Grk4變異體和收縮壓變化與尿鈉排泄率比值的聯合應用及方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于診斷領域，具體設及檢測GRK4變異體和收縮壓變化與尿鋼排泄率比 值的試劑聯合制備診斷鹽敏感性試劑中的應用及方法。
【背景技術】
[0002] 鹽是最重要的環境因素之一，但個體對鹽負荷或限鹽有著不同的血壓反應，根據 個體對高鹽攝入的血壓反應及滯鋼程度將其分為鹽敏感性、鹽不敏感性兩大類。敏感者在 正常人群中的檢出率從15%~42%不等；鹽敏感性個體日后發生高血壓的比例明顯高于 非鹽敏感性個體，其發生冠屯、病、腦卒中的幾率也大大增加。另外，在高血壓病人中，鹽敏感 與否直接影響治療方案的選擇，如利尿劑和巧括抗藥是治療鹽敏感性高血壓的首選藥物； 鹽不敏感性高血壓屬于鋼-容量非依賴性高血壓，血漿腎素活性正常或升高，利尿劑對該 類高血壓患者往往無效。因此，鹽敏感性人群的檢出不僅對于個體的一級預防，對于發生高 血壓、冠屯、病和腦卒中的個體治療也有一定的指導意義。
[0003] 既往檢測鹽敏感性的方法很多，急性、慢性鹽負荷法，但該些研究過于復雜，費時 臨床開展困難，實用性不高。另外，既往提出的鹽敏感性標志物也較多，包括：血漿腎素、醒 固酬、血清結合珠蛋白、內源性洋地黃物質、紅細胞膜鋼-裡反轉運速率、尿血管舒緩素、尿 多己/多己胺排泄比率、膜島素抵抗等，但該些方法在鹽敏感性、鹽不敏感性患者中存在較 大的重疊，難于成為理想的鹽敏感性標志物。因此，急需尋找新的鹽敏感性標志物。
[0004] 腎臟是人體負責鋼排泄的重要器官，腎臟的利尿、利鋼作用受到腎臟自分泌多己 胺的控制。既往的研究發現鹽敏感性高血壓病人和動物腎臟尿鋼排泄功能障礙，多己胺受 體介導的利尿作用下降。由于多己胺受體功能受到GRK4的調節，GRK4在人體存在A142V、 A486V、R6化等變異體，該些變異體存在提高了G服4的活性，導致多己胺受體功能下降。而 GRK4是否可作為鹽敏感鑒定指標未見報道。
【發明內容】
[0005] 有鑒于此，本發明的目的之一在于提供檢測G服4變異體和收縮壓變化與尿鋼排 泄率比值的試劑聯合制備診斷鹽敏感性試劑中的應用；本發明的目的之二在于提供W收縮 壓變化與尿鋼排泄率比值聯合GRK4變異體為標志物診斷鹽敏感性的方法。
[0006] 為實現上述發明目的，本發明提供如下技術方案：
[0007] 1、檢測G服4變異體和收縮壓變化與尿鋼排泄率比值的試劑聯合制備診斷鹽敏感 性試劑中的應用。
[000引 2、G服4變異體和收縮壓變化與尿鋼排泄率比值聯合診斷鹽敏感性的方法，包括如 下步驟：
[0009]a.測定收縮壓變化與尿鋼排泄率比值ASBP/UNa+;讓受試者30分鐘內口服生理 鹽水1500mU然后測定口服生理鹽水前后收縮壓變化，記為ASBP;同時測定受試者的尿鋼 排泄率，記為UNa+，然后用ASBP除WUNa+計算收縮壓變化與尿鋼排泄率比值ASBP/UNa+;
[0010] b.G服4的變異體檢測：提取受試者基因組DM,然后wSEQIDNO. 1和SEQID NO. 2所示序列為引物進行PCR擴增，PCR產物進行電泳判斷G服4是否為變異體；
[0011] C.根據步驟a計算的收縮壓變化與尿鋼排泄率比值ASBP/UNa+和步驟b檢測的 GRK4是否為變異體判斷受試者為的鹽敏感性。
[001引優選的，步驟b中，所述PCR擴增的條件如下，95°C預變性5min;95°C變性45s， 65°C退火40s，72°C延伸45s，35個循環，最后72°C延伸5min。
[0013] 優選的，步驟c中，判斷鹽敏感性的判定標準為：
[0014]ASBP/UNa+> 9.38mmHg?min/ y mol,G服4 為變異體判斷為鹽敏感性；
[0015]ASBP/UNa+在 4. 41-9.38mmHg?min/ y mol,G服4 為變異體判斷為鹽敏感性；
[0016]ASBP/UNa+《4. 41mmHg?min/ y mol,G服4為野生型判斷為非鹽敏感性；
[0017]ASBP/UNa+在4. 41-9. 38mmHg?min/ymol,G服4為野生型判斷為非鹽敏感性； [001引ASBP/UNa> 9. 38mmHg?min/ymol,G服4為野生型判斷為中間型；
[0019]ASBP/UNa+《4. 41mmHg?min/ymol，G服4為變異體判斷為中間型。
[0020] 本發明的有益效果在于：本發明公開了聯合尿鋼排泄和G服4變異體做為診斷 鹽敏感性的新指標，通過實驗證明，利用急性口服鹽水負荷前后收縮壓變化（ASB巧 與尿鋼排泄率扣rinarysodiumexcretion(UNa+))之比可W初步用于鑒定鹽敏感 性及非鹽敏感性，ASBP/UNa+ > 9. 38mmHg?min/ymo考慮可能為鹽敏感性患者， ASBP/UNa+《4. 41mmHg?min/ymol考慮可能為非鹽敏感性患者，ASBP/UNa+在 4. 41-9. 38mmHg'min/ymol為中間型。進一步結合G服4的變異體存在與否作為指標，其診 斷價值達94%，敏感性到83%，特異性100%，該發明不僅僅拓寬了診斷鹽敏感性的思路及 方法，同時也為更好地預防和進一步有效治療鹽敏感性相關性疾病提供了新的依據。并且 利用該方法診斷鹽敏感性快速、有效，患者依從性更好，較靜脈鹽水負荷法診斷鹽敏感性更 佳，具有重要的臨床意義。
【附圖說明】
[0021] 為了使本發明的目的、技術方案和有益效果更加清楚，本發明提供如下附圖：
[0022] 圖1為G服4基因A142V變異體電泳結果。
[0023] 圖2為G服4基因A142V變異體測序結果。
[0024]圖3為判斷鹽敏感性的標準。
【具體實施方式】
[0025] 下面將結合附圖，對本發明的優選實施例進行詳細的描述。實施例中未注明具體 條件的實驗方法或按照制造廠商所建議的條件。
[0026] 實驗對象；選擇口診確診的原發性高血壓患者，排除繼發性高血壓、合并嚴重糖尿 病、合并肝腎功能不全、不能耐受檢查者，剩余患者作為研究對象，共856名；然后對入選的 研究對象測量屯、率、血壓、身高、體重，并計算體重指數炬MI)=體重kg/身高m2;再抽取清 晨空腹血，檢測血脂（甘油=醋，膽固醇）、空腹血糖，肌酢指標；詢問飲酒史、吸煙史，高血 壓病史及服用降壓藥物情況。
[0027]傳統判定鹽敏感方法采用Weinberger法（參考文獻見WeinbergerMH， MillerJZ，LuftFC，GrimCE，FinebergNS.Definitionsandcharacteristicsof sodiumsensitivityandbloodpressureresistance.Hypertension. 1986 ;8(suppl