一種金龜子綠僵菌菌株在制備殺稻水象甲的藥劑中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種金龜子綠僵菌菌株的新應用，具體涉及其在制備殺稻水象甲的金 龜子綠僵菌藥劑中的應用，屬于生物農藥領域。 技術背景
[0002] 稻水象甲是水稻的毀滅性害蟲，成蟲取食水稻的細嫩部分，影響水稻的光合作用， 幼蟲危害根部，阻礙養分傳輸，使稻苗生長速度減緩，植株矮化，分蘗能力下降，最終導致水 稻產量下降，一般造成減產10-30%，嚴重時達50%以上，甚至絕收。1986年，我國將其列為 農業植物檢疫對象。然而2011年為止，已擴散到20多個省份，嚴重威脅到我國農業生產、 糧食安全。目前稻水象甲的防治主要以化學防治為主，雖然化學藥劑可以在短時間內控制 蟲口數量，但長期大量的施用會產生害蟲抗藥性、次要害蟲上升為主要害蟲、污染環境和農 藥殘留等一系列的生態問題。生物防治是基于生態平衡的原理，利用天敵的作用來調節有 害生物種群密度，使之長期穩定在不危害的水平。稻水象甲的專一性強的天敵種類匱乏，真 菌是當前稻水象甲主要的生物防治因子。
[0003] 綠僵菌（Metarhizium)是最早用于防治害蟲的昆蟲病原真菌之一，能感染全世界 約有200多種昆蟲，利用它來防治害蟲的研宄與實踐已愈百年。雖然以報道了多個能侵染 稻水象甲的綠僵菌，但尚無防治稻水象甲的殺蟲真菌產品登記和廣泛應用。金龜子綠僵菌 CQMa421是一株從自然感染的稻縱卷葉螟僵蟲上分離篩選出的一株生產性狀好、對稻縱卷 葉螟具有高毒力殺蟲真菌，已在中國專利CN102212483中公開，該菌株于2011年02月25 日，在北京市朝陽區北辰西路1號院3號、中國科學院微生物研宄所的中國微生物菌種保藏 管理委員會普通微生物中心（CGMCC)保藏，保藏編號：CGMCCN0. 4609,分類命名：金龜子綠 僵菌小抱變種Metarhiziumanisopliaevar.anisopliae?該菌株及其制劑對稻水象甲的 毒力與防治效果未見報道。
[0004] 可濕性粉劑是一種最基本的農藥劑型，可制成懸濁液，進行噴霧。殺蟲真菌可濕性 粉劑是由真菌孢子粉中加入一定量的表面活性劑和填充料，通過過篩制成。由于真菌孢子 活性受潤濕劑的影響，制劑中往往減少表面活性劑的用量，導致濕潤分散效果差，同時產品 貯存期仍較短，很少超過12個月。由于濕潤分散特性、貯存穩定性的問題和田間防效受紫 外照射影響大，殺蟲真菌可濕性粉劑雖有登記注冊，一直沒有大量應用。因此，篩選馴化高 毒力菌株和研制濕潤分散特性良好的真菌殺蟲劑可濕性粉劑，延長其貯存穩定性，從而促 進真菌殺蟲劑在防治稻水象甲中的應用，有利于減少水稻生產中化學農藥的用量。
【發明內容】
[0005] 本發明的第一目的在于提供一種金龜子綠僵菌菌株在防治稻水象甲中的應用。
[0006] 本發明第二目的在于提供一種金龜子綠僵菌制劑，該制劑耐紫外照射、保存期長、 防效好。
[0007] 本發明第三目的在于提供一種增強金龜子綠僵菌毒力，而不影響其產孢、耐熱特 性的方法。
[0008] 本發明目的是通過如下技術方案實現的： 金龜子綠僵菌CQMa421菌株在制備防治稻水象甲金龜子的藥劑中的應用，該菌株對稻 水象甲金龜子具有侵染作用，致死率可達到57. 1%。
[0009] 不同的綠僵菌菌株具有特定的寄主，如公開報道：金龜子綠僵菌FI-1045菌株能 侵染甘鹿賂螬（Anoplophoraglabripennis)，金龜子綠僵菌AESALQ818菌株能侵染埃及 斑蚊（Aedesaegypti)，金龜子綠僵菌EAMb09/01-Su菌株能侵染地中海果實幡，金龜子 綠僵菌TORL526菌株能侵染蘿卜蚜（Lipaphiserysimi)，金龜子綠僵菌M2菌株能侵染螺 旋粉虱（AleurodicusdispersusRussell)，金龜子綠僵菌ICIPE-30菌株能侵染岡比亞按 蚊（anophelesgambiae)，金龜子綠僵菌ESC1菌株能侵染白蟻，金龜子綠僵菌ATCC62176 能侵染甜菜根蛆（sugarbeetrootmaggot)，金龜子綠僵菌M105菌株能侵染幢蟲，金龜子 綠僵菌廣譜菌株F-52能侵染賂螬（Anoplophoraglabripennis)、核桃象甲、光滑足距小蠹 (Xylosandrusgermanus)，金龜子綠僵菌廣譜菌株549能侵染煙草天蛾（Manducasexta)、 埃及斑蚊（Aedesaegypti)，羅伯茨綠僵菌廣譜菌株ARSEF23能侵染蝗蟲、鱗翅目幼蟲、甲 蟲等。
