一種用于去除土壤中硝基甲苯的微生物制劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于微生物技術領域，具體涉及一種用于去除土壤中硝基甲苯的微生物制 劑。
【背景技術】
[0002] 1階(2,4,6三硝基甲苯）是一種無色或淡黃色晶體，溶點為3541((80.9°〇。丁階' 是目前產量最高的生產炸藥，近年來彈藥車間中TNT的制造、加工和包裝已經導致土壤高 濃縮的污染，最終將導致地下水的污染。人長期暴露于硝基甲苯會增加患貧血癥和肝功能 不正常的機會。注射了或吸入三硝基甲苯的動物亦發現會影響血液和肝臟、脾臟發大和其 他有關免疫系統的壞影響。亦有證據證明了TNT對男性的生殖功能有不良影響，而TNT也 被列為一種可能致癌物。目前，該類污染物處理難度較大。
[0003] 現有技術中對硝基甲苯污染處理的方式主要有：物理方法：吸附法和萃取法；化 學法：濃縮焚燒法、紫外照射法、臭氧及組合臭氧氧化法等；然而，物理方法、化學方法處理 三硝基甲苯廢水，操作復雜，費用貴，治理不徹底，效果令人不堪滿意。生物法是利用生物的 新陳代謝作用對廢水中的污染物進行轉化，使之無害化的處理方式。硝基甲苯類化合物降 解菌對硝基甲苯的徹底降解是十分必需的。許多化工廠已經應用降解性微生物處理硝基甲 苯，并且已經取得了顯著的效果。中國專利CN102864108A公開了一種修復硝基甲苯污染土 壤的復合菌劑，該菌劑具備一定的修復功能，但是部分菌株的繁殖速率慢，以及對二硝基甲 苯的處理效果差，不能兼做肥料。因此，我們需要開發研制一種用于去除土壤中硝基甲苯的 新型微生物制劑。
【發明內容】
[0004] 本發明需要解決的技術問題是，克服了現有技術中存在的不足之處，提供了一種 用于去除土壤中硝基甲苯的微生物制劑，該微生物制劑包含多種菌株，配伍合理，協同作用 強，能夠有效地去除土壤中的硝基甲苯，而且還可以作為一種生物菌肥，大大提高了糧食產 量；本發明微生物制劑投入成本低廉，可大規模推廣使用。
[0005] 本發明的目的是通過下述技術方案實現的：
[0006] -種用于去除土壤中硝基甲苯的微生物制劑，其由如下重量份的原料制備而成： 復合菌液1-2份，輔料1-2份，天然礦物質3-4份，生物有機質10-15份。
[0007] 所述微生物制劑的制備方法包括如下步驟：將復合菌液和生物有機質混合攪拌均 勾，30°C培養12小時，然后添加輔料和天然礦物質，100轉/min攪拌3min，最后進行低溫干 燥，干燥溫度為20°C，干燥后含水量為8%，即得。
[0008] 所述復合菌液按照如下方法制備而成：將鮑曼不動桿菌、蠟狀芽孢桿菌、 赤紅球菌、藤黃微球菌以及糞腸球菌分別培養成濃度為IX108個/ml的菌液，按照 1:1:2:3:3的體積比混合攪拌均勻即得。
[0009] 所述輔料按照如下方法制備而成：
[0010] 首先控制鋸末和殼聚糖的粒徑均為50-100目，然后將鋸末、殼聚糖和甘油按照 1 : 1 : 1的質量比混合均勻，即得。
[0011] 所述天然礦物質按照如下方法制備而成：
[0012] 首先將沸石進行粉碎處理，得到粒徑在50-100目之間的沸石粉，然后與腐植酸和 草炭按照1 : 1 : 1的重量比混合均勻，即得；所述腐植酸和草炭的粒徑均控制在50-100 目之間；
[0013] 所述生物有機質按照如下方法制備而成：將豆柏按1 : 1的重量比加水，攪拌均 勻，90°C提取lh，過濾，取上清液即為豆柏浸提液；將花生殼曬干，用粉碎機粉碎成花生殼 粉；將花生殼粉和豆柏浸提液添加到攪拌罐中，500轉/分鐘的速度攪拌15分鐘后，將攪拌 罐中的物料送入反應器中，往反應器中通入水蒸汽，維持反應器的溫度在95°C以上，保溫反 應30分鐘，最后自然冷卻即得；花生殼粉和豆柏浸提液質量比為1 : 2。
[0014] 所述鮑曼不動桿菌為鮑曼不動桿菌（Acinetobacterbaumanii)為ATCC19606 ; 所述蠟狀芽孢桿菌為蠟狀芽孢桿菌（Bacilluscereus)ATCC10876;所述赤紅球菌為赤 紅球菌（Rhodococcusruber)ATCC15906 ;所述藤黃微球菌為藤黃微球菌（Micrococcus luteus)ATCC49442;所述奠腸球菌為奠腸球菌（Enterococcusfaecalis)為ATCC29212.
