一種從大田廢棄鮮煙葉中提取煙草多糖的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種植物多糖的提取方法，具體涉及一種從大田廢棄鮮煙葉中提取煙草多糖的方法。
【背景技術】
[0002]煙草為茄科煙草屬植物，是一種利用價值很高的天然植物。作為傳統中藥，煙草始載于《景岳全書》，也被《全國中草藥匯編》等現代中草藥專著收錄，具有消腫、解毒、殺蟲等功效。在過去的400多年里，煙草作為一種重要的經濟作物被廣泛種植。我國的煙草種植面積和產量均居世界首位，煙草種植與產品加工在國民經濟發展中發揮著重要的作用。在我國農產品收入中，煙草僅次于稻、麥、棉、大豆、玉米，居第6位。作為煙草生產大國，除用于卷煙生產的煙葉外，每年有大量的低等和等外級煙葉、煙桿、煙梗、煙莖、煙花和煙籽等資源未能得到有效利用，或丟棄于田間地頭，或被曬干焚燒，給環境帶來污染的同時也造成了自然資源的極大浪費。目前我國面臨著嚴峻的環境形勢，環境污染已成為全民高度關注的問題，資源的高效利用和循環利用必將是今后各產業發展的方向，也必將是煙草行業發展的方向。
[0003]植物多糖是由多個相同或不同的單糖基以糖苷鍵相連接而形成的化合物，普遍存在于自然界植物體中，是構成植物生命活動的四大基本物質之一，同維持植物生命功能密切相關。近年來的大量研宄表明，植物多糖具有改善機體免疫功能、降血糖、降血脂、抗病毒、抗輻射和抗衰老等多種藥理作用，且其對機體毒副作用小。因此，從大田廢棄鮮煙葉中提取多糖，對于利用廢棄資源、減少資源浪費、保護環境和增加煙農收入都具有重要的意義。
【發明內容】
[0004][要解決的技術問題]
[0005]本發明的目的是解決上述現有技術的問題，利用一種新型的提取方法從大田廢棄鮮煙葉中提取煙草多糖。
[0006][技術方案]
[0007]為了達到上述的技術效果，本發明采取以下技術方案:
[0008]本發明利用閃式提取技術從大田廢棄鮮煙葉中提取煙草多糖。
[0009]一種從大田廢棄鮮煙葉中提取煙草多糖的方法，它包括以下步驟:
[0010]A，預處理
[0011]取大田廢棄鮮煙葉，去除葉脈和葉梗，清洗、切碎后備用；
[0012]B，脫色脫脂
[0013]將步驟A預處理的大田廢棄鮮煙葉置于容器中，加入正己烷或石油醚后浸泡一段時間，然后置于閃式提取器上，設定提取電壓、轉速、提取次數和每次提取時間；提取完畢后過濾，濾渣低溫干燥后備用；濾液回收利用；
[0014]C，煙草多糖的提取
[0015]將步驟B得到的濾渣置于容器中，加入溫度為90°C的水，置于閃式提取器上，設定提取電壓、轉速、提取次數和每次提取時間；提取完畢后過濾，濾液在轉速為4000rpm/min的條件下離心lOmin，分取上清液備用；濾渣回收利用；
[0016]D，Sevage 法脫蛋白
[0017]按上清液、氯仿和正丁醇的體積比為100:10:2，向步驟C得到的上清液中加入氯仿和正丁醇，振蕩40min，接著在轉速為4000rpm/min的條件下離心lOmin，分取上清液；
[0018]E，重復步驟D，分取上清液備用；
[0019]F，后處理
[0020]將步驟E得到的上清液置于容器中，然后加入95 %乙醇至終溶液中醇含量為85 %后，靜置過夜；接著在轉速為4000rpm/min的條件下離心lOmin，分取沉淀；最后，用95%乙醇洗滌沉淀，再用透析法去除雜質后，冷凍干燥，即得所述的煙草多糖。
[0021]本發明更進一步的技術方案，在步驟B中，所述的正己烷或石油醚浸泡時間為I?2小時，所述閃式提取的提取電壓為130?150V，轉速為4500?5100rpm/min，提取次數為4?6次，每次提取時間為30?40s。
[0022]根據本發明的一個優選實施方式，在步驟B中，所述的正己烷或石油醚浸泡時間為I小時，所述閃式提取的提取電壓為150V，轉速為5000rpm/min，提取次數為5次，每次提取時間為30s。
[0023]本發明更進一步的技術方案，在步驟B中，所述低溫干燥是指在溫度不高于50°C的條件下進行的干燥。
