一株八丈島鏈霉菌及其應用
【技術領域】
[0001 ] 本發明涉及生物技術領域中一株八丈島鏈霉菌及其應用。
【背景技術】
[0002] 我國是一個農業大國，糧食、果蔬產量和質量關乎民生和社會穩定。全世界因為植 物病害所造成的主要農作物的經濟損失達數千億美元，而病害中的70% -80%都是由病原 真菌導致的，如導致板栗疫病的病原真菌為栗疫病菌。
[0003] 栗疫病菌（Cryphonectriaparasitica)屬于子囊菌門（Ascomycota)奠殼菌綱 (Sordariomycetes)間座殼目（Diaporthales)隱叢殼科（Cryphonectriaceae),可寄生于 歐洲板栗、美洲板栗、板栗、日本板栗、錐栗和其它櫟類。板栗苗木和結果樹都可以受到栗疫 病菌的侵染，發病后病斑迅速包圍枝、干，導致栗實產量和質量都明顯降低，嚴重時造成整 個枝條或全株枯死。栗疫病菌已成為危害板栗最嚴重的病菌。1904年，在美國紐約首次發 現栗疫病，隨后近半個世紀的時間內，全境美洲栗樹幾乎全部被其摧毀。1913年，栗疫病首 次在中國被發現，之后在中國各地均發現該病，部分地區發病嚴重。
[0004] 目前，栗疫病菌的主要防治方法為農業防治、生物防治、化學防治和綜合防治。在 意大利和法國發現了含有dsRNA的弱毒力菌株，能有效控制栗疫病菌帶來的危害；部分生 物制劑也能起到抑制作用；另外多菌靈、殺菌劑等化學藥品也能起到一定效果。
[0005] 放線菌（Actinomycete)是一類含有大量G/C的革蘭氏陽性菌，其種類繁多，在自 然界中分布廣泛，是土壤中的優勢菌群。鏈霉菌屬（Streptomyces)是放線菌目的一個屬。 放線菌含有的微生物資源可創造巨大價值，它是產生生物活性物質最多的微生物種類之 一，特別是抗生素，當前在醫療和農業方面廣泛應用的抗生素，70%來自放線菌，而80%以 上的放線菌抗生素都是由鏈霉菌（Str印tomyces)產生的。但目前還沒有利用鏈霉菌產生 抗生素抑制板栗疫病的相關報道。
【發明內容】
[0006] 本發明所要解決的技術問題是如何防治栗疫病菌（Cryphonectriaparasitica) 及其引起的板栗疫病。
[0007] 為解決上述技術問題，本發明首先提供了一株八丈島鏈霉菌。
[0008] 本發明所提供的八丈島鏈霉菌是八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis) CNA-23,其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的登記入冊編號為CGMCC No. 9497。該菌種已于2014年07月21日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生 物中心（簡稱CGMCC)。
[0009] 本發明的八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 在 高氏一號培養基上菌絲生長緩慢，包括基生菌絲和氣生菌絲，菌落表面粗糙、不規則，初期 乳白色，菌絲濃密，后期偏淺黃色，不產色素。掃描電鏡觀察顯示，菌絲表面光滑，微柔曲。
[0010] 本發明所提供的所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCC No. 9497在生產分生孢子和/或菌絲體中的應用也屬于本發明的保護范圍。
[0011] 為解決上述技術問題，本發明還提供了栗疫病菌抑制劑。
[0012] 本發明所提供的栗疫病菌抑制劑，其活性成分是所述八丈島鏈霉菌 (Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCCNo.9497 或 / 和所述八丈島鏈霉菌 (Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCCNo.9497 的代謝物。
[0013] 上述栗疫病菌抑制劑中，所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis) CNA-23CGMCCNo. 9497可為分生孢子和/或菌絲體。
[0014] 上述栗疫病菌抑制劑還可以包括載體。所述載體可為固體載體或液體載體。所述 固體載體可為礦物材料、植物材料或高分子化合物；所述礦物材料可為粘土、滑石、高嶺土、 蒙脫石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一種；所述植物材料可為玉米粉、豆粉和淀粉中 的至少一種；所述高分子化合物可為聚乙烯醇和/或聚二醇。所述液體載體可為有機溶劑、 植物油、礦物油或水；所述有機溶劑可為癸烷和/或十二烷。所述栗疫病菌抑制劑中，所述 活性成分可以以被培養的活細胞、活細胞的發酵液、細胞培養物的濾液或細胞與濾液的混 合物的形式存在。所述栗疫病菌抑制劑的劑型可為多種劑型，如液劑、乳劑、懸浮劑、粉劑、 顆粒劑、可濕性粉劑或水分散粒劑。
[0015] 根據需要，所述栗疫病菌抑制劑中還可添加表面活性劑（如吐溫20、吐溫80等）、 粘合劑、穩定劑（如抗氧化劑）、pH調節劑等。
[0016] 為解決上述技術問題，本發明還提供了制備所述栗疫病菌抑制劑的方法。
[0017] 本發明所提供的制備所述栗疫病菌抑制劑的方法，包括在胰蛋白胨大豆肉湯培養 基（實施例中的7號培養基）中培養所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis) CNA-23CGMCCNo. 9497,收集發酵液，得到栗疫病菌抑制劑。
[0018] 本發明還提供了下述1)_4)中任一種應用：
[0019] 1)所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 或 / 和所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497的代謝物在抑 制栗疫病菌中的應用；
[0020] 2)所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 或 / 和所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497的代謝物在制 備栗疫病菌抑制劑中的應用；
