五味子木脂素單一組分的制備

五味子木脂素單一組分的制備
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種五味子木脂素單一組分的制備方法，屬于醫藥技術領域，尤其是向親油性五味子木脂素提取物中加入表面活性劑形成均一的水溶液，才可采用大孔吸附樹脂進行初步純化，然后采用ODS-A-HG或ODS-A的反相C18填料進行層析純化，用乙醇水溶液進行梯度洗脫，得到純度為98%以上的五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素單一組分。
【背景技術】
[0002]五味子(SbAisaflt/rachinensis (Turcz.) ifei77)，集酸、甜、苦、辣、咸五味于一身而得名。五味子的主要活性成分是木脂素，具有保肝、抗氧化、消炎、抗癌、抗艾滋病等功效。五味子木脂素成分不同，功效不同。在保肝抑制急性肝衰竭，增加肝糖原合成的五味子成分中，五味子醇乙效果明顯，五味子乙素次之，其它成分作用不大；五味子醇甲對中樞神經有安定作用，可治療失眠癥；五味子酚、五味子乙素對抗脂質過氧化作用明顯影響，五味子醇甲和五味子醇乙無明顯影響；五味子甲素是一個與所有目前已知的多重耐藥性逆轉劑完全不同的天然成分，可以逆轉腫瘤耐藥，然而五味子醇甲、五味子丙素和五味子乙素、五味子醇乙、五味子酚等沒有逆轉腫瘤耐藥的活性，或者活性很弱。目前國內生產的五味子木脂素主要為五味子總素和低含量的木脂素，價格低廉。用粗提物制備藥物，不能充分發揮藥物的功效，可能會出現藥效拮抗或帶來一些副作用。制備純的木脂素可以用作藥物，可以用于生物活性的實驗研宄，可以作為分析檢測的對照品，目前五味子對照品主要來源于國外進口，而且價格相當昂貴。
[0003]在五味子木脂素的分離純化報道中，申請號為200910242188.X (發明名稱:五味子單體成分的分離制備方法)和王磊等人(王磊，魏蕓，袁其朋.高速逆流法分離純化五味子中的五味子酚.北京化工大學學報:自然科學版，2009，2: 77-80.)采用高速逆流層析法分離木脂素，但要求提取物先經過硅膠柱層析純化后，再采用高速逆流層析操作，此法處理量少而且成本高。申請號為200910010631.0 (發明名稱:一種制備五味子醇甲和五味子醇乙的新工藝)采用硅膠柱層析法，硅膠柱一次上柱純化效果差，需要反復多次層析操作，多種有機溶劑梯度洗脫的方法，效率低、成本高。申請號為200710150140.7 (發明名稱:一種五味子的有效組分及其制備方法與用途)采用乙酸乙酯和乙醇的混合溶劑進行提取，將得到的浸膏乙醇溶解后直接過0DS-C18柱，95%的乙醇洗脫得到的混合物再上ZorbaxSB-C18制備色譜，水和乙腈混合液梯度洗脫，兩次的C18柱層析法，處理量少，試劑乙腈成本尚。
[0004]大孔樹脂吸附法從天然植物中分離提取活性成分，具有低的操作成本，低的溶劑消耗和容易再生的優點，已在環保、食品、醫藥等領域得到了廣泛的應用。樹脂吸附的物質都是水溶性或一定溶解度的有機物，五味子木脂素是親油性有機物，不能溶解和均勻地分散到水溶液中，容易導致樹脂床層的堵塞，不能有效地采用樹脂吸附的方法進行分離純化，如申請號200910216886.2 (發明名稱:一種富集純化五味子中五味子醇甲的方法)，及尹滟等人的報道(尹滟，劉嚴生，于葉玲，唐星.用大孔樹脂提取和純化五味子總木脂素.沈陽藥科大學學報，2007，24 (2):113-118.)。Ma 等人(Chun-hui Ma, Ting-ting Liu, LeiYang, Yuan-gang Zu, Feng-jian Yang, Chun-jian Zhao, Lin Zhang, Zhong-hua Zhang.Preparat1n of high purity biphenyl cyclooctene lignans from Schisandra extractby 1n exchange resin catalytic transformat1n combined with macroporous resinseparat1n.Journal of Chromatography B, 2011, 879(30): 3444-3451)和Caichompoo等人(Wanida Caichompoo, Qiao-yan Zhang, Ting-ting Hou, Hua-juan Gao, Lu-pingQin， Xiu-jia Zhou.0ptimizat1n of extract1n and purificat1n of activefract1ns from Schisandra chinensis (Turcz.) and its osteoblastic proliferat1nstimulating activity.Phytotherapy Research, 2009, 23(2): 289-292.)米用加入乙醇到水溶液中以增加親油性物質在水溶液中的溶解度，然后采用樹脂吸附初步純化的方法。為增加親油性物質在水相中的溶解度和分散度，需要增加乙醇的濃度，乙醇是常用的解吸劑，乙醇的存在使吸附量降低，如果降低乙醇的濃度，將增加親油性物質與溶液中雜質的聚集和沉淀。
[0005]考慮到木脂素不溶于水，乙醇不利于樹脂吸附的兩個特性，為了更好地提高木脂素的純度和利用效果，本發明采用加入表面活性劑的方法，將木脂素類親油性生物活性成分均勻分散于不含乙醇的水溶液中，得到均一穩定的溶液，然后進行大孔樹脂初步分離及純化五味子總木脂素，減輕后續層析純化操作的負荷，最后采用C18反相層析介質ODS-A-HG或ODS-A進一步純化木脂素，乙醇水溶液梯度洗脫獲得高純度的五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素單品。

【發明內容】

[0006]本發明的目的是采用廉價而應用廣泛的大孔吸附樹脂法進行初步純化，采用加入表面活性劑的方法使親油性木脂素提取物均勻分散在水溶液中，以利于樹脂的吸附操作；然后米用反相C18填料的ODS-A-HG或ODS-A層析介質對木脂素進行層析，乙醇水溶液梯度洗脫的方法得到五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素單品。
[0007]本發明技術方案所采用的生產工藝過程為:五味子果實一一烘干一一粉碎一一乙醇回流提取一一濃縮一一乙酸乙酯萃取一一濃縮一一吐溫40和水混合分散成均一水溶液一一大孔吸附樹脂初步純化一一ODS-A-HG或ODS-A層析一一梯度洗脫一一濃縮干燥木脂素單品。
[0008]具體路線是:取適量五味子果實，經干燥后，再用粉碎機粉碎成粉末，加入60%?100%乙醇水溶液回流提取2次，每次I?2