[0024]本發明更進一步的技術方案，在步驟C中，所述步驟B得到的濾渣與水的質量比為I:20 ?30。
[0025]本發明更進一步的技術方案，在步驟C中，所述煙草多糖的閃式提取電壓為100?150V，轉速為5000?10000rpm/min，提取次數為5?10次，每次提取時間為30?60s。
[0026]下面將詳細地說明本發明。
[0027]一種從大田廢棄鮮煙葉中提取煙草多糖的方法，它包括以下步驟:
[0028]A，預處理
[0029]取大田廢棄鮮煙葉，去除葉脈和葉梗，清洗、切碎后備用；
[0030]B，脫色脫脂
[0031]將步驟A預處理的大田廢棄鮮煙葉置于容器中，加入正己烷或石油醚后浸泡一段時間，然后置于閃式提取器上，設定提取電壓、轉速、提取次數和每次提取時間；提取完畢后過濾，濾渣低溫干燥后備用；濾液回收利用；
[0032]本發明使用正己烷或石油醚是為了預先除去煙葉中的色素和其他脂溶性成分，以便后一步煙草多糖的提取。并且步驟B中的濾液主要為正己烷或石油醚溶液，可用于煙葉中脂溶性成分的提取。本發明中使用的石油醚沸程為60?90°C。
[0033]C，煙草多糖的提取
[0034]將步驟B得到的濾渣置于容器中，加入溫度為90°C的水，置于閃式提取器上，設定提取電壓、轉速、提取次數和每次提取時間；提取完畢后過濾，濾液在轉速為4000rpm/min的條件下離心lOmin，分取上清液備用；濾渣回收利用；
[0035]本發明使用溫度為90°C的水主要是因為多糖在熱水中的溶解度更高，使用熱水可以讓濾渣中的多糖更快速充分地溶解于其中。濾渣回收可用于制備動物飼料或肥料。
[0036]D，Sevage 法脫蛋白
[0037]按上清液、氯仿和正丁醇的體積比為100:10:2，向步驟C得到的上清液中加入氯仿和正丁醇，振蕩40min，接著在轉速為4000rpm/min的條件下離心lOmin，分取上清液；
[0038]本發明使用Sevage法脫蛋白，是因為Sevage法較為溫和，對煙草多糖的結構影響不大。
[0039]E，重復步驟D，分取上清液備用；
[0040]重復步驟D是為了更好地脫除蛋白。
[0041]F，后處理
[0042]將步驟E得到的上清液置于容器中，然后加入95 %乙醇至終溶液中醇含量為85 %后，靜置過夜；接著在轉速為4000rpm/min的條件下離心lOmin，分取沉淀；最后，用95%乙醇洗滌沉淀，再用透析法去除雜質后，冷凍干燥，即得所述的煙草多糖。所述的雜質為無機鹽和低聚糖等小分子雜質。
[0043]本發明利用95%的乙醇沉淀得到煙草多糖，并且利用透析法去除無機鹽和低聚糖等小分子雜質。由于市售乙醇有95%乙醇和無水乙醇，因為95%乙醇比無水乙醇便宜，考慮到成本問題，所以使用95%乙醇更經濟。
[0044]本發明的冷凍干燥還可以用真空干燥的方式代替。
[0045]本發明更進一步的技術方案，在步驟B中，所述的正己烷或石油醚浸泡時間為I?2小時，所述閃式提取的提取電壓為130?150V，轉速為4500?5100rpm/min，提取次數為4?6次，每次提取時間為30?40s。
[0046]根據本發明的一個優選實施方式，在步驟B中，所述的正己烷或石油醚浸泡時間為I小時，所述閃式提取的提取電壓為150V，轉速為5000rpm/min，提取次數為5次，每次提取時間為30s。
[0047]本發明在閃式提取電壓為150V，轉速為5000rpm/min，提取次數為5次，每次提取時間為30s的條件下，脫色脫脂的效果最好，并且不會影響煙草多糖。
[0048]本發明更進一步的技術方案，在步驟B中，所述低溫干燥是指在溫度不高于50°C的條件下進行的干燥。
[0049]本發明更進一步的技術方案，在步驟C中，所述步驟B得到的濾渣與水的質量比為I:20?30。在濾渣與水的質量比為1:20?30的條件下，提取得到的煙草多糖最多。
[0050]本發明更進一步的技術方案，在步驟C中，所述煙草多糖的閃式提取電壓為100?150V，轉速為5000?10000rpm/min，提取次數為5?10次，每次提取時間為30?60