[0021] 3)所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 或 / 和所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497的代謝物在制 備栗疫病菌引起的植物病害抑制劑中的應用；
[0022] 4)所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 或 / 和所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497的代謝物在抑 制栗疫病菌引起的植物病害中的應用。
[0023]所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 的代謝 物可從所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCCNo. 9497 的發酵 液中獲得。所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCCNo. 9497 的 代謝物具體可按照如下方法制備，在液體培養基中培養所述八丈島鏈霉菌（Streptomyces haChij0enSiS)CNA-23CGMCCN0?9497，除去液體培養物（發酵液）中的所述八丈島鏈 霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCCNo.9497 即得到所述八丈島鏈霉菌(Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCCNo.9497 的代謝物。
[0024] 上述應用中，所述植物病害為板栗疫病。
[0025] 為了解決上述技術問題，本發明還提供了培養所述八丈島鏈霉菌（Streptomyces hachijoensis)CNA-23CGMCCNo.9497 的方法。
[0026] 本發明所提供的培養所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis) CNA-23CGMCCNo. 9497 的方法，包括將所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis) CNA-23CGMCCNo. 9497在用于培養八丈島鏈霉菌的培養基中培養的步驟。
[0027]上述培養所述八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCC No. 9497的方法，可包括在液體培養基中培養所述八丈島鏈霉菌（Streptomyces hachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497的步驟；所述液體培養基具體可為液體發酵培養基 (4號培養基）、1號培養基、2號培養基、3號培養基、5號培養基、6號培養基和7號培養基； 所述培養溫度可為26-30°C，具體可為28°C;所述培養時間可為8-10d，具體可為8d。
[0028]實驗證明，本發明的八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCC No. 9497能夠明顯抑制栗疫病菌（Cryphonectriaparasitica)孢子的發生，導致栗疫病菌 (Cryphonectriaparasitica)菌絲體脫水、畸變，具有高效的抑制作用，同時確定了不同含 量CNA-23菌株的濾液以及不同類型發酵培養基對CNA-23菌株抗栗疫病菌（Cryphonectria parasitica)效果的影響。八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA_23CGMCC No. 9497培養條件簡單、容易保存，易于工業化生產，具有良好的開發應用前景。
[0029] 保藏說明
[0030] 菌種名稱：八丈島鏈霉菌
[0031]拉丁名：Streptomyces hachijoensis
[0032]菌株編號：CNA-23
[0033] 保藏機構：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心
[0034] 保藏機構簡稱：CGMCC
[0035] 地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號
[0036] 保藏日期：2014年7月21日
[0037] 保藏中心登記入冊編號：CGMCCNo. 9497
【附圖說明】
[0038]圖 1 為八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 的菌 絲形態。
[0039]圖 2 為基于 16SrDNA序列的八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis) CNA-23CGMCCNo. 9497菌株與其它鏈霉菌構成的系統發育樹。
[0040]圖 3 為受八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 菌 株抑制的栗疫病菌（Cryphonectriaparasitica)和正常生長的栗疫病菌（Cryphonectria parasitica)的菌絲形態的電鏡照片。其中，A為對照組，B為實驗組。
[0041]圖 4 為受八丈島鏈霉菌（Streptomyceshachijoensis)CNA-23CGMCCNo. 9497 菌 株抑制的栗疫病菌（Cryphonectriaparasitica)和正常生長的栗疫病菌（Cryphonectria parasitica)的孢子的電鏡照片。其中，A為對照組，B為實驗組。
【具體實施方式】
[0042] 下面結合【具體實施方式】對本發明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡 明本發明，而不是為了限制本發明的范圍。
[0043] 下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。
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