[0010] 優選地，上述防治稻水象甲金龜子的藥劑由綠僵菌CQMa421干孢子粉44-60%、硅 藻土 30-40%、納米碳化硅0. 5-1%、羧甲基纖維素鈉3-5%、吐溫-80 3-5%和0P-10 3-5%組 成，均以重量百分比。
[0011] -種金龜子綠僵菌制劑，其特征在于：它是由娃藻土 30-40%、納米碳化娃0. 5-1%、 羧甲基纖維素鈉3-5%、吐溫-80 3-5%、0P-10 3-5%和綠僵菌CQMa421干孢子粉44-60%組 成，均以重量百分比。
[0012] 上述各組分均為本領域明確的組分，吐溫-80為聚氧乙烯脫水山梨醇單油酸酯、 簡稱聚山梨酯-80, 0P-10為烷基酚聚氧乙烯醚，綠僵菌CQMa421在中國專利CN102212483 中公開、該菌株于2011年02月25日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心 (CGMCC)保藏、保藏編號：CGMCCN0. 4609 ;納米碳化硅為粒徑為納米級的碳化硅。
[0013] 上述吐溫-80和0P-10優選純度>95%的吐溫-80和0P-10;上述羧甲基纖維素鈉 (CMC)優選純度大于95% ;上述硅藻土優選為白色至淺褐色疏松粉末，純度大于85%，含水量 小于1% ;上述納米碳化硅優選為粒徑小于50nm。上述綠僵菌CQMa421干孢子粉為純孢子 粉，含孢量多150億孢子/克，含水量< 5% ;以上均以質量百分含量計。
[0014] 上述金龜子綠僵菌制劑中納米碳化硅包裹在真菌孢子表面，有效阻隔了制劑中高 濃度（3-5wt%)吐溫-80和0P-10的不良影響，有效保證了孢子的生物活性。
[0015] 進一步優選地，本發明金龜子綠僵菌制劑，其特征在于：它是由娃藻土 35-40%、納 米碳化硅0. 5-0. 8%、羧甲基纖維素鈉3-5%、吐溫-80 3-5%、0P-10 3-5%和綠僵菌CQMa421 干孢子粉45-55%組成，均以重量百分比。
[0016] 上述綠僵菌CQMa421干孢子粉優選采用強毒力金龜子綠僵菌CQMa421孢子粉，所 述強毒力金龜子綠僵菌CQMa421孢子粉由以下方法得到：將金龜子綠僵菌CQMa421接種稻 水象甲成蟲，接種后在28°C、濕度50-70%的條件下飼養，將最先感病死亡的稻水象甲，放入 28°C、濕度為50-70%培養箱中保濕培養3-5天，使其昆蟲表面生長出新鮮孢子，如上所述循 環接種18次，得到馴化后的金龜子綠僵菌CQMa421新鮮孢子；在無菌條件下，用接種環挑取 馴化后新鮮孢子在含有100微克/毫升氨芐青霉素的1/4SDA培養基平板上劃線，將劃線 好的培養皿翻轉放置于28°C恒溫箱中培養；3 - 4日后挑選長出的典型而無雜菌的菌落，在 菌落邊緣用移菌針挑取帶有菌絲的培養基一小塊，轉入試管斜面培養基中央，28°C恒溫培 養10-15天得到強毒力的金龜子綠僵菌CQMa421母種，將CQMa421菌株母種接種在1/4SDA 平板上，28°C培養15天，收集成熟分生孢子制得綠僵菌CQMa421干孢子粉。
[0017] 上述金龜子綠僵菌制劑的制備方法，是先將綠僵菌CQMa421干孢子粉和納米碳化 硅在混合機中混勻，再依次加入硅藻土、羧甲基纖維素鈉、吐溫-80和0P-10,邊加入邊攪 拌，直至各組分完全混合均勻制得。
[0018] 一種增強金龜子綠僵菌毒力的方法，其特征在于：將金龜子綠僵菌CQMa421接種 于稻水象甲成蟲，接種后在28°C、濕度50-70%的條件下飼養，將最先感病死亡的稻水象甲， 放入28°C、濕度為50-70%培養箱中保濕培養3-5天，使其昆蟲表面生長出新鮮孢子，如上 所述循環接種18次得到馴化后的金龜子綠僵菌CQMa421新鮮孢子