一株雨生紅球藻enn71及其培養方法與應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及微生物領域，尤其涉及一株雨生紅球藻ENN71及其培養方法與應用。
【背景技術】
[0002] 蝦青素是類胡蘿卜素的一種，為世界上最強的抗氧化劑，能夠有效清除細胞內的 自由基，減少衰老細胞的堆積，具有抗衰老、緩解運動疲勞、增強免疫力、抑制腫瘤的作用。 蝦青素分為天然蝦青素與人工合成蝦青素兩種，然而，天然蝦青素的穩定性、生物安全性及 吸收效果均優于人工蝦青素，而雨生紅球藻中的蝦青素含量可以達到1. 5-3%，被看做是天 然蝦青素的"濃縮品"，鑒于蝦青素顯著的生理功能，已被廣泛應用于醫療保健、美容護膚等 行業。
[0003] 作為天然蝦青素"濃縮品"的雨生紅球藻具有兩個生長階段：綠色游動細胞與紅色 不動孢子階段，所述紅色不動孢子階段即為蝦青素積累的階段。在生產蝦青素時，由于雨生 紅球藻的生長速度緩慢、積累蝦青素周期長，難以滿足市場對蝦青素的需求，如果能夠誘變 蝦青素的含量較高的雨生紅球藻株，縮短蝦青素的積累周期，對天然蝦青素的增產具非常 重要的意義。
【發明內容】
[0004] 本發明的主要目的在于，提供一株雨生紅球藻ENN71及其培養方法與應用，所述 雨生紅球藻ENN71生長周期短，天然蝦青素的含量高，遺傳性能穩定。
[0005] 為達到上述目的，本發明采用如下技術方案：
[0006] -方面，本發明實施例提供一株雨生紅球藻ENN71，為Haematococcus pluvialis， 保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC)，地址：北京市朝陽區北 辰西路1號院3號，郵政編碼：100101，保藏編號為CGMCC No. 5147,保藏日期為2011年8月 17日。
[0007] 本發明所獲得的雨生紅球藻ENN71具有生長周期短，天然蝦青素的含量高，性能 穩定，環境適應性強的特點。
[0008] 其中，所述雨生紅球藻ENN71蝦青素含量為所述雨生紅球藻野生株的2倍以上。
[0009] 另一方面，本發明實施例提供一種所述雨生紅球藻ENN71的培養方法，包括：將 ￡剛71藻細胞接種在8611培養基中培養，期間，光照強度為50-30(^111〇1/111 2*8，培養溫度 為 20-30 °C，pH 為 6. 5-9。
[0010] 另一方面，本發明實施例提供一種所述雨生紅球藻ENN71的蝦青素誘導方法，包 括：將處在不動孢子階段的ENN71藻種接種在缺氮的BGl 1培養基中培養3天以上，期間，光 照強度為200 ymol/m2 · s以上，培養溫度為20-35°C，pH為6. 5-9。
[0011] 另一方面，本發明實施例還提供一種所述雨生紅球藻ENN71在獲取用于誘導蝦青 素的藻種中的應用。
[0012] 其中，在相同的培養條件下，所述雨生紅球藻ENN71生長速度比雨生紅球藻野生 株提尚40%以上。
[0013] 另一方面，本發明實施例還提供一種所述雨生紅球藻ENN71在蝦青素誘導中的應 用。
[0014] 其中，對處在不動孢子階段的雨生紅球藻進行蝦青素誘導培養3天以上，所述雨 生紅球藻ENN71的蝦青素含量為所述雨生紅球藻野生株的2倍以上。
[0015] 再一方面，本發明實施例還提供一種所述雨生紅球藻ENN71在繼代培養中的應 用。
[0016] 其中，將繼代培養1年以上的所述雨生紅球藻ENN71與雨生紅球藻野生株在相同 的培養條件下培養，所述雨生紅球藻ENN71生長速度比雨生紅球藻野生株提高40 %以上， 對處在不動孢子階段的雨生紅球藻進行蝦青素誘導3天以上，所述雨生紅球藻ENN71的蝦 青素含量為所述雨生紅球藻野生株的2倍以上。
[0017] 由此可見，本發明實施例提供的一株雨生紅球藻ENN71及其培養方法與應用，所 獲得的雨生紅球藻ENN71具有生長周期短，天然蝦青素的含量高，遺傳性能穩定的特點。
【附圖說明】
[0018] 為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例描述 中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些 實施例，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些 附圖獲得其它的附圖。
