用于防止干細胞破碎和聚集的方法和組合物的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種用于防止干細胞破碎和聚集的方法，更特定而言，涉及一種用于 防止干細胞破碎和聚集的方法，所述方法能夠防止在運輸或儲存期間細胞破碎或聚集。
【背景技術】
[0002]干細胞是指能夠分化成至少兩種類型的細胞同時具有自我復制能力的細胞，干細 胞可分為全能干細胞、多能干細胞（pluripotent stem cells)和專能干細胞（multipotent stem cell)。全能干細胞是具有能夠發育成一個完整個體的全能性質的細胞，而這些性質 為卵母細胞和精子受精之后直到八細胞期的細胞所擁有。當這些細胞分離并移植到子宮內 時，這些細胞可發育成一個完整的個體。多能干細胞是能夠發育成外胚層、中胚層和內胚層 來源的各種細胞和組織的細胞，來源于位于受精4-5天后生成的胚囊內部的內細胞群。這 些細胞被稱為"胚胎干細胞"，可以分化成各種其他組織細胞，但不能形成新的活生物體。專 能干細胞是能夠分化成僅特異于包含這些細胞的組織和器官的干細胞，專能干細胞不僅參 與胎兒期、新生兒期和成體期的各種組織和器官的生長和發育，還參與成體組織的穩態維 持和組織損傷后誘發再生的功能。組織特異性專能細胞統稱為"成體干細胞"。
[0003] 通過收獲已經存在于人體各種器官中的細胞以使所述細胞發育成干細胞而獲得 的成體干細胞具有僅分化成特異性組織的特征。然而，近來，用于使成體干細胞分化成包括 肝細胞等各種組織的試驗取得成功，這成為了熱點。特定而言，在再生療法中，即通過主動 利用用于對具有由疾病或事故導致的、功能紊亂或失調的生物組織和器官進行再生并恢復 功能的細胞來進行的治療，主要使用了一種方法，包括：采集干細胞、血液來源的單核細胞 或骨髓來源的單核細胞，通過體外培養誘導細胞增殖和/或分化，并通過移植將所選擇的 未分化（干細胞和/或組細胞）和/或分化細胞轉導到患者體內。預期現有通過經典藥物 治療方法或外科手術方法來治療疾病的方法將被如上所述的用健康細胞、組織或器官來替 代受損細胞、組織或器官的細胞/組織替代療法所取代，干細胞的用途將進一步增加。
[0004] 因而，目前，已研宄了干細胞的各種功能。其中，使用間充質干細胞的細胞療法已 成為熱點，并且已開發了一種改良分離自人體的間充質干細胞以便適合于治療的技術（W0 2006/019357,韓國專利第0795708號和韓國專利第0818214號）。
[0005] 然而，對于制備適合于體內給藥并具有優異安全性的干細胞的方法的研宄仍沒有 充分地實施。
[0006] 因此，本發明者們證實在將干細胞懸浮于含阿司匹林的溶液的情況下，可以防止 干細胞的破碎和聚集，從而完成了本發明。
【發明內容】
[0007] 本發明的一個目的是提供一種用于防止干細胞破碎和聚集的方法。
[0008] 本發明的另一個目的是提供一種用于血管內給藥的干細胞組合物。
[0009] 本發明的另一個目的是提供一種用于防止干細胞破碎和聚集的組合物。
[0010] 根據本發明的一個方面，提供了一種用于防止干細胞破碎和聚集的方法，包括將 干細胞懸浮于含阿司匹林的溶液。
[0011] 根據本發明的另一個方面，提供了一種用于血管內給藥的干細胞的組合物，其中 干細胞懸浮于含阿司匹林的溶液。
[0012] 根據本發明的另一個方面，提供了一種用于防止干細胞破碎和聚集的組合物，其 中干細胞懸浮于含阿司匹林的溶液。
【附圖說明】
[0013] 圖1是通過觀察暴露于各種濃度的阿司匹林下24小時的干細胞的聚集程度而獲 得的照片。
[0014] 圖2是通過觀察暴露于各種濃度的阿司匹林下72小時的干細胞的聚集程度而獲 得的照片。
【具體實施方式】
[0015] 除非本文中另有定義，本說明書中使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬 領域技術人員所理解的含義相同的含義。一般來說，本說明書中使用的名稱和以下描述的 實驗方法是本領域公知且通用的。
[0016] 如本文所使用，術語"干細胞"是指能夠分化成至少兩種類型的細胞同時具有自我 復制能力的細胞，而術語"成體干細胞"是指在發育過程進行由此形成胚胎的各個器官的階 段或者在成體階段產生的干細胞。
[0017] 如本文所使用，術語"間充質干細胞"是指分離自人或哺乳動物的組織的未分化干 細胞，其可來源于各種組織。特定而言，間充質干細胞可以是臍帶來源的間充質干細胞、臍 帶血來源的間充質干細胞、骨髓來源的間充質干細胞、脂肪來源的間充質干細胞、肌肉來源 的間充質干細胞、神經來源的間充質干細胞、皮膚來源的間充質干細胞、羊膜來源的間充質 干細胞和胎盤來源的間充質干細胞，并且從各組織分離干細胞的技術已為本領域所知。
