到酶解液。3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，在所述方法的步驟a中，優選地，所述酵母細胞與水的質量比為1:5?7 ;優選地，所述離心是以4000?5000rpm的轉速離心5?lOmin。4.如權利要求2或3所述的方法，其特征在于，在所述方法的步驟b中，所述加熱浸提的溫度為80°C?95°C;優選地，所述沉淀與水的質量比為15%?25%;優選地，所述離心是以4000?5000rpm的轉速離心5?1min。5.如權利要求2?4中任一項所述的方法，其特征在于，在所述方法的步驟c中，所述沉淀與水的質量比為1:3?20 ;優選地，所述酶解的酶添加質量為所述沉淀的質量的0.01%?0.05%，所述酶解的溫度為30?45°C，酶解時間為0.5?1.0小時。6.如權利要求1?5中任一項所述的方法，其特征在于，在所述制備方法的步驟(I)中，所述微射流處理重復3?10次。7.如權利要求1?6中任一項所述的方法，其特征在于，在所述制備方法的步驟(2)中，將步驟(I)得到的沉淀用離子液體重懸并充分攪拌均勻后進行分散處理得到溶液；優選地，在所述溶液中，以g:ml計所述沉淀與離子液體的比例為0.5 %?2.0 % ;優選地，所述分散處理是以8000?1000rpm的轉速分散處理5?8min。8.如權利要求1?7中任一項所述的方法，其特征在于，在所述制備方法的步驟(3)中，所述乙醇的體積為所述溶液體積的2?4倍；優選地，所述步驟(3)還包括以乙醇將沉淀洗滌2?3次以脫除沉淀中殘留的離子液體。9.如權利要求1?8中任一項所述的方法，其特征在于，在所述制備方法的步驟(4)中，將步驟(3)得到的沉淀以水重懸并充分攪拌均勻，然后離心取上清液；優選地，以g:ml計所述沉淀與水的比例為1:200?500 ;優選地，所述離心是以4500rpm的轉速離心20min。10.如權利要求1?9中任一項所述的方法，其特征在于，所述方法中的所述酵母細胞壁的制備方法包括以下步驟:以釀酒酵母為原料，用水洗滌后離心去除雜質，加水配制成懸浮液，加入NaCl，置于pH 5.0和55°C的條件下的恒溫水浴振蕩器中誘導自溶24h，升溫至850C，保溫15min滅酶活，離心，水洗沉淀3次。11.如權利要求1?10中任一項所述的方法制備的酵母β -D-葡聚糖。
【專利摘要】本發明提供了一種利用分子組裝增溶技術制備酵母β-D-葡聚糖的方法，包括以下步驟：(1)對酵母細胞壁的酶解液進行在70～200MPa下的微射流處理，然后離心得到沉淀；(2)將步驟(1)得到的沉淀用離子液體重懸后進行分散處理得到溶液；其中，所述離子液體為1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽或1-烯丙基-3-甲基咪唑氯鹽；(3)將步驟(2)得到的溶液離心后加入乙醇，離心收集沉淀；(4)將步驟(3)得到的沉淀以水重懸，然后離心取上清液。優選地，所述方法還包括(5)將步驟(4)得到的上清液進行噴霧干燥處理，得到酵母β-D-葡聚糖粉末。本發明所得酵母β-D-葡聚糖純度高且溶解性較好，有利于擴大其應用范圍。
【IPC分類】C08B37/02, C12N1/06
【公開號】CN104910292
【申請號】CN201510245370
【發明人】王強, 劉紅芝, 劉麗, 石愛民, 胡暉, 李亞楠, 林偉靜, 段玉權, 高潔, 劉曉永
【申請人】中國農業科學院農產品加工研究所
【公開日】2015年9月16日
【申請日】2015年5月14日