[0019] 圖1為本發明實施例提供的一株雨生紅球藻ENN71與野生株ENN wt的生長速度 曲線對比圖；
[0020] 圖2為本發明實施例提供的一株雨生紅球藻ENN71與野生株ENN Wt培養第12天 對比圖；
[0021] 圖3為本發明實施例提供的另一株雨生紅球藻ENN71與野生株ENN wt培養第12 天對比圖；
[0022] 圖4為本發明實施例提供的一株雨生紅球藻ENN71繼代培養1年后與野生株ENN wt的生長速度曲線對比圖；
[0023] 圖5為本發明實施例提供的另一株雨生紅球藻ENN71繼代培養2年后與野生株 ENN wt培養第12天對比圖；
[0024] 圖6為本發明實施例提供的再一株雨生紅球藻ENN71繼代培養3年后與野生株 ENN wt培養第12天對比圖。
【具體實施方式】
[0025] 下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完 整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于 本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他 實施例，都屬于本發明保護的范圍。
[0026] 在本發明的描述中，需要理解的是，術語"中心"、"上"、"下"、"前"、"后"、"左"、 "右"、"豎直"、"水平"、"頂"、"底"、"內"、"外"等指示的方位或位置關系為基于附圖所示的 方位或位置關系，僅是為了便于描述本發明和簡化描述，而不是指示或暗示所指的裝置或 元件必須具有特定的方位、以特定的方位構造和操作，因此不能理解為對本發明的限制。在 本發明的描述中，除非另有說明，"多個"的含義是兩個或兩個以上。
[0027] -方面，本發明實施例提供一株雨生紅球藻ENN71，為Haematococcus pluvialis， 保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC)，地址：北京市朝陽區北 辰西路1號院3號，郵政編碼：100101，保藏編號為CGMCC No. 5147,保藏日期為2011年8 月17日。
[0028] 其中，所述雨生紅球藻ENN71也可以稱為雨生紅球藻突變株ENN71。
[0029] 本發明所獲得的雨生紅球藻突變株ENN71具有生長周期短，天然蝦青素的含量 高，性能穩定，環境適應性強的特點。
[0030] 其中，所述雨生紅球藻突變株ENN71蝦青素含量為所述雨生紅球藻野生株的2倍 以上。
[0031] 另一方面，本發明實施例提供一種所述雨生紅球藻突變株ENN71的培養方法，包 括：將ENN71藻細胞接種在BGll培養基中培養2-7天，期間，光照強度為50-300 μ mol/ m2 · s，培養溫度為 20-30 °C，pH 為 6. 5-9。
[0032] 其中，所述將ENN71藻細胞接種在BGll培養基中，細胞密度可以為0. 2-1. 5g/L。 在所述培養方法中，向所述培養基中通入二氧化碳與空氣的混合氣體，其中，所述二氧化碳 可以占0. 5-10%。
[0033] 需要說明的是，與所述雨生紅球藻野生株在同樣的條件下進行培養，所述雨生紅 球藻突變株ENN71生長速度比雨生紅球藻野生株提高40%以上。
[0034] 另一方面，本發明實施例提供一種所述雨生紅球藻突變株ENN71的蝦青素誘導方 法，包括：將處在不動孢子階段的ENN71藻種接種在缺氮的BGll培養基中培養3天以上，期 間，光照強度為200 ymol/m2 · s以上，培養溫度為20-35°C，pH為6. 5-9。
[0035] 其中，將處在不動孢子階段的ENN71藻種接種在缺氮的BGll培養基中，細胞密度 可以為0. 2-1. 5g/L。在所述培養方法中，向所述培養基中通入二氧化碳與空氣的混合氣體， 其中，所述二氧化碳可以占〇. 5-20 %。
[0036] 另一方面，本發明實施例還提供一種所述雨生紅球藻突變株ENN71在獲取用于誘 導蝦青素的藻種中的應用。
[0037] 誘導蝦青素之前所述雨生紅球藻突變株ENN71處于游動細胞階段，需要對所述游 動細胞進行培養以獲得用于誘導蝦青素的藻種。
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