一種使用大孔吸附樹脂富集發酵液中丹參素的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及發酵產物的分離純化，特別涉及一種使用大孔吸附樹脂富集發酵液中丹參素的方法。
【背景技術】
[0002]大孔吸附樹脂是一種具有大孔結構的有機高分子共聚體，是一類人工合成的有機高聚物吸附劑。大孔吸附樹脂吸附技術最早用于廢水處理、醫藥工業、化學工業、分析化學、臨床檢定和治療等領域，近年來已廣泛用于中草藥有效成分的提取、分離、純化工作中，如黃酮，皂苷，生物堿等中藥成分的精制純化。
[0003]丹參素(Salvianic acid A, Danshensu)，屬于酸性芳香類化合物，其化學名為β-(3，4-二輕基苯基)乳酸，也稱丹參素甲，分子式為C9HltlO5，分子量為198.17。研宄表明，丹參素具有顯著的改善血液流變學、降脂質、抑制脂質過氧化、抗腫瘤和臟器損傷保護等藥理活性。
[0004]本實驗室構建了合成丹參素的工程大腸桿菌，實現了丹參素的微生物發酵生產，并申請了中國專利，專利名稱為一種丹參素的生物生產方法，公開號為CN 103667371 Α。目前從大腸桿菌發酵液中分離純化丹參素的方法尚未見諸報端。
【發明內容】
[0005]本發明的目的是提供一種使用大孔吸附樹脂富集發酵液中丹參素的方法。
[0006]本發明的技術方案概述如下:
[0007]一種使用大孔吸附樹脂富集發酵液中丹參素的方法，包括以下步驟:
[0008](I)將產丹參素的大腸埃氏希菌發酵得到的發酵液，離心，得到上清液，調節pH =
1.5?3.0，作為上樣液，備用；
[0009](2)以上樣流速為I?3BV/h將上樣液加入到大孔吸附樹脂柱中；上樣液和大孔吸附樹脂的比例為3?5mL:1g ;
[0010](3)向大孔吸附樹脂柱中加入體積濃度為70%?90%的乙醇水溶液，以0.5?2BV/h的流速通過大孔吸附樹脂柱洗脫，收集洗脫液；所述乙醇水溶液與大孔吸附樹脂的比為I?2mL:1g ；
[0011](4)將洗脫液濃縮，干燥，得到丹參素。
[0012]步驟(I)中pH = 2.0。
[0013]大孔吸附樹脂的型號優選為X-5或ADS-17。
[0014]步驟(2)中的上樣流速優選為2BV/h。
[0015]優選的步驟⑵上樣液和大孔吸附樹脂的比例為5mL: lg。
[0016]步驟(3)中乙醇水溶液的體積濃度優選為80%。
[0017]優選的步驟(3)中乙醇水溶液為大孔吸附樹脂的比為ImL: lg。
[0018]步驟(3)中流速優選為lBV/h。
[0019]本發明的方法，具有操作簡單、收率高、環境友好等優點。本發明可用于微生物發酵法生產丹參素的分離純化，具有良好的工業應用前景。
【具體實施方式】
[0020]本發明各實施例所用的“產丹參素的大腸埃氏希菌發酵得到的發酵液”中的“大腸埃氏希菌”是以保藏編號CGMCC N0.7961的大腸埃氏希菌SyBE_002444為例。
[0021]本發明所涉及的大腸埃氏希菌SyBE-002444，建議的分類命名為大腸埃氏希菌Escherichia coli,現于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏中心登記入冊編號為CGMCC N0.7961，保藏時間為2013年7月22日，地址為北京市朝陽區北辰西路I號院3號中國科學院微生物研宄所，郵政編碼100101。
[0022]保藏編號CGMCC N0.7961的大腸埃氏希菌SyBE-002444發酵方法見中國專利CN10366737IA “一種丹參素的生物生產方法”，通過該方法獲得發酵液。
[0023]要說明的是，本發明是以上述大腸埃氏希菌SyBE-002444為例，是為了使本領域的技術人員能夠更好地理解本發明，但并不對本發明作任何限制，本領域技術人員能夠理解，其它的能夠產丹參素的大腸埃氏希重組菌也屬于本發明的保護范圍。
[0024]下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。
[0025]實施例1
[0026]一種使用大孔吸附樹脂富集發酵液中丹參素的方法，包括以下步驟:
[0027](I)將產丹參素的大腸埃氏希菌發酵得到的發酵液，離心，得到上清液，調節pH =2.0，作為上樣液，備用；
[0028](2)準確稱取預處理的型號為X-5、ADS-17的大孔吸附樹脂各50g，分別濕法裝柱(25*300帶砂芯)分別以上樣流速為2BV/h將250mL步驟(I)獲得的上樣液加入到大孔吸附樹脂柱中；
[0029](3)分別向大孔吸附樹脂柱中加入50mL體積濃度為80%的乙醇水溶液，以lBV/h的流速通過大孔吸附樹脂柱洗脫，收集10?40mL這一段洗脫液；
[0030](4)將洗脫液濃縮，干燥，得到丹參素。
[0031]計算吸附量，洗脫量和洗脫率。
[0032]X-5樹脂的吸附量為6.646mg/g，解析量為5.712mg/g，解析率為85.9%。
[0033]ADS-17樹脂的吸附量為3.373mg/g，解析量為3.357mg/g，解析率為99.5%。
[0034]實施例2
[0035]一種使用大孔吸附樹脂富集發酵液中丹參素的方法，包括以下步驟:
[0036](I)將產丹參素的大腸埃氏希菌發酵得到的發酵液，離心，得到上清液，取3份分別調節pH = 1.5，pH = 2.0，pH = 3.0，作為上樣液，備用；
[0037](2)準確稱取3份預處理的型號為X-5大孔吸附樹脂各50g，分別濕法裝柱(25*300帶砂芯)分別將250mLpH = 1.5、pH = 2.0,pH = 3.0的上樣液以上樣流速為2BV/h加入到X-5大孔吸附樹脂柱中；
[0038](3)分別向大孔吸附樹脂柱中加入50mL體積濃度為80%的乙醇水溶液，以lBV/h的流速通過大孔吸附樹脂柱洗脫，收集10?40mL這一段洗脫液；
[0039](4)將洗脫液濃縮，干燥，得到丹參素。
[0040]經計算吸附量分別為6.325mg/g，6.646mg/g，6.418mg/g。
[0041]實施例3
[0042]一種使用大孔吸附樹脂富集發酵液中丹參素的方法，包括以下步驟:
[0043](I)將產丹參素的大腸埃氏希菌發酵得到的發酵液，離心，得到上清液，調節pH =2.0，作為上樣液，備用；
[0044](2)準確稱取3份預處理的型號為X-5大孔吸附樹脂各50g，分別濕法裝柱(25*300帶砂芯)分別取上樣液150mL，200mL，250mL，以上樣流速為2BV/h加入到X_5大孔吸附樹脂柱中；
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