[0015] 上述微生物制劑的使用方法包括：首先將土壤翻松平整，翻土深度為30_40cm，噴 灑水，保持土壤含水量為30 %，然后按照每立方米土壤使用200g微生物制劑的添加量播撒 微生物制劑。
[0016] 本發明所述菌種均可以從美國模式培養物集存庫（ATCC)等商業渠道購買得到。 本發明的菌株的擴大培養方法可按照文獻記載或者現有技術的記載進行，此處不是本發明 的創新點，限于篇幅，并不一一贅述。
[0017] 本發明取得的有益效果主要但不限于以下幾個方面：
[0018] 本發明微生物制劑能夠有效地處理硝基甲苯污染土壤，處理效果好，成本低廉，制 備方法簡單可行；
[0019] 本發明微生物制劑還具備一定的肥效，可作為一種微生物肥料，可提高糧食作物 的產量；
[0020] 本發明微生物制劑中各菌種之間合理配伍，共生協調，互不拮抗，活性高，生物量 大，繁殖快；
[0021] 本發明充分利用了農業廢棄物和天然礦物質，既可作為微生物養料，還可以作為 肥料養分，一舉兩得，變廢為寶。
【具體實施方式】
[0022] 為了使本技術領域的人員更好地理解本申請中的技術方案，下面將結合本申請具 體實施例，對本申請的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本申 請一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本申請中的實施例，本領域普通技術人員在沒 有作出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都應當屬于本發明保護的范圍。
[0023] 實施例1
[0024]一種用于去除土壤中硝基甲苯的微生物制劑，其由如下重量份的原料制備而成： 復合菌液1份，輔料1份，天然礦物質3份，生物有機質10份；
[0025] 所述微生物制劑的制備方法包括如下步驟：將復合菌液和生物有機質混合攪拌均 勾，30°C培養12小時，然后添加輔料和天然礦物質，100轉/min攪拌3min，最后進行低溫干 燥，干燥溫度為20°C，干燥后含水量為8% (w/w)，即得；
[0026] 所述復合菌液按照如下方法制備而成：
[0027] 將鮑曼不動桿菌、蠟狀芽孢桿菌、赤紅球菌、藤黃微球菌以及糞腸球菌分別培養成 濃度為IX108個/ml的菌液，按照1 : 1 : 2 : 3 : 3的體積比混合攪拌均勻即得；
[0028] 所述輔料按照如下方法制備而成：
[0029] 首先控制鋸末和殼聚糖的粒徑均為50目，然后將鋸末、殼聚糖和甘油按照 1 : 1 : 1的質量比混合均勻，即得；
[0030] 所述天然礦物質按照如下方法制備而成：
[0031] 首先將沸石進行粉碎處理，得到粒徑在50目的沸石粉，然后與腐植酸和草炭按照 1 : 1 : 1的重量比混合均勻，即得；所述腐植酸和草炭的粒徑均控制在50目；
[0032] 所述生物有機質按照如下方法制備而成：
[0033] 將豆柏按1 : 1的重量比加水，攪拌均勻，90°C提取lh，過濾，取上清液即為豆柏浸 提液；將花生殼曬干，用粉碎機粉碎