[0018] 如本文所使用，術語"脂肪來源的間充質干細胞"，是一種分離自脂肪組織的未分 化成體干細胞，在本說明書中簡稱為"脂肪來源的成體干細胞"、"脂肪干細胞"或"脂肪來源 的干細胞"。脂肪來源的間充質干細胞可以通過本領域已知的普通方法獲得。其分離方法 的例子如下。即，可以通過以下方法分離脂肪來源的間充質干細胞：培養含懸浮在生理鹽水 中通過脂肪抽吸獲得的脂肪的懸液，之后用胰蛋白酶處理貼附到諸如燒瓶等培養容器的干 細胞層，然后回收經處理的干細胞，使用刮刀刮取而直接回收懸浮在少量生理鹽水中的干 細胞的方法，或類似方法。
[0019] 如本文所使用，術語"運輸"是指干細胞本身、填充有含干細胞的溶液的容器等通 過諸如運載體等運輸工具來運輸，術語"儲存"包括低溫儲存以及室溫儲存。
[0020] 如本文所使用，術語"防止干細胞破碎和聚集"是指以單個細胞的形式保持干細胞 不被破壞或聚集。舉例而言，其是指被運輸或儲存的干細胞以單個細胞的形式保持而沒有 細胞膜破壞或細胞之間的聚集。
[0021] 干細胞可以通過各種方法給藥于體內，例如，靜脈內給藥方法、動脈內給藥方法或 腹膜內給藥方法等。其中，由于靜脈內給藥方法可簡單且安全地治療疾病而無外科手術，故 靜脈內給藥方法是有用的。然而，為使靜脈內給藥的干細胞實際并穩定地到達靶位點以獲 得期望的治療效果，應當滿足各種因素。首先，干細胞需要以單個細胞的形式血管內給藥。 可以通過用胰蛋白酶等處理來將干細胞以單個細胞的形式制備用于體內給藥，但即使是在 以單個細胞的形式制備干細胞的情況下，運輸或儲存期間細胞膜也可能被破壞或細胞之間 可能形成聚集。在通過靜脈給藥等方式將聚集的干細胞而非單個形式的干細胞或者被破 壞的細胞體內給藥的情況下，所給藥的細胞可能附著于血管內皮細胞、血小板等，從而降低 血液流速或妨礙血液循環，甚至造成微血管、血管等的閉塞（D. Furlani等，Microvasular Research 77(2009)370-376)。因而，在干細胞血管內給藥之前，不形成細胞的破碎或聚集 是至關重要的，且在干細胞血管內給藥之后，干細胞應當以單個細胞的形式穩定地到達靶 位點而沒有細胞的破碎或聚集。進一步地，干細胞應當具有適合于血管內給藥的尺寸，使得 血管內給藥的干細胞不降低血液流速或形成凝血。此外，干細胞應當以預定的濃度或更高 的濃度給藥，以便到達靶位點的干細胞呈現預期的治療效果。在如上所述的各種因素中，本 發明通過在血管內給藥之前防止干細胞破碎和聚集，提供了適合于體內給藥并具有優異安 全性的干細胞。
[0022] 本發明提供了一種用于防止干細胞破碎和聚集的方法，包括將干細胞懸浮于含阿 司匹林的溶液。
[0023] 如本文所使用，術語"含阿司匹林的溶液"是指含阿司匹林化合物的溶液，而作為 溶劑，可優選生理鹽水。除此之外，可以使用任何溶劑而沒有限制，例如Hartman-D溶液、磷 酸鹽緩沖液（PBS)等，只要其是本領域通用的。作為阿司匹林，可以使用類阿司匹林化合 物，以及通常市售的阿司匹林產品。在本法明的實施例中，通過向生理鹽水中添加乙酰水楊 酸（Sigma ;A5376)、Arthalgyl注射液或阿司匹林賴氨酸（Shinpoong)來制備含阿司匹林的 溶液。在此情況下，優選所添加的阿司匹林的含量在0.0001到〇.〇lmg/ml。在所添加的阿 司匹林的含量高于上述范圍的情況下，會降低細胞的存活率，而在含量低于上述范圍的情 況下，防止細胞破碎或聚集的效果可能不明顯。
[0024] 由于在含阿司匹林的溶液中懸浮干細胞的情況下，運輸或儲存期間不發生干細胞 的破碎和聚集，故這些干細胞可直接應用于體內給藥，使得這些干細胞是有用的。因而，優 選地，在血管內給藥時使用的干細胞可在懸浮于含阿司匹林的生理鹽水中之后使用。
[0025] 另一方面，本發明提供了一種用于血管內給藥的干細胞組合物，其中干細胞懸浮 于含阿司匹林的溶液。
[0026] 另一方面，本發明提供了一種用于防止干細胞破碎和聚集的組合物，其中干細胞 懸浮于含阿司匹林的溶液。
[0027] 作為本發明中使用的干細胞，優選地可以使用成體干細胞。其中，可以使用從脂肪 組織或諸如毛囊、羊膜等的上皮組織獲得的成體干細胞。最優選地，可以使用脂肪組織來源 的成體干細胞。可以使用間充質干細胞（MSC)，更特定而言，可以使用脂肪組織來源的間充 質干細胞（AdMSC)。
[0028] 優選地，脂肪組織或上皮組織來源于哺乳動物，更優選地，脂肪組織或上皮組織來 源于人。在本發明的實施例中，使用人脂肪組織來源的間充質干細胞（hAdMSC)。
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