一種提高水蛭素提取收率的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及水蛭素提取技術領域，具體為一種提高水蛭素提取收率的方法。
【背景技術】
[0002]水蛭素(hirudin)因最早從水蛭中分離得到而得名。天然水蛭素由65個氨基酸殘基組成，分子量7000道爾頓。水蛭素能同凝血酶的催化中心及纖維蛋白原結合中心發生不可逆的結合，使凝血酶失活，為目前發現的最強有力的凝血酶抑制劑。此外還有很強的抗血栓作用，對多種實驗性血栓模型有阻抑作用。水蛭素對于各種血栓疾病如靜脈血栓、彌散性血管內凝血、腦凝血、血栓靜脈炎及冠狀動脈血栓都有預防和治療效果，尤其是靜脈血栓和彌漫性血管內凝血的治療；也可用于外科手術后預防動脈血栓的形成，預防溶解血栓后或血管成形術后再栓塞；改善體外血液循環和血液透析過程，在顯微外科手術中常因為吻合處血管栓塞而導致失敗，采用水蛭素可促進傷口愈合。
[0003]工業化生產水蛭素的方法多以對水蛭活體的破壞方法獲得水蛭素，影響所得水蛭素的純度，同時對水蛭資源的供應依賴過大，尤其難以避免水蛭素生產的季節性問題。吸血類水蛭體內抗凝活性物質含量高，但吸血類水蛭在飼養過程中，同批飼養的水蛭因飼喂和捕撈時間而導致水蛭體內水蛭素含量不穩定。
[0004]利用電流對生物體腺體的刺激影響作用，直接使用直流弱電刺激活體水蛭批量提取高純度水蛭素的方式并保持水蛭的活體性狀的方法以期簡化水蛭素的生產工藝，提高產品純度，保持野生水蛭資源的重復利用，降低生產成本，克服生產的季節性障礙問題的方法，至今尚未有成功實現的報道。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供一種通過調整水蛭的攝食時間，用以改善水蛭體內水蛭素含量，并用電刺激活體水蛭提取水蛭素的方法，它能夠簡化水蛭素的生產工藝，同時保持水蛭的活體，多次提取高純度水蛭素。
[0006]為實現上述目的，本發明的技術方案如下:
一種提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步驟:
A、補喂:在捕撈前的12?54小時，補喂一次飼料；或者是在正常飼喂飼料12?54小時后進行捕攜；
B、捕撈及電刺激:在室溫下先將活體水蛭從飼養槽中提取至貯藏槽，用去離子水漂洗除其表面雜質，濾出水分，再浸入生理鹽水漂洗，添加電解質液層覆蓋，通入直流電進行刺激，收集水蛭分泌的液體，后將活體水蛭從濾槽中放回飼養槽；
C、后續處理:將收集的分泌物經過800μπι納濾膜后續處理30?180分鐘，除去80?90%的水份，添加8?15%穩定劑，減壓至0.9大氣壓下，進行噴霧干燥，獲得含800-1000AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0007]優選的，所述的步驟A中補喂采用的飼料為經冷藏并加入抗凝血劑的動物血液或者新鮮的動物血液。
[0008]優選的，所述的步驟A中正常飼喂是每周飼喂I或2次。
[0009]優選的，所述的步驟B中電解質液為0.9%的氯化鈉溶液。
[0010]優選的，所述的步驟B中電流采用直電流為3?12mA，通電時間為5?20分鐘。
[0011]優選的，所述的步驟C中的穩定劑為醫用淀粉或者0.05%海藻糖、0.02%乙酰半胱氨酸和0.05%枸杞酸鈉配的組合。
[0012]優選的，所述的步驟C中噴霧干燥的進口溫度為180?230°C，出口溫度為75?90。。。
[0013]本發明方法可采用的動物血液為脊椎動物的新鮮血液，如豬血、牛血、羊血、鴨血、雞血，優選為鴨血。
[0014]本發明的有益效果為:
1.利用合適大小的直流弱電刺激生物活體導致腺體產生分泌的特點，連續刺激活體水蛭唾液腺分泌唾液，獲得高純度水蛭素。
[0015]2.弱電刺激后的水蛭活體保持活性，可以在隔段時間后繼續進行水蛭素的提取； 3.純的水蛭唾液可以得到較高純度的水蛭素。
[0016]4.使用超濾膜除水提高有效成分濃度。
[0017]5.合適的賦形淀粉添加量和合適的溫度設定噴霧干燥技術制粉。
[0018]6.海藻糖、乙酰半膀氨酸、枸杞酸鈉的組合為保護劑，保護水蛭素混合液中抗凝血酶的生理活性的穩定性不發生變化。
[0019]7.用本發明的方法獲得的產品經檢測，產品中水蛭素中抗凝血酶的活性含量達到800 (干粉)或 1000 (液體)AT-U/g。
【具體實施方式】
[0020]下面通過具體實施例對本發明進行詳細說明。
[0021]實施例1
本發明的提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步驟:
A、補喂:在捕撈前的12小時，補喂至少一次飼料；或者是在正常飼喂飼料12小時后進行捕攜;
B、捕撈及電刺激:在室溫下先將活體水蛭從飼養槽中提取至貯藏槽，用去離子水漂洗除其表面雜質，濾出水分，再浸入生理鹽水漂洗，添加電解質液層覆蓋，通入直流電進行刺激，收集水蛭分泌的液體，后將活體水蛭從濾槽中放回飼養槽；
C、后續處理:將收集的分泌物經過800μπι納濾膜后續處理30分鐘，除去80%的水份，添加8%穩定劑，減壓至0.9大氣壓下，進行噴霧干燥，獲得含800AT-U/g的高活性抗凝血酶活性水蛭素干粉。
[0022]優選的，所述的步驟A中補喂采用的飼料為經冷藏并加入抗凝血劑的動物血液或者新鮮的動物血液。
[0023]優選的，所述的步驟A中正常飼喂是每周飼喂I次。
[0024]優選的，所述的步驟B中電解質液為0.9%的氯化鈉溶液。
[0025]優選的，所述的步驟B中電流采用直電流為3mA，通電時間為5分鐘。
[0026]優選的，所述的步驟C中的穩定劑為醫用淀粉。
[0027]優選的，所述的步驟C中噴霧干燥的進口溫度為180°C，出口溫度為75°C。
[0028]實施例2
本發明的提高水蛭素提取收率的方法，包括以下步驟:
A、補喂:在捕撈前的24小時，補喂至少一次飼料；或者是在正常飼喂飼料24小時后進行捕攜;
B、捕撈及電刺激:在室溫下先將活體水蛭從飼養槽中提取至貯藏槽，用去離子水漂洗除其表面雜質，濾出水分，再浸入生理鹽水漂洗，添加電解質液層覆蓋，通入直流電進行刺激，同時確保合適的電流強度，避免水蛭死亡，收集水蛭分泌的液體，后將活體水蛭從濾槽中放回飼養槽；
C、后續處理:將收集的分泌物經過800μ m納濾膜處理100分鐘，除去85%的水份，添